cDNA探針的制備方法
首先需分離純化相應mRNA，這從含有大量mRNA的組織、細胞中比較容易做到，如從造血細胞中制備α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后，在逆轉錄酶的作用下，就可以合成與之互補的DNA(即cDNA)，cDNA與待測基因的編碼區有完全相同的堿基順序，但內含子已在加工過程中切除。......閱讀全文
cDNA－探針的制備方法
首先需分離純化相應mRNA，這從含有大量mRNA的組織、細胞中比較容易做到，如從造血細胞中制備α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后，在逆轉錄酶的作用下，就可以合成與之互補的DNA(即cDNA)，cDNA與待測基因的編碼區有完全相同的堿基順序，但內含子已在加工過程中切除。
cDNA探針的原理簡介
cDNA（complementary DNA）是指互補于mRNA的DNA分子。而以此制作的DNA探針稱為cDNA探針。 cDNA是由RNA經一種稱為逆轉錄酶（reverse transcriptase）的DNA聚合酶催化產生的，這種逆錄酶是Temin等在70年代初研究致癌RNA病毒時發現的。該
基因探針的制備－方法
進行分子突變需要大量的探針拷貝，后者一般是通過分子克隆（molecular cloning）獲得的。克隆是指用無性繁殖方法獲得同一個體、細胞或分子的大量復制品。當制備基因組DNA探針進，應先制備基因組文庫，即把基因組DNA打斷，或用限制性酶作不完全水解，得到許多大小不等的隨機片段，將這些片段體外重組
DNA探針的制備方法
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針，常常是比較煩瑣的。以細菌為例，細菌的基因組大小約為5×106堿基，約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針，通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法，即將細菌DNA切成小片段后（如用限制性內切酶做不完全水解）分別
求教cDNA制備的一般方法
一、制備用于克隆cDNA的mRNA1.Oligotex mRNA Kits (QIAGEN）法2.磁珠法分離mRNA注意：一般需要做mRNA完整性的檢測（檢查mRNA在無細胞翻譯體系指導合成高分子量蛋白質的能力、mRNA分子的大小等）；如果用于制備cDNA文庫則還需要檢測mRNA在細胞中的豐度。二、
關于cDNA探針的意義的介紹
逆轉錄現在已成為一項重要的分子生物學技術，廣泛用于基因的克隆和表達。從逆轉錄病毒中提取的逆轉錄酶已商品化，最常用的有AMV逆轉錄酶。利用真核Mrna3’末端存在一段聚腺苷酸尾，可以合成一段寡聚胸苷酸（oligo(dT)）用作引物，在逆轉錄酶催化下合成互補于mRNA的cRNA鏈，然后再用RNase
制備cDNA的基本介紹
制備互補DNA,往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質,則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分 [2] 。就胰島B細胞而論,此細胞含有高水平胰島素前體mRNA,后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體,如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原
cDNA的制備與檢測
[實驗原理]總RNA，經寡聚(d丁)纖維素親和層析柱分離出mRNA，以寡聚(d丁)為引物，經反轉錄合成雙鏈cDNA。先用反轉錄酶合成第一條cDNA鏈；經堿降解作用除去RNA模板后用大腸桿菌DNA聚合酶，以第一條鏈cDNA的3’末端結構為引物合成第二鏈，最后形成雙鏈cDNA。[儀器、材料與試劑](一)
基因組探針的制備方法
