常用DAN探針制備的方法介紹PCR標記
PCR 技術是1985年 KarryMullis 等首先創建的可在體外迅速、大量地擴增一定長度的核苷酸序列的技術。PCR問世以來已廣泛應用于分子生物學研究和疾病診斷中。此技術還應用于核酸探針的制備。Girgsi 等(1988)應用 PCR 從多序列制備了 DNA 探針。Shcow-aletr 和 Sommer 應用 PCR 制備了放射性標記 DNA 和 RNA 探針。PCR 標記(polymerase chain reaction labeling)方法是:組分為模板 DNA(100pg/μL),15μL dCTP(5mmol/L,32P標記),引物混合物(每一種15堿基寡核苷酸引物濃度為20mol/L 的水溶液),1×20倍濃縮無dCTP的反應混合物(1mol/L KCl,0.2mol/L Tris-HCl,30mmol/L MgCl2,0.2%明膠,分別為4mmol/L 的 dATP、dGTP、dTTP),1μL 水和20μ......閱讀全文
常用DAN探針制備的方法介紹PCR－標記
PCR 技術是1985年 KarryMullis 等首先創建的可在體外迅速、大量地擴增一定長度的核苷酸序列的技術。PCR問世以來已廣泛應用于分子生物學研究和疾病診斷中。此技術還應用于核酸探針的制備。Girgsi 等(1988)應用 PCR 從多序列制備了 DNA 探針。Shcow-aletr 和 S
常用DAN探針制備的方法介紹轉錄標記
轉錄標記(transcription labeling)是利用啟動子(oromoter)結合 RNA 聚合酶啟動轉錄的特性設計的一種標記方法。Melotn(1984)等將目的 DNA 片段克隆到含 SP 啟動子的載體上,目的基因位于啟動子下游,加上 RNA 聚合酶,轉錄合成了 RNA 探針。與切口平
常用DAN探針制備的方法介紹末端標記
末端標記(end labeling)是利用酶學方法或化學方法將標記物,如同位素、生物素、熒光素等標記到核苷酸鏈的5'或3'端制備探針。酶學方法中常用的酶有:經枯草桿菌蛋白酶水解大腸桿菌 DNA 聚合酶Ⅰ形成具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性
常用DAN探針制備的方法介紹隨機引物標記
隨機引物標記(random primer labeling)是利用單鏈 DNA 與六核苷酸(hexamer)退火結合,以六核苷酸為引物,加入4種 dNTP,其中1種標有同位素或生物素,用 Klenow 片段催化合成帶有標記的互補 DNA 鏈,標記率高而且不受瓊脂糖影響。該法不適于標記 RNA。Fei
常用DAN探針制備的方法介紹光敏生物素標記
光敏生物素標記(photobiotin labeling)是Forster(1985)等報道的核酸探針制備方法。光敏生物素是一種可用光照活化的生物素衍生物,它的乙酸鹽很容易溶于水,在水溶液中將光敏生物素乙酸鹽與需要標記的核酸混合,用強的可見光照射,就可將生物素標記在單鏈或雙鏈的 DNA 或 RNA
常用DAN探針制備的方法介紹切口平移
切口平移(nick translation)是制備核酸探針的常用方法之一。該方法用 DNase Ⅰ在雙鏈 DNA 內部切開若干個單鏈切口形成3'-OH 末端,而不打斷 DNA 的雙鏈結構;用大腸桿菌 DNA 聚合酶Ⅰ的5'→3'核酸外切酶活性,從游離5'端降解雙鏈 D
PCR擴增制備帶標記探針
實驗概要用標記脫氧單核苷酸部分代替PCR反應體系中的脫氧核苷酸（一般是帶標記的dUTP代替dTTP），經PCR擴增后標記基團隨機攙入擴增產物－DNA探針中。這樣使探針濃度高，可檢測標記基團量多，靈敏度高，與缺口平移法制備探針相比，具有方便簡捷的特點，并且由于具高靈敏度因此在檢測低豐度，低拷貝數的目的
PCR擴增標記法探針標記
PCR擴增標記法探針標記???? PCR擴增標記法的原理與普通的核酸PCR相同。即Taq?DNA多聚酶以DNA為模板，在特異引物引導下，在PCR儀中合成cDNA探針。由于在反應體系中加入一定量的標記dNTP，因此擴增的同時又是一個標記過程。cDNA探針PCR擴增法標記原理
基因探針的標記方法介紹
①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5′端核苷酸,同時在3′端修復加入被標記核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻,多用于大分子DNA標記,(>100
基因探針的標記方法介紹
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交，有必要對探針加以標記，以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素、地高辛配體等作為標記物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。
關于探針標記方法的介紹
①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´；端核苷酸，同時在3´；端修復加入被標記核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻，多用于大分
DNA探針標記常用試劑的配制
（1）10 ×缺口平移緩沖液：200mmol/l Tris-HCl,pH7.4含50mmol/L MgCl2；100mmol/Lβ-巰基乙醇、1mg/ml BSA。 （2）缺口平移反應終止液：200mmol/L NaCl；10mmol/l Tris-HCl,pH7.4； 11mmol/L
DAN探針檢測的技術原理
DNA 或 RNA 片段能識別特定序列基因的 DNA 片段,能與互補的核苷酸序列特異結合,這種用同位素或非同位素標記的單鏈 DNA 片段即為核酸探針。核酸探針技術是將雙鏈 DNA 經加熱或堿處理,使堿基對間的氫鏈被破壞而變性,解開成兩條互補的單鏈。它們在一定溫度和中性鹽溶液條件下,又可按 A-T、G
高地辛標記的DNA探針制備實驗——基本方法
