滲透溶脹法制備細胞核實驗
實驗材料HeLa 細胞試劑、試劑盒Earle’s 平衡鹽溶液RSB儀器、耗材玻璃蓋玻片實驗步驟1. 懸浮培養出 HeLa 細胞,600 g 離心 5 分鐘收集細胞。2. 沉淀細胞用 5 倍體積 4℃ 預冷的 Earle’s 平衡鹽溶液重新懸浮。3. 重懸浮的細胞在 4℃,600 g 離心 5 分鐘,或者如步驟 1 所說加以延長。4. 用 10 倍體積的 RSB 重懸浮洗過的細胞沉淀,使離心管在冰上放置 10 分鐘。RSB:0.1 mol/L NaCl1.5 mmol/L MgCl20.01 mol/L Tris-HCl ( pH 7.4)5. 將一巴斯德吸管頭伸入細胞懸液 0.5~0.75 cm,通過虹吸作用取少量細胞涂到一載玻片上。6. 其上覆蓋一塊 22 mm2 的玻璃蓋玻片,在相差顯微鏡下檢查細胞。7. 將膨脹的細胞吸到預冷的玻璃 Dounce 勻漿器中。8. 快速向上抽出研杵 10~12 次,破碎細胞。9. 取......閱讀全文
滲透溶脹法制備細胞核實驗
實驗材料HeLa 細胞試劑、試劑盒Earle’s 平衡鹽溶液RSB儀器、耗材玻璃蓋玻片實驗步驟1. 懸浮培養出 HeLa 細胞,600 g 離心 5 分鐘收集細胞。2. 沉淀細胞用 5 倍體積 4℃ 預冷的 Earle’s 平衡鹽溶液重新懸浮。3. 重懸浮的細胞在 4℃,600 g 離心 5 分鐘,
滲透溶脹法制備細胞核實驗
實驗材料 HeLa 細胞試劑、試劑盒 Earle’s 平衡鹽溶液RSB儀器、耗材 玻璃蓋玻片實驗步驟 1. 懸浮培養出 HeLa 細胞,600 g 離心 5 分鐘收集細胞。2. 沉淀細胞用 5 倍體積 4℃ 預冷的 Earle’s 平衡鹽溶液重新懸浮。3. 重懸浮的細胞在 4℃,600 g 離心 5
滲透溶脹法制備細胞核實驗
用滲透溶脹法從HeLa細胞懸浮培養物中制備細胞核實驗材料HeLa 細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒Earle’s 平衡鹽溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
滲透溶脹法制備細胞核實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 HeLa 細胞 試劑、試劑盒 Earle’s 平衡鹽溶液 RSB
從肝臟組織中制備細胞核實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 大鼠 試劑、試劑盒 裂解緩沖液 濃蔗糖溶液
從肝臟組織中制備細胞核實驗
實驗材料大鼠試劑、試劑盒裂解緩沖液濃蔗糖溶液儀器、耗材超速離心機組織研磨器實驗步驟1. 配制裂解緩沖液和濃蔗糖溶液(PMSF 在使用前添加),冰上放置。裂解緩沖液:0.25 mol/L 蔗糖網織紅細胞標準緩沖液(RSB)0.25 mol/L 蔗糖(超級純)10 mmol/ Tris-HCl (pH7
活化劑裂解方法制備細胞核實驗
用活化劑裂解方法從懸浮培養的HeLa細胞中制備細胞核實驗材料HeLa 細胞試劑、試劑盒TM-2 緩沖液儀器、耗材塑料離心瓶Corex 管實驗步驟1. 轉瓶培養 4 升 HeLa 細胞,便細胞濃度達到 1.0x106?細胞/ml。2. 細胞在 1 L 的塑料離心瓶中,用 Sorvall 的 RC-3B
活化劑裂解方法制備細胞核實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 HeLa 細胞 試劑、試劑盒 TM-2 緩沖液 儀器、耗材
活化劑裂解方法制備細胞核實驗
實驗材料 HeLa 細胞試劑、試劑盒 TM-2 緩沖液儀器、耗材 塑料離心瓶Corex 管實驗步驟 1. 轉瓶培養 4 升 HeLa 細胞,便細胞濃度達到 1.0x106 細胞/ml。2. 細胞在 1 L 的塑料離心瓶中,用 Sorvall 的 RC-3B 離心機,H-600A 轉頭,3000 r/
活化劑裂解方法制備細胞核實驗
用活化劑裂解方法從懸浮培養的HeLa細胞中制備細胞核實驗材料HeLa 細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒TM-2 緩沖液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
細胞及組織的破碎方法
細胞及組織破碎的方法多種多樣,大致可以分為四類:一、機械破碎:1、研磨法。2、組織搗碎法。3、離心機分離法。4、超聲波法。5、壓榨法。6、凍融法。二、溶脹和自溶:1、溶脹:細胞膜為天然的半透膜,在低滲溶液(如低濃度的稀鹽溶液)中,由于存在滲透壓差,溶劑分子大量進入細胞,從而引起細胞膜發生脹破。2、自
纖維素衍生物的特性有哪些?