進行分子突變需要大量的探針拷貝，后者一般是通過分子克隆（molecular cloning）獲得的。克隆是指用無性繁殖方法獲得同一個體、細胞或分子的大量復制品。當制備基因組DNA探針進，應先制備基因組文庫，即把基因組DNA打斷，或用限制性酶作不完全水解，得到許多大小不等的隨機片段，將這些片段體外重組
寡核苷酸探針的制備方法
寡核苷酸探針是人工合成的，與已知基因DNA互補的，長度可從十幾到幾十個核苷酸的片段。如僅知蛋白質的氨基酸順序量，也可以按氨基酸的密碼推導出核苷酸序列，并用化學方法合成。
蛋白芯片技術的探針的制備方法
低密度蛋白質芯片的探針包括特定的抗原、抗體、酶、吸水或疏水物質、結合某些陽離子或陰離子的化學集團、受體和免疫復合物等具有生物活性的蛋白質。制備時常常采用直接點樣法，以避免蛋白質的空間結構改變。保持它和樣品的特異性結合能力。高密度蛋白質芯片一般為基因表達產物，如一個cDNA文庫所產生的幾乎所有蛋白質均
常用DAN探針制備的方法介紹轉錄標記
轉錄標記(transcription labeling)是利用啟動子(oromoter)結合 RNA 聚合酶啟動轉錄的特性設計的一種標記方法。Melotn(1984)等將目的 DNA 片段克隆到含 SP 啟動子的載體上,目的基因位于啟動子下游,加上 RNA 聚合酶,轉錄合成了 RNA 探針。與切口平
常用DAN探針制備的方法介紹PCR－標記
PCR 技術是1985年 KarryMullis 等首先創建的可在體外迅速、大量地擴增一定長度的核苷酸序列的技術。PCR問世以來已廣泛應用于分子生物學研究和疾病診斷中。此技術還應用于核酸探針的制備。Girgsi 等(1988)應用 PCR 從多序列制備了 DNA 探針。Shcow-aletr 和 S
蛋白質芯片技術探針的制備方法
低密度蛋白質芯片的探針包括特定的抗原、抗體、酶、吸水或疏水物質、結合某些陽離子或陰離子的化學集團、受體和免疫復合物等具有生物活性的蛋白質。制備時常常采用直接點樣法，以避免蛋白質的空間結構改變。保持它和樣品的特異性結合能力。高密度蛋白質芯片一般為基因表達產物，如一個cDNA文庫所產生的幾乎所有蛋白質均
常用DAN探針制備的方法介紹切口平移
切口平移(nick translation)是制備核酸探針的常用方法之一。該方法用 DNase Ⅰ在雙鏈 DNA 內部切開若干個單鏈切口形成3'-OH 末端,而不打斷 DNA 的雙鏈結構;用大腸桿菌 DNA 聚合酶Ⅰ的5'→3'核酸外切酶活性,從游離5'端降解雙鏈 D
關于禽流感基因探針制備方法介紹
將禽流感病毒H9N2亞型毒株核蛋白(NP)基因3′端較為保守的、約350bp的編碼序列通過限制性內切酶Hae?切割、分離后,用隨機引物法制備Digoxigenin2112dUTP標記探針。測定該探針的濃度為100Lg?ml。特異性試驗發現該探針只能與實驗室構建的、含有NP基因的重組載體pGEM2TE
“DNA探針”的制備過程
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后(如用限制性內切酶做不完全水解)分別
簡述基因探針的制備
進行分子突變需要大量的探針拷貝，后者一般是通過分子克隆（molecular cloning）獲得的。克隆是指用無性繁殖方法獲得同一個體、細胞或分子的大量復制品。當制備基因組DNA探針前，應先制備基因組文庫，即把基因組DNA打斷，或用限制性酶作不完全水解，得到許多大小不等的隨機片段，將這些片段體外
分子雜交CDNA探針的技術特點及應用介紹
cDNA（complementary DNA）是指互補于mRNA的DNA分子。cDNA是由RNA經一種稱為逆轉錄酶（reversetranscriptase）的DNA聚合酶催化產生的，這種逆錄酶是Temin等在70年代初研究致癌RNA病毒時發現的。該酶以RNA為模板，根據堿基配對原則，按照RNA的核
高地辛標記的DNA探針制備實驗——基本方法
實驗材料DNA試劑、試劑盒dTTPdUTPEDTASDS儀器、耗材水浴鍋培養箱實驗步驟1. ?建立一個標準100 μl 反應體系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP貯液，DNA酶Ⅰ酶量不變，15℃溫育2 h。2. ?取小份在微型膠中進行電泳以檢測探針大小。3. ?繼續反應直到獲得大
