技術和方案18染色質免疫沉淀
試劑、試劑盒甲醛甘氨酸TBS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液免疫共沉淀洗脫液TESTE儀器、耗材超聲波粉碎儀實驗步驟1.培養要分析的細胞。每一個樣品，需要在三角瓶中培養 50~100ml 細胞至 OD600 大約為 1。2.甲醛處理細胞交聯蛋白質和 DNA。加甲醛到細胞中至終濃度為 1%(37% 的甲醛按 1:36 與細胞懸液混合），在室溫維持 10~120 min，期間顛倒幾次。>注意：最佳的固定時間對不同的蛋白質是不同的，對于不同的分析要加以優化。3.制備加有蛋白酶抑制劑的裂解/免疫沉淀緩沖液。使用 5~8 ml 裂解/免疫沉淀緩沖液 (用量根據需要而變化，詳見程序 6 和 7) 來收集每個染色質免疫沉淀樣品。lml 裂解/免疫沉淀緩沖液加 20ul 50 倍的蛋白酶抑制劑儲存液。將緩沖液儲存在冷室中。>注意：PMSF 最好使用時加入，因其在水相中不穩定，pH 8 時的半衰期約 35 min。每毫升反應緩沖液中加入 20 ......閱讀全文
技術和方案18－染色質免疫沉淀
試劑、試劑盒甲醛甘氨酸TBS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液免疫共沉淀洗脫液TESTE儀器、耗材超聲波粉碎儀實驗步驟1.培養要分析的細胞。每一個樣品，需要在三角瓶中培養 50~100ml 細胞至 OD600 大約為 1。2.甲醛處理細胞交聯蛋白質和 DNA。加甲醛到細胞中至終濃度為 1%(37% 的甲醛按 1
染色質免疫沉淀技術的應用
隨著人類基因組測序工作的基本完成，功能基因組學逐漸成為研究的熱點。而基因表達的調控又是功能基因組學的一個重要研究領域，要想提供蛋白因子直接調控的證據，需要直接檢測蛋白質-DNA的相互作用，而染色質免疫沉淀技術（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）就是一種研
染色質免疫沉淀（ChIP）技術的難點
染色質免疫沉淀技術（Chromatin Immunoprecipitation，簡稱ChIP）是研究體內蛋白質與DNA相互作用的一種技術。它利用抗原抗體的特異性反應，可以真實地反映體內蛋白分子與基因組DNA結合的狀況。下面我們就最基本的實驗步驟，實驗中的小技巧以及需要注意的問題簡單介紹一下。1.
染色質免疫沉淀分析
真核生物細胞狀態是由內源和外源因素共同影響的，所有信號傳遞途徑的終點都是DNA 。DNA 通過核蛋白復合物組成染色質，染色質是基因調控的一個重要作用位點。轉錄激活因子和輔助抑制因子的研究顯示存在一種新的調節機制--" 組蛋白密碼" ，其信息存在于組蛋白的轉錄后修飾等過程中。該類修飾包括組蛋白磷酸
染色質免疫沉淀DNA分析
實驗概要染色質免疫共沉淀是一種強力的方法，來聯系蛋白質或其修飾的定位與基因組的關系。染色質分離并用特異性抗體判斷是否與特異性 ?DNA?序列相結合。染色質免疫沉淀法亦可用來檢測目的位點在基因組中的時空分布（用芯片或 DNA 測序）。本操作規程詳細闡述了交聯染色質免疫沉淀 ?(X-ChIP) 實驗的具
染色質免疫沉淀DNA分析
實驗概要染色質免疫共沉淀是一種強力的方法，來聯系蛋白質或其修飾的定位與基因組的關系。染色質分離并用特異性抗體判斷是否與特異性 ?DNA?序列相結合。染色質免疫沉淀法亦可用來檢測目的位點在基因組中的時空分布（用芯片或 DNA 測序）。本操作規程詳細闡述了交聯染色質免疫沉淀 ?(X-ChIP) 實驗的具
染色質免疫沉淀（ChIP）技術的難點及應用1
序言隨著人類基因組測序工作的基本完成，功能基因組學的研究逐漸成為研究的熱點。而基因表達的調控又是功能基因組學的一個重要研究領域。研究某個蛋白因子的調控功能，可以通過對蛋白活性（激活或抑制其活性），蛋白數量（過表達Overexpression或基因缺陷型Knockout）, 以及蛋白功能（功能缺陷
染色質免疫沉淀（ChIP）技術的難點及應用2
3. 染色質免疫沉淀Input對照：在進行免疫沉淀前，需要取一部分斷裂后的染色質做Input對照。Input是斷裂后的基因組DNA，需要與沉淀后的樣品DNA一起經過逆轉交聯，DNA 純化，以及最后的PCR或其他方法檢測。Input對照不僅可以驗證染色質斷裂的效果，還可以根據Input中的靶序
組織免疫沉淀中染色質的制備
