冷酒精沉淀法抗體純化
1、 血清加3倍體積的蒸餾水，調節 pH至7.7(±)冷卻到0℃。在激烈攪拌的條件下，加預冷的酒精（-20℃）到最終濃度為20%，保持在-5℃。產生的沉淀（a），含有大多數種類的免疫球蛋白。 2、 沉淀a懸浮于25倍體積的0.15～20mol/l NaCl溶液（冷）中，加有0.05mol/l醋酸調節 pH到5.1，產生的沉淀（b），包括大部分的IgA和IgM，IgG留在上清液內。 3、調節 上清液的pH到7.4，加冷酒精（-20℃～-30℃）到最終濃度為25%，維持在-5℃。所得到的沉淀（c）含有90%～98% IgG。不同動物，IgG分離的條件和產量略有不同。見下表。 4、從沉淀（b）可按下述方法進一步分離出IgA和IgM的混合物：將沉淀（b）懸浮在0℃ 水中，調節 pH到5.1，離心去除不溶的蛋白。調節 上清液離子強度到0.01～0.0075,pH5.5。然后加冷酒精到最終濃度為10%，保持在 ......閱讀全文
單克隆抗體的純化實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 Tris腹水液寧酸鹽緩沖液甘氨酸乙酸鹽緩沖液儀器、耗材 超濾器濾膜實驗步驟 1. ?將蛋白A-Sepharose置于Tris緩沖液中（超過50倍的量，v/v）充分溶脹。在室溫下將其灌入直徑為2.5 cm 玻璃層析柱中，用Tris緩沖液使其平衡。2. ?腹水濃稀釋于3倍體
硫酸銨純化抗體的步驟
以腹水或組織培養上清液為例來介紹抗體的硫酸銨沉淀。各種不同的免疫球蛋白鹽析所需硫酸 銨的飽和度也不完全相同。通常用來分離抗體的硫酸銨飽和度為 33% — 50% 。配制飽和硫酸銨溶液（ SAS ） 1.將 767g （ NH 4 ） 2 SO 4 邊攪拌邊慢慢加到 1 升 蒸餾水中。用氨水或硫酸調到
單克隆抗體的純化——蛋白A瓊脂糖純化
單克隆抗體的純化可用于：（1）制備體外診斷試劑；（2）制備治療用藥實驗方法原理目前常用的純化方法有：鹽析、凝膠過濾、離子交換層析和辛酸提取等方法達到純化目的，也有采用較簡便的酸沉淀法。最有效的純化法為親合純化法，常用葡萄球菌A蛋白或抗小鼠免疫球蛋白抗體與載體交聯，制備親合層析柱將抗體結合后洗脫，回收
辛酸硫酸銨沉淀法純化單抗各個步驟的原理
該方法純化的關鍵點為2步；第一步，辛酸——辛酸為短鏈脂肪酸，在酸性條件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig蛋白質；醋酸緩沖液，緩沖體系給予酸性條件；第二步，硫酸銨，——高濃度的鹽離子在蛋白質溶液中可與蛋白質競爭水分子，從而破壞蛋白質表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉淀出來。
抗體的親和層析法純化技術
實驗概要本實驗介紹了抗體親和層析法純化的操作流程。實驗原理親和層析的高度選擇性使得從某一初始材料中純化，富集某一含量較低的目的蛋白成為可能，因此親和層析是蛋白質分離純化過程中最有效的方法之一。另外，如果配基與蛋白質的親和能力很強，也可同時進行樣品的濃縮。雖然多數情況下不需要將抗體與其他血清蛋白分開，
抗體的親和層析法純化技術
實驗概要本實驗介紹了抗體親和層析法純化的操作流程。實驗原理親和層析的高度選擇性使得從某一初始材料中純化，富集某一含量較低的目的蛋白成為可能，因此親和層析是蛋白質分離純化過程中最有效的方法之一。另外，如果配基與蛋白質的親和能力很強，也可同時進行樣品的濃縮。雖然多數情況下不需要將抗體與其他血清蛋白分開，
多克隆抗體純化實驗_辛酸提取法
辛酸提取法可用于分離提取人、兔、小鼠血清中的Ig及雜交瘤誘生的腹水和培養上清液中McAb。實驗材料動物血清樣品試劑、試劑盒正辛酸醋酸緩沖液PBS儀器、耗材透析袋高速低溫離心機實驗步驟一、材料和試劑?1. ? 正辛酸?2. ?60 mmol/L，pH4.0醋酸緩沖液，PBS?3. ?透析袋?4. ?高
多克隆抗體的純化方法都有哪些
純化抗體的方法較多，建議用蛋白A或蛋白G微球純化法作為最常用的方法。這種方法效率高，能為常用的實驗方法提供足夠純化的抗體，而且隨著商品化的蛋白A，和蛋白G基質的出現，能將任何來源的抗體純化。抗體的純化也可采用傳統的色譜法，在某些情況下非常有用。這些方法包括DEAE離子交換色譜法、硫酸鍍沉淀法及其他方
