PCR 技術是1985年 KarryMullis 等首先創建的可在體外迅速、大量地擴增一定長度的核苷酸序列的技術。PCR問世以來已廣泛應用于分子生物學研究和疾病診斷中。此技術還應用于核酸探針的制備。Girgsi 等(1988)應用 PCR 從多序列制備了 DNA 探針。Shcow-aletr 和 Sommer 應用 PCR 制備了放射性標記 DNA 和 RNA 探針。PCR 標記(polymerase chain reaction labeling)方法是:組分為模板 DNA(100pg/μL),15μL dCTP(5mmol/L,32P標記),引物混合物(每一種15堿基寡核苷酸引物濃度為20mol/L 的水溶液),1×20倍濃縮無dCTP的反應混合物(1mol/L KCl,0.2mol/L Tris-HCl,30mmol/L MgCl2,0.2%明膠,分別為4mmol/L 的 dATP、dGTP、dTTP),1μL 水和20μL 礦物油。1單位Tag,DMA 聚合酶擴增94℃ 5min,50℃退火2min、72℃延伸3min、94℃變性 1min 的 PCR 流程進行30個循環,后延伸10min。這樣dCT 32P在PCR 循環過程中就摻入擴增的 DNA 鏈中,經分離制備出放射性標記探針。PCR 標記具有以下優點:
(1)標記物特異,活性穩定。
(2)易于控制特異活性和標記物的數量。
(3)可高效率的標記少于500bp 的片段。
(4)可高效率地摻入到大范圍的模板 DNA 中。
(5)可直接標記基因組 DNA。