辛酸－硫酸銨法(bitterammoniumsulfatelaw)從人血清中純化IgG
一、實驗目的初步掌握從血清中提取純化IgＧ的方法步驟。2. 了解辛酸－硫酸銨法純化IgG 的原理。二、實驗原理辛酸—硫酸銨法分兩步進行。第一步用辛酸沉淀雜蛋白，辛酸為短鏈脂肪酸，在酸性條件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig 蛋白質；第二步利用硫酸銨鹽析將Ig 沉淀下來，操作步驟如圖3－10所示。經SDS-PAGE 電泳檢測能得到電泳純度較高的Ig。三、儀器、原料和試劑儀器磁力攪拌器、離心機、低溫冰柜。 圖3—10 辛酸—硫酸銨法從血清中純化lgG 操作流程 原料 抗血清(兔抗雞血清) 試劑乙酸—乙酸鈉緩沖液：60mmol/L，pH4.02. 10×磷酸鹽-NaCl 緩沖液(PBS):100mmol/LPBS，pH7.4。稱NaCl 80g、Na2HPO4 12H2O 29g、KCl 2g 、KH2PO4 2g，加蒸餾水溶解，加入100mmol/LEDTA 20m1，用去離子水定容至l000mL。 3......閱讀全文
辛酸－硫酸銨法(bitterammonium－sulfate－law)從人血清中純化IgG
一、實驗目的初步掌握從血清中提取純化IgＧ的方法步驟。2. 了解辛酸－硫酸銨法純化IgG 的原理。二、實驗原理辛酸—硫酸銨法分兩步進行。第一步用辛酸沉淀雜蛋白，辛酸為短鏈脂肪酸，在酸性條件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig 蛋白質；第二步利用硫酸銨鹽析將Ig 沉淀下來，操作步驟如圖3－10所示
辛酸硫酸銨法從人血清中純化IgG
一、實驗目的1、初步掌握從血清中提取純化IgG的方法步驟。2、了解辛酸-硫酸銨法純化IgG 的原理。二、實驗原理辛酸-硫酸銨法分兩步進行。第一步用辛酸沉淀雜蛋白，辛酸為短鏈脂肪酸，在酸性條件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig蛋白質；第二步利用硫酸銨鹽析將Ig沉淀下來，操作步驟如圖3-10所示。
辛酸／硫酸銨法提純IgG
實驗概要本實驗介紹了辛酸/硫酸銨法提純IgG的原理和主要步驟。實驗原理在酸性條件下( pH4.5)，非1gG的蛋白成份(包括白蛋白，部分Ig)，能被辛酸等短鏈脂肪酸沉淀，上清中剩余的蛋白主要為IgG，再用硫酸銨沉淀上清，即可獲得純度較高的IgG。辛酸/硫酸銨法比硫酸銨法能夠獲得更高純度的IgG。主要
辛酸/硫酸銨法提純IgG
一、原理?在酸性條件下( pH4.5)，非1gG的蛋白成份(包括白蛋白，部分Ig)，能被辛酸等短鏈脂肪酸沉淀，上清中剩余的蛋白主要為IgG，再用硫酸銨沉淀上清，即可獲得純度較高的IgG。辛酸/硫酸銨法比硫酸銨法能夠獲得更高純度的IgG。?二、材料與方法?1、材料?（1）動物腹水?（2）辛酸(capr
辛酸/硫酸銨法提純IgG
實驗概要本實驗介紹了辛酸/硫酸銨法提純IgG的原理和主要步驟。實驗原理在酸性條件下( pH4.5)，非1gG的蛋白成份(包括白蛋白，部分Ig)，能被辛酸等短鏈脂肪酸沉淀，上清中剩余的蛋白主要為IgG，再用硫酸銨沉淀上清，即可獲得純度較高的IgG。辛酸/硫酸銨法比硫酸銨法能夠獲得更高純度的IgG。主要
辛酸/硫酸銨法提純IgG
一、原理在酸性條件下( pH4.5)，非1gG的蛋白成份(包括白蛋白，部分Ig)，能被辛酸等短鏈脂肪酸沉淀，上清中剩余的蛋白主要為IgG，再用硫酸銨沉淀上清，即可獲得純度較高的IgG。辛酸/硫酸銨法比硫酸銨法能夠獲得更高純度的IgG。二、材料與方法1、材料（1）動物腹水（2）辛酸(caprylic
辛酸硫酸銨沉淀法純化單抗各個步驟的原理
該方法純化的關鍵點為2步；第一步，辛酸——辛酸為短鏈脂肪酸，在酸性條件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig蛋白質；醋酸緩沖液，緩沖體系給予酸性條件；第二步，硫酸銨，——高濃度的鹽離子在蛋白質溶液中可與蛋白質競爭水分子，從而破壞蛋白質表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉淀出來。
抗體純化方法介紹
抗體制備制備出效價高，特異性強，穩定性好的抗體是免疫學實驗取得成功的基礎，抗體質量的好壞直接影響著研究者研究的成敗，不同的免疫學實驗方法（如ELISA，IHC，IP，ICC,SDS-PAGE, WB等）對抗體的效價，濃度和純度有不同的要求。我們知道，一般免疫血清中含有特異性抗體和非特異性抗體
硫酸銨純化法的應用