冷抗體和冷凝集素有什么區別
冷凝集素(cold agglutinin)是冷反應型抗紅細胞抗體,在O一4℃時最易和紅細胞膜抗原結合,是IgM型,是較強的凝集紅細胞的一種可存在于正常人血清中的抗體,低效價一般沒有臨床意義.一般認為,冷凝集素不是冷球蛋白，冷凝集素是指紅細胞某些抗原的自身抗體，而冷球蛋白是一種免疫球蛋白
免疫球蛋白純化技術——純化小鼠腹水中單克隆抗體
實驗方法原理根據離子交換原理，將經硫酸銨粗提的含McAbγ球蛋白上樣結合于層析柱上，通過增加洗脫液中的離子強度，洗脫并收集蛋白峰。實驗材料PBS試劑、試劑盒緩沖液儀器、耗材層析柱高效液相色譜儀實驗步驟1. ?腹水10000 g離心10 min，除去細胞和雜質，在4 ℃條件下逐滴加入飽和硫酸銨溶液，使
CPB沉淀法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
本方案介紹用陽離子去污劑——十六燒基溴化吡啶（cetylpyridinium bromide,CPB) 定量差異沉淀分離放射性標記的寡核苷酸與未摻入的放射性標記物。此方法最初是用于回收磷酸緩沖液從羥磷灰石柱洗脫的 DNA(Geek and Nasz 1983), 也可用于沉淀放射性標記核酸包括寡核
乙醇沉淀法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
試劑、試劑盒 乙酸銨乙醇TE放射性標記的寡核苷酸純化的原料實驗步驟 材料溶液和緩沖液稀釋貯存液至適當濃度。乙酸銨（1mol/L)乙醇TE(pH7.6)核酸和寡核苷酸放射性標記的寡核苷酸純化的原料是方案 2(步驟 3 或步驟 5) 的反應混合液，T4 噬菌體多核苷酸激酶巳在 68°C 加熱后滅活。方法
乙醇沉淀法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
如果放射性標記的寡核苷酸只是用作雜交探針的話，一般不必完全除去未摻入的放射性標記物。然而，為了使本底降至最低，應該將未摻入的大部分放射性標記物與放射性標記的寡核苷酸分離。如果寡核苷酸長度超過 18 個核苷酸（本方案)，則絕大部分未反應的放射性前體物質可通過乙醇分級沉淀除去。本實驗來源于分子克隆實驗指
乙醇沉淀法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙酸銨 乙醇 TE 放射性標記的寡核苷酸 純化的原料 實驗步驟
CPB沉淀法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 十六烷基溴化吡啶 EDTA-Tris EDTA-Tris-DNA 溶液 乙醇-乙酸鈉溶液 乙醇 乙酸鈉 TE(
單克隆抗體的純化技術操作步驟
從培養液或腹腔積液獲得的單克隆抗體，不需要純化即可應用于日常診斷或定性研究。如果用于免疫標記測定，須分離和純化。可用半飽和、飽和硫酸銨進行沉淀，進行初步濃縮和純化；可用親和層析法進一步純化。一、腹水型單抗的純化在單抗純化之前，一般均需對腹水進行預處理，目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以
冷自身抗體特異性鑒定和效價測定
冷自身抗體特異性鑒定和效價測定原理：? ? 有些冷自身抗體與鑒定細胞的反應凝集強度一致，但是其與臍血O細胞、成人Ac 或成人Bc反應也有其特異性如抗H、抗I、抗HI。? ? 抗I——抗I常見于正常人，一般為IgM抗體，4℃反應最佳，效價一般＜64.抗體效價高時室溫下可檢測到。抗I抗體和成人紅
蛋白純化服務
蛋白純化服務內容1、純化抗血清、免疫腹水、細胞上清得到抗體IgG或IgM純化方法免疫親和層析純化法Protein A/G親和層析法辛酸-硫酸銨沉淀法飽和硫酸銨沉淀法等2、純化重組蛋白粗品3、純化客戶天然蛋白粗品純化方法離子交換疏水分子排阻色譜法4、可用客戶提供的抗體制備免疫親和層析柱，使用免疫親和層
抗體純化：deaesephadex－a50－柱層析法
一、原理?deae-sephadex a-50（二乙氨基—乙基-葡萄糖凝膠a-50）為弱堿性陽離子交換劑。用NaOH將Cl-型轉變為OH-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白屬于中性蛋白（等電點為pH6.85～7.5），其余均屬酸性蛋白。pH7.2～7.4的環境中，酸性蛋白均被deae-
