熒光RNA隨機引物觸發的聚合酶鏈反應實驗
實驗步驟 ##一、 從組織和培養細胞中分離RNA1.TRIzol試 劑(Invitrogen)。該試劑含有苯酚和硫氰酸鹽化合物,操作時應穿實驗服,戴手套,存放于 4°C 。2.氯仿。3.異丙醇。4.乙醇。5.焦炭酸二乙酯(DEPC) 處理的水。6.無DNA試劑盒(Ambion)。貯存于一 20°C 。##二、 CDNA 合成1.Superscript? II, RNase H-反 轉 錄 酶(200 U/(nL; Invitrogen)。 一 20°C下可穩定忙存兩年以上。2.5X 第一鏈合成緩沖液: 250 mmol/LTris-HCI, pH 8. 3, 375 mmol/L K C l, 15mmol,L MgCl2, 貯存于一 20。。 。3.0. lmmol/L 二硫蘇糖醇(DTT),貯存于一 20°C 。4.dNTP 混合物: dNTP 各 1 0 mmol/......閱讀全文
RNA熒光原位雜交
原位雜交:在研究DNA分子復制原理的基礎上發展起來的一種技術。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,能過氫鍵結合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點,應帶有標記的(有放射性同位素,如3H、35S、32P、熒光素生物素、地高辛等非放射性物質)DAN或 RNA
研究發展RNA“緩沖熒光探針”
原文地址:http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2024/3/519783.shtm
研究發展RNA“緩沖熒光探針”
近日,中國科學院大連化學物理研究所副研究員喬慶龍和徐兆超研究員團隊發展了能夠與RNA特異性可逆結合,在活細胞內對細胞核核仁穩定成像的“緩沖熒光探針”Nu-AN,實現了對核仁動態輪廓的成像,并通過活細胞內藥物誘導下核仁特定形態的可視化,為核仁應激試劑的篩選提供可視化的工具。相關成果發表在《先進科學》。
研究人員合成高性能熒光RNA實現活細胞RNA成像
2019年11月5日,華東理工大學生物反應器工程國家重點實驗室楊弋教授等在Nature Biotechnology(《自然—生物技術》)雜志上發表了封面學術論文,題為“Visualizing RNA dynamics in live cells with bright and stable fl
熒光RNA傳感器研究獲進展
基因編碼的熒光傳感器可以在單細胞水平追蹤代謝物、蛋白質或重金屬離子等細胞內靶標的豐度變化和動力學分布,并解析活細胞的生理過程和信號傳導通路。7月24日,《核酸研究》(Nucleic Acids Research)在線發表了中國科學院北京生命科學研究院李幸團隊撰寫的題為Genetically en
新研究“點亮”熒光RNA成像的結構機制
5月17日,中國科學院生物物理研究所方顯楊研究組與動物研究所李幸研究組合作在《自然-通訊》上發表研究論文,揭示熒光點亮RNA適配體RhoBAST結合與激活熒光團TMR-DN的機制,為理性設計和優化這一重要的FLAP系統提供了機制見解。 在活細胞中對生物大分子如蛋白質和RNA等進行時空定位和追蹤
新研究“點亮”熒光RNA成像的結構機制
5月17日,中國科學院生物物理研究所方顯楊研究組與動物研究所李幸研究組合作在《自然-通訊》上發表研究論文,揭示熒光點亮RNA適配體RhoBAST結合與激活熒光團TMR-DN的機制,為理性設計和優化這一重要的FLAP系統提供了機制見解。在活細胞中對生物大分子如蛋白質和RNA等進行時空定位和追蹤,對于理
新研究“點亮”熒光RNA成像的結構機制
5月17日,中國科學院生物物理研究所方顯楊研究組與動物研究所李幸研究組合作在《自然-通訊》上發表研究論文,揭示熒光點亮RNA適配體RhoBAST結合與激活熒光團TMR-DN的機制,為理性設計和優化這一重要的FLAP系統提供了機制見解。在活細胞中對生物大分子如蛋白質和RNA等進行時空定位和追蹤,對于理
新研究“點亮”熒光RNA成像的結構機制