（一） 先用較低濃度的硫酸氨預沉淀，除去樣品中的雜蛋白。 1.邊攪拌邊慢慢加 SAS 到樣品溶液中，使濃度為 0.5:1 (v/v) ； 2.將溶液放在磁力攪拌器上攪拌 6 小時 或過夜（ 4 ° C ）；3.3000 ′ g 離心 30 min （ 4 ° C ），保留上清液；上清液再加 SAS
蛋白純化服務
蛋白純化服務內容1、純化抗血清、免疫腹水、細胞上清得到抗體IgG或IgM純化方法免疫親和層析純化法Protein A/G親和層析法辛酸-硫酸銨沉淀法飽和硫酸銨沉淀法等2、純化重組蛋白粗品3、純化客戶天然蛋白粗品純化方法離子交換疏水分子排阻色譜法4、可用客戶提供的抗體制備免疫親和層析柱，使用免疫親和層
DEAE—離子交換劑純化血清IgG
（一）原理離子交換是指液相中的離子與固定相上可解離基團的可逆交換反應。利用這個反應先將要分離的混合物在一定pH的溶液中解離，而后流經固定相，使之與固定相上的可解離基團進行離子交換，吸附于固定相上，凡不能進行交換吸附的成分，則流出層析柱外。再根據交換吸附于固定相上的各組分解離度的差別，運用不同的pH值
DEAE—離子交換劑純化血清IgG
實驗概要本文介紹了DEAE—離子交換劑純化血清IgG的原理及操作步驟等。實驗原理離子交換是指液相中的離子與固定相上可解離基團的可逆交換反應。利用這個反應先將要分離的混合物在一定pH的溶液中解離，而后流經固定相，使之與固定相上的可解離基團進行離子交換，吸附于固定相上，凡不能進行交換吸附的成分，則流出層
硫酸銨純化法所需儀器和試劑
1.組織培養上清液、血清樣品或腹水等?2. 硫酸銨（ NH 4 ） SO 4?3. 飽和硫酸銨溶液（ SAS ）?4. 蒸餾水?5. PBS( 含 0.2g /L 疊氮鈉 )?6. 透析袋?7.?超速離心機?8. pH 計?9.?磁力攪拌器
DEAE離子交換劑純化血清IgG
原理離子交換是指液相中的離子與固定相上可解離基團的可逆交換反應。利用這個反應先將要分離的混合物在一定pH的溶液中解離，而后流經固定相，使之與固定相上的可解離基團進行離子交換，吸附于固定相上，凡不能進行交換吸附的成分，則流出層析柱外。再根據交換吸附于固定相上的各組分解離度的差別，運用不同的pH值或不同
從免疫血清純化抗體
從免疫血清純化抗體1． 剪取一小條0.45 μm 的硝酸纖維膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸沒于1 ml1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。2． 取出膜，置于濾紙上干燥。3． 將膜放置于裝有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，輕輕震蕩混勻30 min。4． 移
從免疫血清純化抗體
1． 剪取一小條0.45 μm 的硝酸纖維膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸沒于1 ml，1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。2． 取出膜，置于濾紙上干燥。3． 將膜放置于裝有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，輕輕震蕩混勻30 min。4． 移去Buffer
IgG的分離與提純：硫酸銨沉淀法
實驗概要實驗室中常用硫酸銨沉淀后過DEAE 纖維素柱，比較簡便可獲較純的抗體。下面以此方法為例介紹IgG的分離與提純。實驗原理以抗原免疫動物來制備的抗血清是一個非常復雜的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特異性結合的抗體則主要是血清中的免疫球蛋白組分。通常用于制備酶標抗體或熒光抗體的免疫球蛋白必
IgG的分離與提純：硫酸銨沉淀法
以抗原免疫動物來制備的抗血清是一個非常復雜的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特異性結合的抗體則主要是血清中的免疫球蛋白組分。通常用于制備酶標抗體或熒光抗體的免疫球蛋白必須高度純化并具有特異性，不應含有非抗體的血清蛋白。因此，為了濃縮和提高抗體的效價，或為制備免疫球蛋白特異性抗體時，通常也需要分
IgG的分離與提純：硫酸銨沉淀法
實驗概要實驗室中常用硫酸銨沉淀后過DEAE 纖維素柱，比較簡便可獲較純的抗體。下面以此方法為例介紹IgG的分離與提純。實驗原理以抗原免疫動物來制備的抗血清是一個非常復雜的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特異性結合的抗體則主要是血清中的免疫球蛋白組分。通常用于制備酶標抗體或熒光抗體的免疫球蛋白必