親和層析法(affinity－chromatography)純化多克隆抗體
【實驗原理】如圖所示，親和層析的高度選擇性使得從某一初始材料中純化，富集某一含量較低的目的蛋白成為可能，因此親和層析是蛋白質分離純化過程中最有效的方法之一。另外，如果配基與蛋白質的親和能力很強，也可同時進行樣品的濃縮。 雖然多數情況下不需要將抗體與其他血清蛋白分開，但如果一旦需要，蛋白A親和層析
抗體純化：deaesephadex－a50－柱層析法
? ? ? ? ? ? 一、原理deae-sephadex a-50（二乙氨基—乙基-葡萄糖凝膠a-50）為弱堿性陽離子交換劑。用NaOH將Cl-型轉變為OH-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白屬于中性蛋白（等電點為pH6.85～7.5），其余均屬酸性蛋白。pH7.2～7
不連續密度梯度沉淀法分離純化淋巴細胞和淋巴母細胞
(一) 原理 Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(
自身冷抗體合并抗c、E抗體引起溶血性輸血反應1例報告
患者，女，37歲，漢族，已婚,已生育。1998年9月因患巨球蛋白血癥住院。患者曾數次輸血,所輸的血均為鹽水法配血。自1999年10月以來,患者因嚴重貧血而頻繁輸血。輸血后患者出現寒戰、高熱、醬油色尿等溶血性輸血反應。因患者血色素僅為2 g且交叉配血困難，遂進行血清學檢測。?1 血型血清學檢測1.
根據抗體的類型和用途選擇合適的純化方法
制備高特異性、高效價的抗體是實驗免疫學技術的基礎，抗體質量的高低將直接影響試驗的成敗。 通過不同方法制備的抗體往往與多種雜蛋白混雜在一起，為了獲得成分相對單一的抗體或將抗體用于特定的用途，就需要進行抗體純化。抗體純化分了幾種類型，根據用途決定選擇哪種方法進行純化：1. 粗純：將制備抗體的血清
多克隆抗體的制備、純化及免疫電泳1
一、多克隆抗體的制備【實驗原理】當將抗原注射入實驗動物體內時，一系列抗體生成細胞會不同程度的與抗原結合，受抗原刺激后在血液中產生不同類型的抗體，這種由一種抗原刺激產生的抗體稱為多克隆抗體。多克隆抗體中不同的抗體分子可以以不同的親和能力與抗原分子表面不同的部分—抗原決定簇相結合。將抗原導入敏感動物體內
DEAE纖維素提取法純化多克隆抗體
該法提取IgG簡便，既可小量提取，也可大量制備。?1．批量提取法 稱取DEAE-纖維素（DE32或DE52）50g，置于1000ml燒杯中，先以蒸餾水漂浮除去細顆粒，再經酸堿處理后，用0.01～0.05mol/L，pH8.0左右的磷酸鹽緩沖液（PB）平衡。將水分抽干，或用布氏濾斗（內放兩層
DEAESephadex－A50提取法純化多克隆抗體
DEAE-Sephadex A-50（簡稱A-50）為弱堿性陰離子交換劑，經過NaOH處理將Cl-型轉為OH-型后，可吸附酸性蛋白。γ1球蛋白屬中性蛋白，等電點為pH6.85～7.5，其余均屬酸性蛋白。在溶液為pH8.0時，酸性蛋白均被A-50 吸附。從而可分離純化IgG。?? ? 1. 批
單克隆抗體(McAb)親和層析柱純化
重組人α干擾素作為一種具有廣譜抗病毒、抑制腫瘤細胞生長及免疫調節作用的細胞因子新型藥物，已在國內外廣泛投入臨床應用，并取得了顯著的療效。國際上對用于臨床的重組干擾素的純度要求很高，美國NIH規定必須在90%以上，因此生產者普遍采用親和層析純化法。我們研制了rHuIFN-α2a的McAb 3F1，
Fab片段抗體表達產物的純化和鑒定
實驗概要本實驗介紹了三種抗體純化的方法。實驗步驟1. 抗Fab片段抗體親和層析純化法?? 1) 偶聯抗人或抗鼠Fab片段抗體到Protein G Sepharose，將純化的抗人或鼠Fab片段抗體以2mg/ml的比例與Protein G Sepharose凝膠珠溶液混合，室溫旋轉孵育1h。用
多克隆抗體的制備、純化及免疫電泳2
⒊ 注射抗原?⑴ 準備兩只成年兔，將100μg抗原/兔溶入1ml磷酸緩沖溶液中待用。在1ml福氏不完全佐劑中加入分枝桿菌制成完全佐劑，并加入1ml抗原溶液，劇烈震蕩使之充分乳化，用3ml注射器抽取該乳化液，接上25G針頭，排除注射器中的氣泡。從籠中取出兔子放在平坦處，在4個不同的部位進行皮下注射