冷酒精沉淀法抗體純化
1、 血清加3倍體積的蒸餾水，調節 pH至7.7(±)冷卻到0℃。在激烈攪拌的條件下，加預冷的酒精（-20℃）到最終濃度為20%，保持在-5℃。產生的沉淀（a），含有大多數種類的免疫球蛋白。 2、 沉淀a懸浮于25倍體積的0.15～20mol/l NaCl溶液（冷）中，加有0.05mol/l醋酸調節 pH到5.1，產生的沉淀（b），包括大部分的IgA和IgM，IgG留在上清液內。 3、調節 上清液的pH到7.4，加冷酒精（-20℃～-30℃）到最終濃度為25%，維持在-5℃。所得到的沉淀（c）含有90%～98% IgG。不同動物，IgG分離的條件和產量略有不同。見下表。 4、從沉淀（b）可按下述方法進一步分離出IgA和IgM的混合物：將沉淀（b）懸浮在0℃ 水中，調節 pH到5.1，離心去除不溶的蛋白。調節 上清液離子強度到0.01～0.0075,pH5.5。然后加冷酒精到最終濃度為10%，保持在 ......閱讀全文
冷酒精沉淀法抗體純化
1、 血清加3倍體積的蒸餾水，調節 pH至7.7(±)冷卻到0℃。在激烈攪拌的條件下，加預冷的酒精（-20℃）到最終濃度為20%，保持在-5℃。產生的沉淀（a），含有大多數種類的免疫球蛋白。?2、 沉淀a懸浮于25倍體積的0.15～20mol/l NaCl溶液（冷）中，加有0.05mol/l醋酸調節
抗體純化：冷酒精沉淀法
1、 血清加3倍體積的蒸餾水，調節 pH至7.7(±)冷卻到0℃。在激烈攪拌的條件下，加預冷的酒精（-20℃）到最終濃度為20%，保持在-5℃。產生的沉淀（a），含有大多數種類的免疫球蛋白。2、 沉淀a懸浮于25倍體積的0.15～20mol/l NaCl溶液（冷）中，加有0.05mol/l醋酸調節
抗體純化
Antibody PurificatioinPurification of IgG Using Protein A- or Protein G-Agarose?(KPL)?Purifying Antibodies?(Perkin-Elmer)Precipitation MethodsProtein
抗體的純化實驗
實驗方法原理利用細菌胞壁蛋白的特性可以提供了一個快速、簡捷、特異、高效的抗體純化方法。這里細菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G，它們分別從金黃色化膿性葡萄球菌和 G 組鏈球菌分離純化。它們能特異結合到免疫球蛋白的 Fe 部分。由于它們對不同的免疫球蛋白有不同的親和力，所以應根據免疫球蛋白的種類和類
抗體的純化實驗
抗體的純化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 利用細菌胞壁蛋白的特性可以提供了一個快速、簡捷、特異、高效的抗體純化方法。這里細菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G，它們分別從
IgG抗體純化實驗
實驗材料 抗體試劑、試劑盒 SAS儀器、耗材 透析膜離心機實驗步驟 1. ?于4℃不斷攪拌下，往2體積的含有IgG的混合物中，逐滴加入1體枳pH7.0的SAS溶液。加完后置于4℃不間斷地攪拌此混合物2~4 h以形成沉淀。2 000 g 離心20 min。?2. ?用預冷的33% SAS溶液在漩渦混合
抗體的純化實驗
實驗方法原理 利用細菌胞壁蛋白的特性可以提供了一個快速、簡捷、特異、高效的抗體純化方法。這里細菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G，它們分別從金黃色化膿性葡萄球菌和 G 組鏈球菌分離純化。它們能特異結合到免疫球蛋白的 Fe 部分。由于它們對不同的免疫球蛋白有不同的親和力，所以應根據免疫球蛋白
抗體純化方法介紹
抗體制備制備出效價高，特異性強，穩定性好的抗體是免疫學實驗取得成功的基礎，抗體質量的好壞直接影響著研究者研究的成敗，不同的免疫學實驗方法（如ELISA，IHC，IP，ICC,SDS-PAGE, WB等）對抗體的效價，濃度和純度有不同的要求。我們知道，一般免疫血清中含有特異性抗體和非特異性抗體
IgG抗體純化實驗
雖然親和層析法是進行特異性抗體純化的首選，然而有時這種純化方式卻非必需，或者無法實施進行。在大多數錆況下，運鐵蛋白可發生共沉淀或共純化，能用凝膠濾過層析去除之。實驗材料抗體試劑、試劑盒SAS儀器、耗材透析膜離心機實驗步驟1. ?于4℃不斷攪拌下，往2體積的含有IgG的混合物中，逐滴加入1體枳pH7.