5月17日,中國科學院生物物理研究所方顯楊研究組與動物研究所李幸研究組合作在《自然-通訊》上發表研究論文,揭示熒光點亮RNA適配體RhoBAST結合與激活熒光團TMR-DN的機制,為理性設計和優化這一重要的FLAP系統提供了機制見解。在活細胞中對生物大分子如蛋白質和RNA等進行時空定位和追蹤,對于理
熒光定量pcr儀是怎樣測試dna,rna的
熒光定量pcr儀是怎樣測試dna,rna的普通的基因擴增儀(PCR儀)只能夠定性地分析是否存在目標片段。但是價格要低很多,而且運行成本也要低很多。不過不能直接得到擴增結果,還需要做電泳檢測。實際中檢測遺傳疾病,品種分子標記篩選,甚至親自鑒定等都可以由普通PCR儀完成。但是,某些需要定量的實驗就必須用
遺傳編碼熒光RNA探針研究獲新進展
原文地址:http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/6/503155.shtm
中國學者發文探討熒光RNA技術應用前景
近日,華東理工大學教授楊弋、陳顯軍團隊在《細胞生物學趨勢》上發表觀點文章,系統總結了熒光RNA在活細胞RNA動態可視化研究中的最新進展、面臨挑戰及未來發展方向。熒光RNA是一類由RNA適配體與熒光染料組成的成像工具,能夠在無需依賴蛋白質標記的情況下,實現活細胞中RNA動態的高時空分辨成像。近年來,隨
熒光RNA隨機引物觸發的聚合酶鏈反應實驗
實驗步驟 ##一、 從組織和培養細胞中分離RNA1.TRIzol試 劑(Invitrogen)。該試劑含有苯酚和硫氰酸鹽化合物,操作時應穿實驗服,戴手套,存放于 4°C 。2.氯仿。3.異丙醇。4.乙醇。5.焦炭酸二乙酯(DEPC) 處理的水
聯合團隊解析熒光RNA同染料識別和發色機制
華東理工大學藥學院、生物反應器工程國家重點實驗室、光遺傳學與合成生物學交叉學科研究中心教授楊弋、朱麟勇,浙江大學生命科學研究院研究員任艾明課題組聯合,在熒光RNA研究中取得新進展,為進一步理解和探索熒光RNA適配體潛在的通用結構提供了重要線索。相關研究發表于《自然—化學生物學》。熒光RNA是近些年來
熒光RNA隨機引物觸發的聚合酶鏈反應實驗
差異顯示聚合酶鏈反應(PCR) 可促進在諸多物種中與污染暴露相關的新分子標志物的鑒定。至今,已有多種差異顯示方法被詳細描述。這里,我們描述了一種改良的RNA 隨機引物觸發的 PCR 方 法(RNAarbitrarily primed PCR, RAP-PCR) , 主要涉及通過 羅 丹 明(rhod
聯合團隊解析熒光RNA同染料識別和發色機制
華東理工大學藥學院、生物反應器工程國家重點實驗室、光遺傳學與合成生物學交叉學科研究中心教授楊弋、朱麟勇,浙江大學生命科學研究院研究員任艾明課題組聯合,在熒光RNA研究中取得新進展,為進一步理解和探索熒光RNA適配體潛在的通用結構提供了重要線索。相關研究發表于《自然—化學生物學》。熒光RNA是近些年來
RNA熒光(RiboGreen)定量檢測試劑盒使用說明
主要用途?RNA熒光(RiboGreen)定量檢測試劑是一種旨在通過使用RiboGreen熒光染料與樣品中RNA的高度結合而產生熒光信號來精確定量樣品中RNA含量的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種分子生物學實驗,例如體外轉錄RNA、Northern Bo
熒光RNA隨機引物觸發的聚合酶鏈反應實驗(一)
實驗步驟 ##一、 從組織和培養細胞中分離RNA1.TRIzol試 劑(Invitrogen)。該試劑含有苯酚和硫氰酸鹽化合物,操作時應穿實驗服,戴手套,存放于 4°C 。2.氯仿。3.異丙醇。4.乙醇。5.焦炭酸二乙酯(DEPC) 處理的水。6.無DNA試劑盒(Ambion)。貯存于一 20°C
熒光RNA隨機引物觸發的聚合酶鏈反應實驗(二)
##六、從組織或培養細胞提取 RNARNA可以從各種來源的樣本包括培養的細胞(例如神經元細胞、肝細胞等)和組織中分離得到(見 注 釋 1) 。 mRNA 的 純 化 對 FRAP-PCR 方法來說并不需要,因為mRNA 僅占細胞總 R N A 的 3 % ?5 % (13)。因而在本章所描述
原代細胞DNA與RNA的吖啶橙熒光染色法
基本原理:吖啶橙(acridine orange,AO)是一種常用熒光染料,吖啶橙與原代細胞內的DNA、RNA都有親和力,但有一定的特異性,即結合后發不同顏色的熒光,DNA呈亮綠色,而RNA呈橘紅色至火紅色。此法簡便快捷,既可染活原代細胞又可染固定原代細胞。用于直接染色觀察活原代細胞或固定染色觀
