慢病毒的包裝簡介及其應用范圍
慢病毒,( Lentivirus )載體是以 HIV-1 (人類免疫缺陷 I 型病毒)為基礎發展起來的基因治療載體。區別一般的逆轉錄病毒載體,它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。慢病毒載體的研究發展得很快,研究的也非常深入。慢病毒載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達。慢病毒在感染能力方面可有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞,從而達到良好的的基因治療效果,在美國已經開展了臨床研究,效果非常理想,因此具有廣闊的應用前景。 目前慢病毒也被廣泛地應用于表達 RNAi 的研究中。由于有些類型細胞脂質體轉染效果差,轉移到細胞內的 siRNA 半衰期短,體外合成慢病毒(RNAi)對基因表達的抑制作用通常是短暫的,因而使其應用受到較大的限制。采用事先在體外構建能夠表達 siRNA 的載體,然后轉移到細胞內轉錄慢病毒(RNAi) 的策略,不但使脂質體有效轉染的......閱讀全文
離心機的特點及其應用的范圍介紹
離心機的主要特點,一是使用范圍廣;二是對物料的適用性較強:三是產品的規格多、變形多。離心機一般是工藝流程中的后處理設備,直接關系到產品的最終質量。離心機和其它分離機械相比,不僅能得到含濕量低的固相和高純度的液相,而且具有節省勞力、減輕勞動強度、改善勞動條件,并且有連續運轉、自動遙控、操作安全可靠和占
關于慢病毒載體的介紹
慢病毒載體(Lentiviral vector)較逆轉錄病毒載體有更廣的宿主范圍,慢病毒能夠有效感染非周期性和有絲分裂后的細胞。慢病毒載體能夠產生表達shRNA的高滴度的慢病毒,在周期性和非周期性細胞、干細胞、受精卵以及分化的后代細胞中表達shRNA,實現在多種類型的細胞和轉基因小鼠中特異而穩定
慢病毒的濃縮與純化
實驗概要本文介紹了慢病毒濃縮與純化的兩種方法:超速離心沉淀法,PEG-8000濃縮法。實驗材料慢病毒上清液實驗步驟超速離心沉淀法: 1. 取6個Ultra-clear SW28離心管,用70%乙醇消毒后,放在超凈工作臺中打開紫外燈繼續消毒30分鐘; 2. 每個Ultra-clear SW28離心管中
慢病毒的濃縮與純化
方法一 超速離心沉淀法1. 取6個Ultra-clear SW28離心管,用70%乙醇消毒后,放在超凈工作臺中打開紫外燈繼續消毒30分鐘。2. 每個Ultra-clear SW28離心管中加入約32ml的預先處理的病毒上清液。3. 取一支10ml的移液管,吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。將移液管一
關于慢病毒的基本概述
慢病毒屬是反轉錄病毒科下的一個屬,包括8種能夠感染人和脊椎動物的病毒,原發感染的細胞以淋巴細胞和巨噬細胞為主,感染個體最終發病。慢病毒感染的顯著特點是感染個體在出現典型的臨床癥狀之前,大多經歷長達數年的潛伏期,之后緩慢發病,因此這些病原體被稱為慢病毒。例如人類免疫缺陷病毒(HIV)、猴免疫缺陷病
病毒包裝技術6——腺病毒包裝流程介紹
1. 細胞的準備 a) 復蘇293細胞,傳代培養1-2代,調整好細胞狀態,務必4代以內完成轉染實驗。 b) 在轉染前1天,用胰酶消化傳代,將5×105細胞接種于6孔板或87.5px皿中,加入2ml完全培養基(DMEM+10%FBS+1%P/S+1%Glutamax),搖勻后置于5%
病毒包裝技術——病毒包裝實驗經驗總結
第一,細胞狀態、載體系統、目的基因對病毒包裝影響(基因大小、序列情況、蛋白功能毒性等)是三個主要影響病毒質量的因素。第二,細胞狀態需要有豐富的細胞培養經驗來判斷,比如包裝或轉染感染前一定要重視細胞干凈細微污染與否、飽滿立體感是否好、鋪板均勻細胞密度適中否等性狀。另外轉染時細胞的密度要十分注意,一般在
病毒包裝技術——腺相關病毒(AAV)包裝(一)
摘要:腺相關病毒(AAV)是一種人細小病毒,?因為能作為一種基因治療載體而受到廣泛關注。目前大多數生成rAAV的實驗方案需要共轉染一個載體質粒和一個表達病毒復制和結構基因的包裝質粒到腺病毒(Ad)感染的培養細胞中。但是也可以通過新的輔助質粒(pH3和pH5),排除了Ad共轉染的需求。輔助質粒表達AA
病毒包裝技術——腺相關病毒(AAV)包裝(二)