醋酸鈉乙醇沉淀法核酸純化實驗
實驗方法原理核酸是多聚陰離子的水溶性化合物，可以與許多1價、2價離子結合形成鹽類，后者在有機溶劑中不溶解也不變性．在較低溫度下形成沉淀．實驗材料待純化樣本試劑、試劑盒醋酸鈉緩沖液無水乙醇70%乙醇實驗步驟實驗試劑：1. 3mol／L醋酸鈉緩沖液，pH5.2：稱取醋酸鈉（NaAC·3H20）408.1
醋酸鈉乙醇沉淀法核酸純化實驗
實驗方法原理 核酸是多聚陰離子的水溶性化合物，可以與許多1價、2價離子結合形成鹽類，后者在有機溶劑中不溶解也不變性．在較低溫度下形成沉淀．實驗材料 待純化樣本試劑、試劑盒 醋酸鈉緩沖液無水乙醇70%乙醇實驗步驟 實驗試劑：1. 3mol／L醋酸鈉緩沖液，pH5.2：稱取醋酸鈉（NaAC·3H20）4
有冷自身抗體干擾的抗體鑒定試驗
一、原理：冷凝集綜合癥的患者血清中或紅細胞上存在冷凝集素，為IgM類完全抗體，在低溫時可使自身（或O型、同型）紅細胞發生凝集。凝集反應的高峰在0～4℃，當溫度回升到37℃時凝集消失或減弱。如血清中同時存在同種抗體時冷自身抗體會干擾同種抗體的鑒定，做以下處理后可以進行同種抗體的鑒定。二、前處理：冷自身
聚乙二醇沉淀法純化質粒DNA實驗
這種方法最早由 Richaed Treisman ( 英國，倫敦，ICRF) 參照 Lis 的工作而設計。Lis 是最早用聚乙二醇（PEG ) 分離不同大小 DNA 的人。Treisman 法被廣泛用于堿裂解法制備的質粒 DNA 的純化。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理這
聚乙二醇沉淀法純化質粒DNA實驗
實驗方法原理 這種方法最早由 Richaed Treisman ( 英國，倫敦，ICRF) 參照 Lis 的工作而設計。Lis 是最早用聚乙二醇（PEG ) 分離不同大小 DNA 的人。Treisman 法被廣泛用于堿裂解法制備的質粒 DNA 的純化。實驗材料 粗制質粒試劑、試劑盒 氯仿乙醇異丙醇L
聚乙二醇沉淀法純化質粒DNA實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這種方法最早由 Richaed Treisman ( 英國，倫敦，ICRF) 參照 Lis 的工作而設計。Lis 是最早用聚乙二醇（PEG ) 分離不同大小 DNA 的人。Treisman 法被廣泛用于堿裂解法制備的質粒 DNA
多克隆抗體純化實驗
實驗材料 動物血清樣品試劑、試劑盒 正辛酸醋酸緩沖液PBS儀器、耗材 透析袋高速低溫離心機實驗步驟 一、材料和試劑?1. ? 正辛酸?2. ?60 mmol/L，pH4.0醋酸緩沖液，PBS?3. ?透析袋?4. ?高速低溫離心機?二、操作步驟?1. ?將待提取樣品用60 mmol/L，pH4.0醋
抗體的純化：鹽析法
精制抗體的方法很多。一般采用綜合技術，避免蛋白變性。如分離IgG時，多結合使用鹽析法與離子交換法，以求純化。提取IgM的方法也很多，如應用凝膠過濾與制備電泳法，或離子交換與凝膠過濾等。?一、原理?蛋白質在水溶液中的溶解度是由蛋白質周圍親水基團與水形成水化膜的程度，以及蛋白質分子帶有電荷的情況決定的。
親和層析－－抗體純化
蛋白 A（Protein A）瓊脂糖微球蛋白 A（Protein A）是金黃色葡萄球菌的細胞壁成分。它由一條多肽鏈組成，其中包含五個抗體結合結構域。這些高親和力結合域和免疫球蛋白 G（IgG）的 Fc 區域特異性結合。其他類型如 IgA 和 IgM 可能可以通過和 抗體 Fab 片段相互作用與蛋白
抗體的純化：鹽析法
精制抗體的方法很多。一般采用綜合技術，避免蛋白變性。如分離IgG時，多結合使用鹽析法與離子交換法，以求純化。提取IgM的方法也很多，如應用凝膠過濾與制備電泳法，或離子交換與凝膠過濾等。一、原理蛋白質在水溶液中的溶解度是由蛋白質周圍親水基團與水形成水化膜的程度，以及蛋白質分子帶有電荷的情況決定的。當用
IgG抗體純化實驗2
實驗材料抗體試劑、試劑盒SAS儀器、耗材透析膜離心機實驗步驟1. ?準備好一根DEAE-Affi-Gel Blue柱子。用5倍柱床體積的加樣緩沖液平衡（7 ml 柱床體積/ml 抗血清或腹水）。此步驟及以下各步均在4℃下操作實施。2. ?于4℃下透析樣品40 h，中間換2次加樣緩沖液（每次換大約4
