逆轉錄聚合酶鏈反應的合成cDNA引物的選擇
1． 隨機六聚體引物：當特定mRNA由于含有使反轉錄酶終止的序列而難于拷貝其全長序列時，可采用隨機六聚體引物這一不特異的引物來拷貝全長mRNA。用此種方法時，體系中所有RNA分子全部充當了cDNA第一鏈模板，PCR引物在擴增過程中賦予所需要的特異性。通常用此引物合成的cDNA中96%來源于rRNA。2． Oligo(dT)：是一種對mRNA特異的方法。因絕大多數真核細胞mRNA具有3’端Poly(A)尾，此引物與其配對，僅mRNA可被轉錄。由于Poly(A)RNA僅占總RNA的1-4%，故此種引物合成的cDNA比隨機六聚體作為引物和得到的cDNA在數量和復雜性方面均要小。3． 特異性引物：最特異的引發方法是用含目標RNA的互補序列的寡核苷酸作為引物，若PCR反應用二種特異性引物，第一條鏈的合成可由與mRNA 3’端最靠近的配對引物起始。用此類引物僅產生所需要的cDNA，導致更為特異的PCR擴增。......閱讀全文
逆轉錄聚合酶鏈反應的合成cDNA引物的選擇
1． 隨機六聚體引物：當特定mRNA由于含有使反轉錄酶終止的序列而難于拷貝其全長序列時，可采用隨機六聚體引物這一不特異的引物來拷貝全長mRNA。用此種方法時，體系中所有RNA分子全部充當了cDNA第一鏈模板，PCR引物在擴增過程中賦予所需要的特異性。通常用此引物合成的cDNA中96%來源于rRNA。
概述合成cDNA引物的選擇
1、隨機六聚體引物：當特定mRNA由于含有使反轉錄酶終止的序列而難于拷貝其全長序列時，可采用隨機六聚體引物這一不特異的引物來拷貝全長mRNA。用此種方法時，體系中所有RNA分子全部充當了cDNA第一鏈模板，PCR引物在擴增過程中賦予所需要的特異性。通常用此引物合成的cDNA中96%來源于rRNA
逆轉錄聚合酶鏈反應中cDNA產量的很低什么原因
可能的原因：1. RNA模板質量低。2. 對mRNA濃度估計過高。3. 反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足。4.?同位素磷32過期。5. 反應體積過大，不應超過50 μl。
逆轉錄聚合酶鏈反應
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得
逆轉錄聚合酶鏈反應
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得
逆轉錄聚合酶鏈反應的原理
組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA.再以cDNA為模板進行PCR擴增,而獲得目的基因或檢測基因表達.RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數量級,使一些極為微量RNA樣品分析成為可能.該技術主要用于:分析基因的轉錄產物,
聚合酶鏈反應的引物設計原則
PCR反應中有兩條引物，即5′端引物和3′引物。設計引物時以一條DNA單鏈為基準（常以信息鏈為基準），5′端引物與位于待擴增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物與位于待擴增片段3′端的一小段DNA序列互補。（1）引物設計的基本原則引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。引物堿基：G+
HCV－cDNA/聚合酶鏈反應的相關介紹
(HCV cDNA/Polymerase Chain Reaction,RTPCR)測定肝和血清中HCV RNA。 本法是將HCV RNA逆轉錄為HCV DNA，選用高度保守的5′非編碼區引物擴增放大后作電泳觀察結果。本法較靈敏。由于肝和血清中HCV RNA出現較抗-HCV為早，一些HCV感染
逆轉錄聚合酶鏈反應（RTPCR，rtpcr）
逆轉錄-聚合酶鏈反應?（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）可以：(1）分析基因的轉錄產物；（2）獲取目的基因；（3）合成cDNA探針；（4）構建RNA高效轉錄系統。實驗方法原理逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Tran
逆轉錄聚合酶鏈反應的技術應用
RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術主要用于：分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構建RNA高效轉錄系統。
實時逆轉錄聚合酶鏈反應的簡介
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而
逆轉錄聚合酶鏈反應的操作步驟
1. 總RNA的提取：見相關內容。2. cDNA第一鏈的合成：試劑公司有多種cDNA第一鏈試劑盒出售，其原理基本相同，但操作步驟不一。現以GIBICOL公司提供的SuperScript Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis 試
逆轉錄聚合酶鏈反應所需試劑
1．RMA提取試劑2．第一鏈cDNA合成試劑盒3．dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM4．Taq DNA聚合酶
逆轉錄聚合酶鏈反應的注意事項
1． 在實驗過程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在總RNA的提取過程中，注意避免mRNA的斷裂。2． 為了防止非特異性擴增，必須設陰性對照。3． 內參的設定：主要為了用于靶RNA的定量。常用的內參有G3PD（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）、β-Actin（β-肌動蛋白）等。其目的在于避免RNA定