實驗概要此步驟描述了從組織中制備染色質，以用于后續的染色質免疫沉淀反應。每個免疫沉淀/抗體反應推薦使用肝組織 30 mg，但組織使用量可根據實際進行調整。每種組織的用量依據組織蛋白豐度、抗體親和力和交聯效率而定。每個免疫沉淀反應最適染色質的量為 5-15 μg 。每次交聯免疫沉淀反應之前，需根據不同
自然染色質免疫沉淀實驗設計
1. The preparation of native chromatin from cultured human cells1.1.Cultured cells (e.g. HL-60 or lymphoblastoids) are grown to a density of approxima
染色質免疫沉淀芯片（ChipChip）
該技術能夠快速在目標基因組的染色體中確定特異DNA結合蛋白的準確結合位點，ChIP芯片也可以在一個基因組的任何感興趣的區域內尋找染色體的結構改變。一、ChIP-Chip的用途（1）在基因組范圍內確定基因轉錄因子的DNA結合位點和其他DNA結合蛋白或蛋白復合體的DNA結合位點。（2）染色體活性狀態的定
組織免疫沉淀中染色質的制備
實驗概要此步驟描述了從組織中制備染色質，以用于后續的染色質免疫沉淀反應。每個免疫沉淀/抗體反應推薦使用肝組織 30 mg，但組織使用量可根據實際進行調整。每種組織的用量依據組織蛋白豐度、抗體親和力和交聯效率而定。每個免疫沉淀反應最適染色質的量為 5-15 μg 。每次交聯免疫沉淀反應之前，需根據不同
免疫學技術專題：染色質免疫沉淀芯片（ChipChip）
該技術能夠快速在目標基因組的染色體中確定特異DNA結合蛋白的準確結合位點，ChIP芯片也可以在一個基因組的任何感興趣的區域內尋找染色體的結構改變。一、ChIP-Chip的用途（1）在基因組范圍內確定基因轉錄因子的DNA結合位點和其他DNA結合蛋白或蛋白復合體的DNA結合位點。（2）染色體活性狀態的定
北京大學Cell－Res獲染色質免疫沉淀測序技術突破
生物動態光學成像中心黃巖誼課題組與湯富酬課題組合作，發展了一種基于微流控芯片的微量細胞樣品處理與核酸俘獲方法，成功實現了針對1000個細胞的染色質免疫沉淀測序（ChIP-Seq），大幅減少了這類實驗中對樣品起始量的要求，并利用這一方法研究了組蛋白H3第4位賴氨酸的3甲基化修飾（H3K4me3）在
免疫沉淀實驗——基本方案
經典的免疫沉淀是可溶性抗原與其抗體產生可見沉淀反應的血清學試驗。后來發展為抗原抗體結合后，用固相化的蛋白A或蛋白G小珠等來吸附分離抗原抗體復合體，達到檢測微量抗原或抗體的目的。實驗材料蛋白質試劑、試劑盒裂解緩沖液稀釋緩沖液SDSTrisTSA儀器、耗材轉子離心機實驗步驟1. ?表面標記或生物合成標記
染色質免疫沉淀法（Chromatin－immunoprecitation，ChIP）
染色質免疫沉淀法（Chromatin immunoprecitation，ChIP）是研究體內DNA與蛋白質相互作用的重要工具。它可以靈敏地檢測目標蛋白與特異DNA片段的結合情況，還可以用來研究組蛋白與基因表達的關系。核小體組蛋白可以發生多種翻譯后的共價修飾，如乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等，這些
體內甲醛交聯及染色質免疫沉淀研究DNA和蛋白質作用
染色質由真核基因組包裝而成，它參與了轉錄、復制、重組、修復等許多以DNA一蛋白質相互作用為基礎的生化過程。研究者感興趣的是這些過程涉及到哪些特異的基因或DNA序列,有哪些蛋白質參與。盡管有許多人對染色質進行分類,就像Holde將其分為轉錄活性或非活性位點,但染色質構本身是動態的,并且DNA與非組蛋白
Active－Motif的染色質免疫沉淀試劑盒(ChIP)
ChIP（染色質免疫沉淀）方法是研究活體“蛋白質－DNA”相互反應的一種非常強大的工具。目前，這種方法用于染色質結構的動力學研究、轉錄因子的調節和輔助調節因子及其他表觀遺傳變化的研究。ChIP的使用過程分為三個主要步驟：第一步，在甲醛固定后分離和破碎染色質；第二步，使用感興趣的蛋白的抗體完成特定染色
植物染色質免疫沉淀試劑盒的使用說明
EpiQuik?植物染色質免疫沉淀試劑盒包括全套的試劑，允許試驗者有效地在體內研究蛋白-DNA相互關系。整個過程可以在6小時內完成，產品效果遠遠優于任何競爭對手的試劑盒。EpiQuik?植物染色質免疫沉淀試劑盒適用于將特異性免疫沉淀與定性和定量PCR、ChIP-Seq、ChIP-on-chip結合使