單克隆抗體的純化實驗——單克隆抗體的純化實驗
1~5 ml/min?的速度上樣于蛋白A-Sepharose柱，用Tris緩沖液洗柱子直至所有的未結合的蛋白都被洗脫，采用A280監測。?3. ?依次用2~3倍柱床體積的檸檬酸緩沖液、乙酸緩沖液液以及甘氨酸·Cl緩沖液連續洗脫結合蛋白，洗脫下的蛋白直接接入裝有中和緩沖液的管中，中和緩沖液的體積應為所
慢病毒的濃縮與純化——超速離心沉淀法
實驗概要本實驗介紹了用超速離心沉淀法濃縮與純化慢病毒的操作步驟。主要試劑1. 70%乙醇2. 20%的蔗糖溶液3. PBS緩沖液主要設備1. Ultra-clear SW28離心管2. 超凈工作臺3. 紫外燈4. 10ml移液管5. Beckman SW28 超速離心轉頭6. 高速離心機7. 50m
單克隆抗體的純化
一、腹水型單抗的純化在單抗純化之前，一般均需對腹水進行預處理，目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過濾離心法，以前者處理效果為佳，而且操作簡便。1、二氧化硅吸附法新鮮采集的腹水（或凍存的腹水），2000r/min 15分鐘，除去細胞成分（或
單克隆抗體的純化
實驗方法原理 葡萄球菌蛋白 A 可以結合數種哺乳類動物的免疫球蛋白。蛋白質 A-瓊脂糖介質可以結合部分 IgM、大部分 IgGl 及幾乎所有的 IgG2a、IgG2b 和 IgG3 MAb。實驗材料 腹水（單克隆抗體）試劑、試劑盒 蛋白 A-瓊脂糖 CL-4BTr1s 緩沖液 pH 8.6檸檬酸鹽緩
單克隆抗體的純化
一、腹水型單抗的純化?在單抗純化之前，一般均需對腹水進行預處理，目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過濾離心法，以前者處理效果為佳，而且操作簡便。?1、二氧化硅吸附法?新鮮采集的腹水（或凍存的腹水），2000r/min 15分鐘，除去細胞成分（
從免疫血清純化抗體
從免疫血清純化抗體1． 剪取一小條0.45 μm 的硝酸纖維膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸沒于1 ml1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。2． 取出膜，置于濾紙上干燥。3． 將膜放置于裝有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，輕輕震蕩混勻30 min。4． 移
從免疫血清純化抗體
1． 剪取一小條0.45 μm 的硝酸纖維膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸沒于1 ml，1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。2． 取出膜，置于濾紙上干燥。3． 將膜放置于裝有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，輕輕震蕩混勻30 min。4． 移去Buffer
單克隆抗體的純化實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 Tris腹水液寧酸鹽緩沖液甘氨酸乙酸鹽緩沖液儀器、耗材 超濾器濾膜實驗步驟 1. ?將蛋白A-Sepharose置于Tris緩沖液中（超過50倍的量，v/v）充分溶脹。在室溫下將其灌入直徑為2.5 cm 玻璃層析柱中，用Tris緩沖液使其平衡。2. ?腹水濃稀釋于3倍體
從免疫印跡到抗體純化
一、材料和試劑 1. ?PVDF或硝酸纖維素膜（Amersham，GEhealthcare）2. ?透析袋（PierceCat#68035）3. ?麗春紅S（Sigma，Cat#P7170）4. ?脫脂奶粉（Carnation，any your favorite brand in local st
辛酸提取法純化多克隆抗體
該法可用于分離提取人、兔、小鼠血清中的Ig及雜交瘤誘生的腹水和培養上清液中McAb。 【材料和試劑】? （1）正辛酸。? （2）60mmol/L，pH4.0醋酸緩沖液，PBS。? （3）透析袋。? （4）高速低溫離心機。? 【操作步驟】 （1）將待提取樣品用60mmol/L，pH4.0