IgG的分離與提純：硫酸銨沉淀法
以抗原免疫動物來制備的抗血清是一個非常復雜的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特異性結合的抗體則主要是血清中的免疫球蛋白組分。通常用于制備酶標抗體或熒光抗體的免疫球蛋白必須高度純化并具有特異性，不應含有非抗體的血清蛋白。因此，為了濃縮和提高抗體的效價，或為制備免疫球蛋白特異性抗體時，通常也需要分
血清IgG的分離制備—鹽析法
原理IgG是免疫球蛋白（Immunoglobulin，簡稱IgG）的主要成分之一，分子量約為15萬~16萬，沉降生活費數約為7s。IgG是動物和人體血漿的重要成分之一。血漿蛋白質的成分多達70余種，要從血漿中分離出IgG，首先要進行盡可能除去其他蛋白質成分的粗分離程序，使IgG在樣品中比例大為增高，
IgG的分離與提純實驗_硫酸銨沉淀法
IgG的分離與提純實驗可以用于：制備酶標抗體或熒光抗體。實驗方法原理硫酸銨沉淀法可用于從大量粗制劑中濃縮和部分純化蛋白質。用此方法可以將主要的免疫球從樣品中分離，是免疫球蛋白分離的常用方法。高濃度的鹽離子在蛋白質溶液中可與蛋白質競爭水分子，從而破壞蛋白質表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉淀出
多克隆抗體純化實驗_辛酸提取法
辛酸提取法可用于分離提取人、兔、小鼠血清中的Ig及雜交瘤誘生的腹水和培養上清液中McAb。實驗材料動物血清樣品試劑、試劑盒正辛酸醋酸緩沖液PBS儀器、耗材透析袋高速低溫離心機實驗步驟一、材料和試劑?1. ? 正辛酸?2. ?60 mmol/L，pH4.0醋酸緩沖液，PBS?3. ?透析袋?4. ?高
單克隆抗體的純化
一、腹水型單抗的純化?在單抗純化之前，一般均需對腹水進行預處理，目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過濾離心法，以前者處理效果為佳，而且操作簡便。?1、二氧化硅吸附法?新鮮采集的腹水（或凍存的腹水），2000r/min 15分鐘，除去細胞成分（
單克隆抗體的純化
一、腹水型單抗的純化在單抗純化之前，一般均需對腹水進行預處理，目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過濾離心法，以前者處理效果為佳，而且操作簡便。1、二氧化硅吸附法新鮮采集的腹水（或凍存的腹水），2000r/min 15分鐘，除去細胞成分（或
單克隆抗體的純化技術操作步驟
從培養液或腹腔積液獲得的單克隆抗體，不需要純化即可應用于日常診斷或定性研究。如果用于免疫標記測定，須分離和純化。可用半飽和、飽和硫酸銨進行沉淀，進行初步濃縮和純化；可用親和層析法進一步純化。一、腹水型單抗的純化在單抗純化之前，一般均需對腹水進行預處理，目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以
辛酸提取法純化多克隆抗體
該法可用于分離提取人、兔、小鼠血清中的Ig及雜交瘤誘生的腹水和培養上清液中McAb。 【材料和試劑】? （1）正辛酸。? （2）60mmol/L，pH4.0醋酸緩沖液，PBS。? （3）透析袋。? （4）高速低溫離心機。? 【操作步驟】 （1）將待提取樣品用60mmol/L，pH4.0
純化RNA實驗——從組織中純化總RNA
實驗材料組織試劑、試劑盒RNA 抽提緩沖液氯仿實驗步驟1. 從動物取下組織，直接進行第 2 步或在液氮中快速冷凍新鮮解剖的組織。冷凍后的組織可以貯存在 -70℃。2. 組織（0.05~0.3 g）在 2.0 ml RNA 抽提緩沖液中勻漿。3. 每管加 200 μl 氯仿，混合均勻，冰浴 15 分鐘
IgG抗體純化實驗
實驗材料 抗體試劑、試劑盒 SAS儀器、耗材 透析膜離心機實驗步驟 1. ?于4℃不斷攪拌下，往2體積的含有IgG的混合物中，逐滴加入1體枳pH7.0的SAS溶液。加完后置于4℃不間斷地攪拌此混合物2~4 h以形成沉淀。2 000 g 離心20 min。?2. ?用預冷的33% SAS溶液在漩渦混合
IgG抗體純化實驗
雖然親和層析法是進行特異性抗體純化的首選，然而有時這種純化方式卻非必需，或者無法實施進行。在大多數錆況下，運鐵蛋白可發生共沉淀或共純化，能用凝膠濾過層析去除之。實驗材料抗體試劑、試劑盒SAS儀器、耗材透析膜離心機實驗步驟1. ?于4℃不斷攪拌下，往2體積的含有IgG的混合物中，逐滴加入1體枳pH7.