實時逆轉錄聚合酶鏈反應的操作步驟
1. 總RNA的提取：見相關內容。 2. cDNA第一鏈的合成：試劑公司有多種cDNA第一鏈試劑盒出售，其原理基本相同，但操作步驟不一。現以GIBICOL公司提供的SuperScript Preamplification System for First Strand cDNA Synthes
聚合酶鏈反應（PCR）－技術引物的最終評估
當我們經過初次篩選和二次篩選后得到的那對引物便可以用于合成,合成后我們經過 PCR擴增可以對引物進行最終的評估。一是PCR擴增的特異性和效率。經過PCR條件優化后能否獲得特異性條帶,即無目的條帶之外的多余條帶。另外,PCR產物的量是否足夠,即無不出帶和條帶很弱的現象。二是以DNA為模板設計引物時,P
影響聚合酶鏈反應的引物設計相關介紹
要擴增模板DNA，首先要設計兩條寡核苷酸引物，所謂引物，實際上就是兩段與待擴增靶DNA序列互補的寡核苷酸片段，兩引物間距離決定擴增片段的長度，兩引物的5’端決定擴增產物的兩個5’末端位置。由此可見，引物是決定PCR擴增片段長度、位置和結果的關鍵，引物設計也就更為重要。 引物設計的必要條件是與引
關于逆轉錄PCR引物的選擇
對靶序列中潛在的引物位點進行分析， 這些位點應該不會形成同源多聚體結構，也沒有明顯的形成二級結構的趨勢，不會自身互補，與基因組中的其他序列無顯著的同源性。 （1）依據寡核苷酸引物與其靶序列形成雜合分子的熔解度的計算中提供的公式計算各引物的熔解溫度。 （2）選擇一對匹配完好的正向和反向引物。兩
逆轉錄聚合酶鏈反應中文實驗方法
逆轉錄-聚合酶鏈反應?逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板
逆轉錄聚合酶鏈反應實驗方法
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得
逆轉錄聚合酶鏈反應實驗方法
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增
逆轉錄聚合酶鏈反應實驗方法
?逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲
cDNA的制備與檢測
[實驗原理]總RNA，經寡聚(d丁)纖維素親和層析柱分離出mRNA，以寡聚(d丁)為引物，經反轉錄合成雙鏈cDNA。先用反轉錄酶合成第一條cDNA鏈；經堿降解作用除去RNA模板后用大腸桿菌DNA聚合酶，以第一條鏈cDNA的3’末端結構為引物合成第二鏈，最后形成雙鏈cDNA。[儀器、材料與試劑](一)
實時逆轉錄聚合酶鏈反應的注意事項
1、在實驗過程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在總RNA的提取過程中，注意避免mRNA的斷裂。 2、為了防止非特異性擴增，必須設陰性對照。 3、內參的設定：主要為了用于靶RNA的定量。常用的內參有G3PD（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）、β-Actin（β-肌動蛋白）等。其目的在于避免R
逆轉錄聚合酶鏈反應的方法及應用介紹
中文名稱逆轉錄聚合酶鏈反應英文名稱reverse transcription PCR;RT-PCR定 義先將RNA通過逆轉錄酶的作用合成與之互補的DNA鏈，再以該鏈作模板進行聚合酶鏈反應擴增特定RNA序列的方法。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
熒光RNA隨機引物觸發的聚合酶鏈反應實驗
實驗步驟 ##一、 從組織和培養細胞中分離RNA1.TRIzol試 劑（Invitrogen)。該試劑含有苯酚和硫氰酸鹽化合物，操作時應穿實驗服，戴手套，存放于 4°C 。2.氯仿。3.異丙醇。4.乙醇。5.焦炭酸二乙酯（DEPC) 處理的水
關于基因擴增技術—聚合酶鏈反應的引物介紹
基因擴增技術—聚合酶鏈反應結果的特異性取決于引物的特異性，擴增產物的大小也是由特異引物限定的。因此，引物的設計與合成對PCR的成功與否起著決定性的作用。合成的引物必須經聚丙烯酰胺凝膠電泳或反向高壓液相層析（HPLC）純化。因為合成的引物中會有相當數量的“錯誤序列”，其中包括不完整的序列和脫嘌呤產
熒光RNA隨機引物觸發的聚合酶鏈反應實驗
差異顯示聚合酶鏈反應（PCR) 可促進在諸多物種中與污染暴露相關的新分子標志物的鑒定。至今，已有多種差異顯示方法被詳細描述。這里，我們描述了一種改良的RNA 隨機引物觸發的 PCR 方 法（RNAarbitrarily primed PCR， RAP-PCR) , 主要涉及通過 羅 丹 明（rhod
逆轉錄PCR的原理及操作注意事項
逆轉錄PCR?（?RT-PCR?）的原理逆轉錄PCR (RT-PCR?)具有較高的靈敏性、操作簡單等優點，常用于基因定量分析、生物學檢測等，此外常用逆轉錄PCR克隆目的基因。 本文主要講述了逆轉錄PCR的原理、重要參數以及操作注意事項。cDNA的合成是RT-PCR?的重要環節。以mRNA為模板，在逆
逆轉錄PCR的原理及操作注意事項
逆轉錄PCR?（?RT-PCR?）的原理逆轉錄PCR (RT-PCR?)具有較高的靈敏性、操作簡單等優點，常用于基因定量分析、生物學檢測等，此外常用逆轉錄PCR克隆目的基因。 本文主要講述了逆轉錄PCR的原理、重要參數以及操作注意事項。cDNA的合成是RT-PCR?的重要環節。以mRNA為模板，在逆