常用DAN探針制備的方法介紹隨機引物標記
隨機引物標記(random primer labeling)是利用單鏈 DNA 與六核苷酸(hexamer)退火結合,以六核苷酸為引物,加入4種 dNTP,其中1種標有同位素或生物素,用 Klenow 片段催化合成帶有標記的互補 DNA 鏈,標記率高而且不受瓊脂糖影響。該法不適于標記 RNA。Fei
常用DAN探針制備的方法介紹末端標記
末端標記(end labeling)是利用酶學方法或化學方法將標記物,如同位素、生物素、熒光素等標記到核苷酸鏈的5'或3'端制備探針。酶學方法中常用的酶有:經枯草桿菌蛋白酶水解大腸桿菌 DNA 聚合酶Ⅰ形成具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性
cDNA克隆的方法
cDNA克隆( cDNA cloing)與RNA互補的雙鏈DNA片段，而且它能攜在克隆載體中。通常用于克隆真核生物mRNA的DNA拷貝。由于cDNA持貝是一個成熟的信息分子拷貝，因此，無內含子順序。如果在其克隆的藏體中連上一個適當的活動子序，它可在任何宿主體內得以迅速表達 。
基因探針的制備相關介紹
進行分子突變需要大量的探針拷貝,后者一般是通過分子克隆（molecular cloning）獲得的。克隆是指用無性繁殖方法獲得同一個體、細胞或分子的大量復制品。當制備基因組DNA探針前,應先制備基因組文庫,即把基因組DNA打斷,或用限制性酶作不完全水解,得到許多大小不等的隨機片段,將這些片段體外
原子力顯微鏡探針、原子力顯微鏡及探針的制備方法
原子力顯微鏡探針、原子力顯微鏡及探針的制備方法。原子力顯微鏡探針包括探針本體和設置在探針本體的針尖一側的接觸體，接觸體具有連接段和接觸段，接觸段具有接觸端面；接觸段為二維材料，且接觸端面為原子級光滑且平整的單晶界面。本發明ZL技術的原子力顯微鏡探針可精確地檢測受測樣品的各種性質。介紹隨著微米納米科學
總cDNA探針的同位素隨機標記及點雜交
實驗概要本實驗方法介紹了總cDNA探針的同位素隨機標記及點膜雜交技術。實驗步驟1. 總cDNA探針的同位素隨機標記參照Promega公司試劑盒說明書提供的實驗流程進行。?? 1) 將除Klenow大片段外的所有藥品，在冰上溶化；?? 2) 取25ng總cDNA作為模板，100℃，l0min，立即冰上
cDNA文庫的物化方法
基因工程初始階段所用的方法，已不用。利用核酸雙螺旋之間存在著堿基G C，A T配對特性，分離目的基因。 例如：海膽rDNA分子內其G C含量可以達63%（其穩定性高，溶解溫度高），通過熱變性和S1酶解處理可得到提純50倍的rDNA，最后經氯化銫平衡梯度離心，得到相對分子量為1.9X107Dal
常用DAN探針制備的方法介紹光敏生物素標記
光敏生物素標記(photobiotin labeling)是Forster(1985)等報道的核酸探針制備方法。光敏生物素是一種可用光照活化的生物素衍生物,它的乙酸鹽很容易溶于水,在水溶液中將光敏生物素乙酸鹽與需要標記的核酸混合,用強的可見光照射,就可將生物素標記在單鏈或雙鏈的 DNA 或 RNA
PCR擴增制備帶標記探針
實驗概要用標記脫氧單核苷酸部分代替PCR反應體系中的脫氧核苷酸（一般是帶標記的dUTP代替dTTP），經PCR擴增后標記基團隨機攙入擴增產物－DNA探針中。這樣使探針濃度高，可檢測標記基團量多，靈敏度高，與缺口平移法制備探針相比，具有方便簡捷的特點，并且由于具高靈敏度因此在檢測低豐度，低拷貝數的目的
cDNA文庫組標準流程四:載體制備
1．pBlueScriptII的提取1．取1ul商品的pBlueScriptII，轉化入大腸桿菌宿主菌中，取5ul轉化產物均勻涂布在含AMP的LB平板上，37℃培養過夜。2．第二天取一只無菌的50ml離心管，加入10ml AMP抗性的LB液體培養基，挑單克隆于離心管中，37℃，250rpm，培養過夜