2.3?蛋白質分析?為了分析AAV Rep和Cap蛋白質表達,按照2.2部分所述進行質粒轉染。轉染后48小時,將培養物刮到冷PBS/Mg(PBS含有5mM MgCl2),細胞低速離心沉淀收獲。細胞沉淀在冰上用200ml STM-NP緩沖液(25mM蔗糖,10mM Tris-HCl,pH8
慢病毒轉染細胞步驟
一、慢病毒轉染 貼壁細胞實驗方法1、慢病毒轉染 前18-24小時,將貼壁細胞以1×10^5/孔鋪到24孔板中。使細胞在慢病毒轉染時的數量為2×10^5/孔左右。2、第二天,用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鮮培養基替換原培養基,加入適量病毒懸液。37℃孵育。3、(對polybrene
慢病毒轉染細胞步驟
一、慢病毒 ?轉染貼壁細胞實驗方法 1、慢病毒轉染前18-24小時,將貼壁細胞 ?以1×10^5/孔鋪到24孔板中。使細胞在慢病毒轉染時的數量為2×10^5/孔左右。 2、第二天,用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鮮培養基 ?替換原培養基,加入適量病毒懸液。37℃孵育。
病毒包裝的原理
質粒 DNA 和其他包裝質粒共轉染細胞(293T 細胞)產生病毒,即為病毒包裝。293T 細胞是由 293 細胞派生, 表達 SV40 大 T 抗原的人腎上皮細胞系, 被廣泛應用于瞬時轉染以過表達各種目標蛋白, 或是用以包裝病毒。病毒包裝的原理(以慢病毒包裝為例)質粒 DNA 為能轉錄出慢病毒遺傳物
大氣預濃縮儀的應用范圍及其優勢特點
大氣預濃縮儀主要適用領域有:??1、工業衛生,工作現場有毒氣體分析。??2、工業污染源的測試和鑒定。??3、城市環境空氣質量監測,路邊站,重點監測區監測等,如非甲烷碳氫化合物,環境空氣VOCs的晝夜變化和來源分析。??4、化學戰劑監測。??5、惡臭硫化物的監測。??Nutech大氣預濃縮儀適用于環境
聚醚砜濾芯的介紹、特性以及其應用范圍
? ? ?產品介紹:聚醚砜濾芯,其過濾介質是當今世界上先進的聚醚砜微孔濾膜,聚醚砜膜膜孔占濾膜體積80%以上的微孔開孔率,具有獨特的微孔幾何形狀,提高了對過濾難度較大溶液的過濾效率和流通量。采用聚醚砜和聚丙烯支撐兩種材料組合熱熔構成,無粘結物,適用于要求比較嚴格的化工和制藥工業。?????? 主要特
廢水結晶蒸發器的應用范圍及其結構
一、廢水結晶蒸發器的應用范圍:在制漿造紙、煤化工、脫硫廢水等領域的含鹽廢水處理工藝中,通過預處理、超濾+反滲透、納濾、電滲析等工藝可以回收大部分水,但是不可避免會產生一部分高濃度含鹽廢水。這些高濃含鹽廢水中含有大量的氯化鈉和硫酸鈉等無機鹽,如果不加以處理直接外排,不僅會會導致資源的大浪費,還會造成當
慢病毒和其他病毒的特征比較介紹
常用的病毒載體有腺病毒、逆轉錄病毒和慢病毒。逆轉錄病毒載體只能感染分裂期細胞,而且容量有限,腺病毒一般不能整合到染色體上,只能進行瞬時感染。與其它逆轉錄病毒相比,慢病毒(LV)具有可以感染非分裂期細胞、容納外源性基因片段大,可以長期表達等顯著優點。慢病毒不產生任何有效的細胞免疫應答,可作為一種體
簡介熱敏電阻的應用范圍
熱敏電阻也可作為電子線路元件用于儀表線路溫度補償和溫差電偶冷端溫度補償等。利用NTC熱敏電阻的自熱特性可實現自動增益控制,構成RC振蕩器穩幅電路,延遲電路和保護電路。在自熱溫度遠大于環境溫度時阻值還與環境的散熱條件有關,因此在流速計、流量計、氣體分析儀、熱導分析中常利用熱敏電阻這一特性,制成專用
簡介高壓漩渦氣泵的應用范圍
旋渦氣泵是一種吹氣兩用的通風氣源,它主要用于;切紙機、燃燒降氧機、卷機濾嘴成型機、電鍍槽液攪拌、霧化干燥機、養魚增氧、水處理爆氣、絲網印刷機、照相制板機、自動上料機、液體灌裝機、粉末灌裝機、電焊設備、電影機械、紙張輸送、干洗衣服的清潔、空氣除塵、干瓶、氣體傳送、送料、收集等方面;。
簡介頻率計的應用范圍
在傳統的電子測量儀器中,示波器在進行頻率測量時測量精度較低,誤差較大。頻譜儀可以準確的測量頻率并顯示被測信號的頻譜,但測量速度較慢,無法實時快速的跟蹤捕捉到被測信號頻率的變化。正是由于頻率計能夠快速準確的捕捉到被測信號頻率的變化,因此,頻率計擁有非常廣泛的應用范圍。 在傳統的生產制造企業中,頻
丙型肝炎病毒的檢測策略及其應用(一)