纖維素是一種結晶性天然高分子,大多數酯、醚化反應是在纖維素保持固態情況下的非均相反應,反應試劑向纖維素纖維內部的擴散狀態稱可達及度。結晶區分子間排列緊密,試劑只能擴散至結晶表面。非晶區分子間排列疏松,有較多的游離羥基容易同試劑接觸,可達及度較高,較易反應。通常,結晶度高、結晶尺寸大的原料,不如結
紡織品液壓脹破強力試驗方法(膜片式脹破強力儀法)
1.范圍1.1.本方法用液壓脹破強度測試儀來測試織物的耐脹破性能。此方法被廣泛用于各種紡織品的生產測試中。1.2.此方法也可用于彈性機織物和工業用布。1.3.數值使用S.L單位作為標準。?2.原理2.1.把試樣夾固定在可變形的薄膜上﹐然后通過液壓擠壓薄膜直至織物被脹破。脹破樣品所需的總壓力和擠壓薄膜
溶出度檢查測定溶出介質的制備
應使用各品種項下規定的溶出介質,并應新鮮制備和經脫氣處理(溶解的氣體在試驗過程中可能形成氣泡,從而影響試驗結果,因此溶解的氣體應在試驗之前除去)。可采用的脫氣方法:取溶出介質,在緩慢攪拌下加熱至約41℃,并在真空條件下不斷攪拌5min以上,脫氣放冷后,再按各規定項下溶出度的要求制備溶出介質。或采用煮
高強度和抗溶脹的水凝膠材料制作仿生軟骨
軟骨是人體關節的保護性組織,因其內部基質為凝膠態,表現出優異的彈性和抗溶脹性。關節軟骨受損后,功能逐漸喪失,會嚴重影響人體的運動功能,因此在仿生材料領域,關節軟骨替代材料的研究越來越受到研究者們的青睞。其中,水凝膠材料因其與軟骨接近的網絡結構,已成為仿生軟骨材料領域研究最廣泛的體系之一。然而,常
從細胞培養液中怎么分離蛋白質
蛋白質分離純化的一般程序可分為以下幾個步驟:(一)材料的預處理及細胞破碎分離提純某一種蛋白質時,首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來并保持原來的天然狀態,不喪失活性。所以要采用適當的方法將組織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有:1.機械破碎法這種方法是利用機械力的剪切作用,使細胞破碎。常用設備有
食品樣品預處理中樣品溶液的制備方法微波溶樣法
微波溶樣法是將微波加熱和密閉加壓消化相結合的一種新型而有效的分解樣品的技術,主要用到微波爐和密封聚四氟乙烯罐。該方法的特點是快速高效,3~5min可將樣品徹底分解,試劑用量少,空白值低,揮發性元素不損失。
細胞破碎方法介紹
1. 機械法 1.1 組織搗碎 將材料配成稀糊狀液,放置于筒內約1/3體積,蓋緊筒蓋,將調速器先撥至慢處,開動開關后,逐步加速至所需速度。一般用于動物組織、植物肉質種子、柔嫩的葉芽等,轉速可高達10000rpm/M以上。由于旋轉刀片的機械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用 1.2
胚胎干細胞細胞核具有拉脹性
大部分材料在被拉伸時會收縮,比如拉長一根橡皮帶,它會變細;反過來也一樣,擠壓材料會讓它們膨脹,比如從兩邊擠壓一個網球,它的外緣會變大。最近,英國劍橋大學科學家發現胚胎干細胞的細胞核表現出一種鮮為人知的新奇性——拉脹性,即擠壓會收縮,拉伸會膨脹。相關論文發表在最近的《自然—材料》雜志上。 拉脹材
植物細胞滲透勢的測定(質壁分離法)
植物細胞是一個滲透體系,當其處于高滲溶液時,細胞失水,原生質體積縮小,發生質壁分離現象。反之,如將已經發生質壁分離的細胞轉至低滲溶液中,細胞會重新吸水,質壁分離復原。利用植物活細胞的質壁分離可以測定植物細胞的滲透勢。植物細胞的滲透勢主要取決于胞液的溶質濃度,因此又稱溶質勢。滲透勢與植物水分代謝、生長
植物細胞滲透勢的測定(質壁分離法)
實驗概要植物細胞的滲透勢主要取決于液泡的溶質濃度,因此又稱溶質勢。滲透勢與植物水分代謝、生長及抗逆性等有密切關系。已知在干旱、鹽漬等條件下,一些植物常在細胞內主動積累溶質,以降低其滲透勢,增加吸水能力,而在一定程度上維持細胞膨壓,保障細胞的生長和氣孔的開放,這種現象叫做滲透調節作用。滲透調節能力的大