原代細胞DNA與RNA的吖啶橙熒光染色法
基本原理:吖啶橙(acridine orange,AO)是一種常用熒光染料,吖啶橙與原代細胞內的DNA、RNA都有親和力,但有一定的特異性,即結合后發不同顏色的熒光,DNA呈亮綠色,而RNA呈橘紅色至火紅色。此法簡便快捷,既可染活原代細胞又可染固定原代細胞。用于直接染色觀察活原代細胞或固定染色觀
美開發出無需熒光標記的新型DNA和RNA檢測方法
據物理學家組織網近日報道,美國佐治亞大學的科研人員采用專門設計的納米材料,開發出了無標記的新型DNA和RNA檢測方法,有望降低常用基因檢測技術的成本和復雜性。相關研究報告發表在近期出版的《美國化學學會期刊》上。科學家稱,他們的發現或可用于幫助醫生診斷白血病和淋巴癌等特定的癌癥,還能探測出在組織中存在
研究實現活細胞及線蟲體內DNA和RNA的同步熒光成像
近期,中國科學院合肥物質科學研究院智能機械研究所智能微納器件研究室研究員張忠平和王振洋領導的團隊在生物體核酸結構的同步原位影像分析方面取得新進展,合成了一種具有高效生物膜穿透能力的陽離子碳量子點,實現了對活細胞及線蟲體內DNA和RNA的同步熒光成像。相關研究成果發表在國際化學期刊《德國應用化學》
RNA“緩沖熒光探針”用于細胞核核仁成像和核仁應激試劑篩選
近日,我所生物技術研究部分子探針與熒光成像研究組(1818組)喬慶龍副研究員和徐兆超研究員團隊發展了能夠與RNA特異性可逆結合,在活細胞內對細胞核核仁穩定成像的“緩沖熒光探針”Nu-AN,實現了對核仁動態輪廓的成像,并通過活細胞內藥物誘導下核仁特定形態的可視化,為核仁應激試劑的篩選提供可視化的工具。
RNA干涉(RNA-Interference,RNAi)(1)
基因沉默(gene silencing)是生物體內特定基因由于種種原因不表達的遺傳現象。一方面,基因沉默是生物遺傳操作創造新的遺傳修飾生物(genetically modified organisms)的障礙,另一方面,它又是植物抵抗外來核酸入侵(如病毒)的一種反應,為植物抗病毒的遺傳育
RNA干涉(RNA-Interference,RNAi)(2)
早期的 RNAi 技術可用在研究與胚胎發育相關基因的功能上,但是由于細胞分裂造成 dsRNA 的稀釋,使得這種方法在研究成體的基因功能時有一定的局限性。為彌補早期 RNAi 技術的不足,Tavernarakis 等將 RNAi 技術做了一些改進及更動,將目的基因之標的序列以反向重復的方式,由
RNA提取時RNA降解原因
1 ) 新鮮細胞: 裂解液的量不足,使得裂解不充分。 2 ) 新鮮組織: 某些含有內源性核酸酶的樣品,很難避免RNA酶的降解,建議采用的方法為在液氮條件下將組織研碎,并且,勻漿時采用更多的裂解液。 3 ) 冷凍樣品: 樣品取材后應該迅速置于液氮中冷凍存放,然后轉移到-70℃冰箱存
RNA干擾技術(RNA-interference,RNAi)
1995年,康乃爾大學的Su Guo博士在試圖阻斷秀麗新小桿線蟲(C. elegans)中的par-1基因時,發現了一個意想不到的現象。她們本是利用反義RNA技術特異性地阻斷上述基因的表達,而同時在對照實驗中給線蟲注射正義RNA(sense RNA)以期觀察到基因表達的增強。但得到的結果
RNA提取心得(組織RNA提取和培養細胞的RNA提取)
一.組織RNA提取 1.最好新鮮組織,這樣RNA提取的效果比較好,這是肯定的。 2. 如果不是新鮮的(最好在半年之內,-80℃或者液氮中凍存的)組織,注意不要反復凍融,從冰凍狀態拿到0-4℃,注意不要拿到常溫,待組織解凍后,用 DEPC泡過的剪刀剪一小塊組織,稱重后,放到預冷的勻漿器中,然后
RNA干擾相關知識RNARITS)
RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing(RITS):是一種組織染色質變型的復合物。RITS復合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白質,通過結合到異染色質的基因池上來促使異染色質上基因的沉默。