丙型肝炎病毒(HCV)引起丙型肝炎,因臨床癥狀不明顯,易造成漏診或誤診,延誤治療;因此,臨床醫生將HCV實驗室檢測結果作為主要的診斷依據,以便及時采取相應措施,有利于疾病診斷、治療和阻斷HCV傳播;血站通過HCV檢測篩查獻血員可以有效阻斷血液傳播這一途徑,保障血液及血液制品安全;HCV檢測也為公共衛
丙型肝炎病毒的檢測策略及其應用(二)
1、血液篩查:HCV可以通過多種途徑傳播,目前發達國家以靜脈吸毒為主要傳播途徑;HCV也可通過血液傳播,經皮的血液暴露感染HCV的危險性是HIV的10倍。世界衛生組織報告,從20世紀90年代開始,大多數工業國家開始對獻血者進行血液篩查,如今這些國家通過血液感染HCV占總感染人群的比例明顯降低。199
渦流測厚儀簡介和應用范圍
簡介 渦流測厚儀是一種小型便攜式儀器。性能穩定、測量準確、重現性好、經濟耐用,符合國家標準GB/T4957,多次通過國家技術監督部門的性能試驗,獲得計量器具制造許可證。 應用范圍 渦流測厚儀,用于檢測各種非磁性金屬基體上非導電覆蓋層的厚度。例如:鋁型材、鋁板、鋁管、鋁塑板、鋁工件表面的陽極
病毒包裝技術7——腺相關病毒(AAV)包裝介紹
銳賽小課堂技術篇0702-113 摘要: 腺相關病毒(AAV)是一種人細小病毒, 因為能作為一種基因治療載體而受到廣泛關注。目前大多數生成rAAV的實驗方案需要共轉染一個載體質粒和一個表達病毒復制和結構基因的包裝質粒到腺病毒(Ad)感染的培養細胞中。但是也可以通過新的輔助質粒(pH
肺癌研究中慢病毒工具在體內外模型中的應用
引言:上海吉凱基因化學技術有限公司成立于2002年,擁有國內最大的慢病毒文庫,同時也是國內最大的疾病關鍵基因科研服務供應商,在疾病研究領域的實驗積累已逾14年!在這里,我們為大家特別整理了10多個研究領域的經驗所得,將最實用的精華分享給大家!肺癌作為世界范圍內第一大常見腫瘤,這次就當仁不讓先來分
肺癌研究中慢病毒工具在體內外模型中的應用
引言:上海吉凱基因化學技術有限公司成立于2002年,擁有國內最大的慢病毒文庫,同時也是國內最大的疾病關鍵基因科研服務供應商,在疾病研究領域的實驗積累已逾14年!在這里,我們為大家特別整理了10多個研究領域的經驗所得,將最實用的精華分享給大家!肺癌作為世界范圍內第一大常見腫瘤,這次就當仁不讓先來分享,
關于慢病毒表達載體的介紹
慢病毒表達載體,即通常所說的穿梭載體,包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA 到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞,在細胞中進行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基中
關于慢病毒腦炎的病理介紹
大體可見腦呈海綿狀變,皮質、基底節和脊髓萎縮變性;顯微鏡下可見神經元丟失、星形膠質細胞增生、海綿狀變性,即細胞胞漿中空泡形成和感染腦組織內可發現異常PrP淀粉樣斑塊,無炎癥反應。變異型CJD的病理學改變為海綿狀變性以丘腦最為明顯,且海綿狀區域出現的PrP陽性的淀粉樣斑塊與傳統的類型不同。
關于慢病毒載體的概念介紹
慢病毒載體是指以人類免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 來源的一種病毒載體,慢病毒載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息,是慢病毒載體系統的主要組成部分。攜帶有外源基因的慢病毒載體在慢病毒包裝質粒、細胞系的輔助下,經過病毒包裝成為有感染力的病毒顆粒,通過感染細胞或活體組織,實現外源基因在
使用慢病毒的注意事項
使用慢病毒注意事項?1. 病毒操作時最好使用生物安全柜。如果使用普通超凈工作臺操作病毒,請不要打開排風機。?2. 病毒操作時請穿實驗服,帶口罩和手套。?3. 操作病毒時特別小心不要產生氣霧或飛濺。如果操作時超凈工作臺有病毒污染,請立即用70%乙醇加1%的SDS 溶液擦拭干凈。接觸過病毒的槍頭,離心管
簡述慢病毒載體的輔助成分
慢病毒載體輔助成分包括: 慢病毒包裝質粒和可產生病毒顆粒的細胞系。 慢病毒載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA 到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞,在細胞中進行病毒的包裝