膠體溶液的制備方法介紹
親水膠體的制備 制備親水溶膠首先要經過溶脹過程。溶脹是指水分子滲入到親水溶膠化合物的空隙中,與親水基團發生水化作用而使體積膨脹,結果使高分子空隙間充滿了水分子的過程,這一過程稱為有限溶脹。 由于空隙間存在水分子,降低了分子間的作用力,溶脹過程繼續進行。最后化合物完全分散在水中形成親水溶膠,這
細胞破碎和蛋白質溶解實驗_?酶溶法
實驗方法原理酶溶法就是用生物酶將細胞壁和細胞膜消化溶解的方法。因此利用此方法處理細胞必須根據細胞的結構和化學組成選擇適當的酶。常用的有溶菌酶、β-1,3-葡聚糖酶、β-1,6-葡聚糖酶、蛋白酶、甘露糖酶、糖苷酶、肽鏈內切酶、殼多糖酶等、細菌主要用溶菌酶處理,酵母需要用幾種酶進行復合處理。使用溶酶系統
酵母感受態細胞制備實驗——試劑盒制備法
實驗方法原理酵母化學感受態細胞制備試劑是一種通過化學處理,高效快速制備釀酒酵母化學感受態細胞,用于長期凍存以備后續轉化的產品。實驗材料酵母菌試劑、試劑盒YPD培養基酵母化學感受態細胞制備試劑盒儀器、耗材離心管冰箱冷凍管保溫冰盒實驗步驟一、挑取酵母受體菌的新鮮的單菌落(4℃放置不超過3周的也可以),接
細胞介導的細胞毒作用(CMC)檢測法:細胞的制備
CMC中效應細胞的制備1)用淋巴細胞分離液分離PBMC1.抽取正常人靜脈血加到肝素抗凝管中,加2倍量磷酸鹽(PBS)懸浮細胞。將此懸液小心加在淋巴細胞分離液上,400×g離心30分鐘。2.離心后紅細胞在管底,PBMC在血漿和淋巴細胞分離液的交界面。收集PBMC,用PBS洗滌細胞兩次,每次離心150×
羊水細胞染色體制備方法(原位法)
細胞培養1. 將羊水(約20ml)轉移到無菌的離心管中,1000rpm離心10分鐘;2. 去除上清液,用于其它分析,保留細胞懸液約0.5~1ml,用培養基混勻到2~2.5ml左右;3. 將細胞懸液平分到3只Chromslide培養皿中;4. 培養24/48小時后,向每只Chromslide培養皿中加
滲透細胞蛋白磷酸化實驗——-制備用于等電聚焦的天然細胞
實驗材料待標記的培養細胞預熱研究用細胞(傳代細胞或被分離的原代細胞)試劑、試劑盒4℃ 雙向-PAGE裂解緩沖液雙向-PAGE樣品緩沖液細胞培養液細胞外緩沖液有滲透性的37℃緩沖液鏈球菌溶血素 O 工作溶液ATP 儲存溶液[γ-32P] ATP研究用藥理試劑受體激動劑儀器、耗材浴式超聲儀干冰 乙醇浴凍
滲透細胞蛋白磷酸化實驗——-制備用于SDSPAGE的天然細胞
實驗材料待標記的培養細胞預熱研究用細胞(傳代細胞或被分離的原代細胞)試劑、試劑盒2 × SDS-PAGE 樣品緩沖液細胞培養液細胞外緩沖液有滲透性的37℃緩沖液鏈球菌溶血素 O 工作溶液ATP 儲存溶液[γ-32P] ATP研究用藥理試劑受體激動劑2 × 冰裂解緩沖液蛋白抑制劑儲存溶液儀器、耗材4℃
細胞破碎和蛋白質溶解實驗_?化學滲透法
實驗方法原理有些有機溶劑(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性劑(SDS、Triton X-100)、金屬整合劑(EDTA) 、變性劑(鹽酸胍、脲)等化學藥品都可以改變細胞壁或膜的通透性,使內含物有選擇地滲透出來。這種處理方式就是化學滲透法。本文僅以表面活性劑 Triton X-100 為例簡要介紹如下。
關于口腔崩解片的常用輔料介紹
交聯羧甲纖維素鈉(CCNa)、交聯羧甲淀粉鈉(CCMS-Na)、交聯聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)、微晶纖維素(MCC)、低取代羧丙基纖維素(L-HPC)以及處理瓊脂(TAG)、明膠、甘露醇、乳糖等輔料。 交聯羧甲基纖維素鈉(CCNa)、交聯聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)、交聯羧甲基淀粉鈉(CCMS-