植物染色質免疫沉淀試劑盒（CHIP）的使用說明
蛋白質和DNA的相互作用是調控細胞反應過程的要素之一。染色質免疫沉淀分析方法（chromatin immunoprecipitation, CHIP）是研究活體內DNA和蛋白質的相互作用的最新最有力的研究工具。CHIP技術通過三大步驟實現：第一，甲醛固定后染色質分離和斷片；第二，運用特異蛋白
RNA蛋白免疫沉淀技術簡介
RIP技術（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RNA結合蛋白免疫沉淀），是研究細胞內RNA與蛋白結合情況的技術，是了解轉錄后調控網絡動態過程的有力工具，能幫助我們發現miRNA的調節靶點。RIP這種新興的技術運用針對目標蛋白的抗體把相應的RNA-蛋白復合
技術和方案20－對數生長
實驗步驟展
技術和方案21－EMS誘變
實驗步驟1.培養酵母細胞過夜，使細胞密度達到 2X108 個/ml。2.從同一培養物中轉移兩份 lml 的樣品至離心管中，5000 g，離心 10s 收集細胞。3.丟棄上清，用無菌蒸餾水懸浮細胞，再離心收集細胞。4.重懸細胞在 1 ml 的無菌 0.1mol/L 磷酸鈉中。5.用血球記數板測定細胞密
免疫沉淀法的技術特點
免疫沉淀法(Immunoprecipitation, IP)是一種研究蛋白質間交互作用的生物技術，這種技術是將蛋白質視為抗原，并利用抗體與之進行特異性結合的特性，來進行研究。這項技術可用來將含有上千種不同蛋白質的樣品中，分離和濃縮出特定蛋白質。進行免疫沉淀法時，抗體需要和一個受質結合。
RIP技術（RNA結合蛋白免疫沉淀）
RIP技術（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RNA結合蛋白免疫沉淀），是研究細胞內RNA與蛋白結合情況的技術，是了解轉錄后調控網絡動態過程的有力工具，能幫助我們發現miRNA的調節靶點。RIP這種新興的技術運用針對目標蛋白的抗體把相應的RNA-蛋白復合
免疫沉淀的方法特點和應用
免疫沉淀是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法。抗體與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯的珠子（agarose或Sepharose）孵育，通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復合物，沉淀經過洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸
免疫沉淀（Immunoprecipitation）實驗材料和方法
免疫沉淀是利用特異性抗體識別并分離抗原的方法。材料：上樣buffer的配方(用前現配):2ul 1.25M Tris-HCL , pH 6.835ul distilled water2.5ul 2-mercaptoethanol12.5ul 10%SDS10ul 80% glycerol2ul br
技術和方案24－挑取合子
實驗步驟 傳統篩選合子的方法是將接合混合物涂布在選擇平板上，二倍體細胞能生長，而單倍體細胞不能生長。合子的形態學特點使我們有可能從接合的單倍體細胞群體中將它識別出來，利用顯微操作平臺使我們很容易從未接合的細胞中分離合子。 如果單倍體細胞都是新鮮培養物，接合效果最好，一般從 30°C 培
技術和方案25－測定鋪板效率
實驗步驟菌株的鋪板效率是以培養基中可形成菌落的活力細胞的百分比衡量的（有時也稱為克隆形成單位或 cfu)。測定鋪板效率有以下兩種簡便的方法。間接法1.測定培養物中的細胞密度，用 Coulter 計數儀測定培養物光密度或用血球計數板統計細胞個數。2.確定要將細胞稀釋至 103 個/ml 所需要的稀釋系
大鼠ELISA試劑盒免疫沉淀技術
因此組織不可用甲醛固定，可用甲醛、乙醇等。PPA對組織內抗原（先與IgG結合）的定位，反應時間可以延長，大鼠ELISA試劑盒便于滲透入組織細胞內，且沒發現嚴重的物理吸附現象。在PPA實驗中稀釋液常用含0.5%（v/v）Tween20的0.02mol/L Ph 7.4 Tris-HC1緩沖液（2.42