實驗材料DNA試劑、試劑盒dTTPdUTPEDTASDS儀器、耗材水浴鍋培養箱實驗步驟1. ?建立一個標準100 μl 反應體系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP貯液，DNA酶Ⅰ酶量不變，15℃溫育2 h。2. ?取小份在微型膠中進行電泳以檢測探針大小。3. ?繼續反應直到獲得大
關于基因探針標記的方法介紹
探針的標記方式有放射性標記和非放射性標記。標記物質有放射性元素（如32P等）和非放射性物質（如生物素、地高辛等）。32P是最常用的核苷酸標記同位素，被標記的dNTP本身就帶有磷酸基團，便于標記。特點是比活性高，可達9000Ci/mmol；發射的β射線能量高。用它標記的探針自顯影時間短，靈敏度高。
探針標記方法的主要類型介紹
①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5′端核苷酸，同時在3′端修復加入被標記核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻，多用于大分子DNA標記，(>1000b
末端標記法介紹DNA探針的標記方法
末端標記法不是將DNA進行全長標記，只在其5'端或3’端導入標記物進行部分標記。該標記方法可得到全長DNA探針，因為攜帶的標記分子較少，所以標記比活性不高。
常用RNA標記方法介紹
RNA標記方法：按反應機制分如下四類：直接標記法，加尾標記法，基于逆轉錄反應的標記方法，基于RNA克隆擴增的標記方法。常用于RNA標記的方法按標記物性質分為：放射性同位素標記：32P、35S、3H非放射性標記：半抗原熒光素化學發光物質地高辛地高辛標記RNA常用的方法是將DIG與UTP共價結合形成DI
標記抗體、配體等常用的熒光探針
?標記抗體、配體等常用的熒光探針?共聚焦激光掃描顯微鏡不僅可用免疫熒光分析固定的細胞或組織切片，還可用于分析活細胞，得到特異性抗體或其他熒光免疫探針識別靶分子的表達、定位、分布變化等信息。標記抗體、配體或蛋白質等較通用的有異硫氰酸熒光素(Fluorescein isothiocyanate，FITC
簡述探針標記方法
①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´；端核苷酸，同時在3´；端修復加入被標記核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻，多用于大分
高地辛標記的DNA探針制備實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 dTTPdUTPEDTASDS儀器、耗材 水浴鍋培養箱實驗步驟 1. ?建立一個標準100 μl 反應體系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP貯液，DNA酶Ⅰ酶量不變，15℃溫育2 h。2. ?取小份在微型膠中進行電泳以檢測探針大小。3. ?繼續反應直
高地辛標記的DNA探針制備實驗
基本方法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
基因探針的標記方法
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交，有必要對探針加以標記，以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素、地高辛配體等作為標記物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。
地高辛標記RNA常用的方法介紹
地高辛標記RNA常用的方法是將DIG與UTP共價結合形成DIG-UTP，以DIG-UTP、ATP、CTP、GTP為底物通過RNA聚合酶T7、SP6經體外轉錄合成標記RNA。此法多用于RNA探針的制備，一般每20~25個核苷酸可引入一個地高辛分子。5'末端標記法5'末端標記法是通過化學
基因探針標記的介紹
探針是能與特異靶分子反應并帶有供反應后檢測的合適標記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補的原理,用特異的基因探針即識別特異堿基序列的有標記的一段單鏈DNA（或RNA）分子,與被測定的靶序列互補,以檢測被測靶序列的技術叫核酸探針技術。探針制備就是將目的基因進行標記。特異性探針有三種形式——cDNA、R
Real－time－PCR－的標記方法介紹
?Real time PCR 的標記方法一般包括以下幾類：熒光染料嵌合法（SYBR Green I）和熒光探針法(Taqman探針）和分子信標法。? ? SYBR Green I 法? ??? ? Taqman探針法? ??? ??分子信標法? ??
隨機引物法介紹DNA探針的標記方法
變性的探針溶液加入6個核苷酸的隨機DNA小片段，作為引物，當后者與單鏈DNA多個部位互補結合后，按堿基互補原則不斷在其3'-OH端添加同位素標記的單核苷酸，這樣也可以獲得放射性比活性很高的DNA探針。
關于基因探針的標記介紹
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交，有必要對探針加以標記，以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素-親合素系統 、地高辛配體等作為標記物的方法。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。
關于基因探針的標記介紹
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標記,以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素-親合素系統、地高辛配體等作為標記物的方法。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。最常
realtime－PCR－常用儀器和探針
SYBR Green I：一種DNA結合染料，能非特異性地與雙鏈DNA結合，結合后發出熒光，價格便宜，但因無特異性，易受到非特異性擴增和引物二聚體地的影響，是定量結果不可靠。可用融解曲線分析區分特異性和非特異性擴增，引物的設計和反應條件的優化對消除非特異性熒光有很大幫助。 2.Taqman探針：