從PEI沉淀洗脫σ32和RNA聚合酶實驗
試劑、試劑盒 緩沖液 A 含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol LNaCl 的緩沖液 A儀器、耗材 SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠實驗步驟 材料與設備SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠（10%)試劑緩沖液 A含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol/LNaCl 的緩沖液 A(配方，見“試劑的配制”，PP.184~189)操作程序1)PEI 懸液（見 p.153) 于離心前取 6X50ul 等分試樣。各試樣用微型離心機離心 lmin, 然后用 50ul 分別含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol/LNaCl 的緩沖液 A 重懸沉淀物。2) 充分混勻后靜置 10~15mi。再用微型離心機離心 lmin，取上清樣品，如需要，進行快速蛋白質斑點印跡試驗（見 pp.l72~173) 和 SDS-PAGE 電泳分析。結果典型的顯示 NaCl 洗脫實驗結果的 SDS 凝膠照......閱讀全文
從－PEI－沉淀洗脫σ32－和－RNA－聚合酶實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 緩沖液 A 含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol LNaCl 的緩沖液 A 儀器、耗材
從－PEI－沉淀洗脫σ32－和－RNA－聚合酶實驗
試劑、試劑盒緩沖液 A含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol LNaCl 的緩沖液 A儀器、耗材SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠實驗步驟材料與設備SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠（10%)試劑緩沖液 A含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol/LNa
從－PEI－沉淀洗脫σ32－和－RNA－聚合酶實驗
試劑、試劑盒 緩沖液 A 含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol LNaCl 的緩沖液 A儀器、耗材 SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠實驗步驟 材料與設備SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠（10%)試劑緩沖液 A含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol
沉淀－σ32－和－RNA－聚合酶實驗
試劑、試劑盒聚乙烯亞胺儀器、耗材SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠實驗步驟材料與設備SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠（10%)試劑聚乙烯亞胺（PEI)(6% 儲液，pH7.9)(配方，見“試劑的配制”，pp.184~189)操作程序1)0.2%DOC 上清 (見 p.153), 取 6
沉淀－σ32－和－RNA－聚合酶實驗
試劑、試劑盒 聚乙烯亞胺儀器、耗材 SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠實驗步驟 材料與設備SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠（10%)試劑聚乙烯亞胺（PEI)(6% 儲液，pH7.9)(配方，見“試劑的配制”，pp.184~189)操作程序1)0.2%DOC 上清 (見 p.153)
沉淀－σ32－和－RNA－聚合酶實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 聚乙烯亞胺 儀器、耗材 SDS-PAGE 電泳裝置 聚丙烯酰胺小膠
PEI－沉淀法分級分離可溶性提取物實驗
材料與設備提取液〔0.2% 脫氧膽酸鈉 (DOC) 上清，見實驗 1，P.146~147〕Tissuc-TearorTM 勻漿器（Fisher Scientific 15-338-55)硫酸銨 (AMS)試劑聚乙烯亞胺 (PEI)(10% 儲液,pH7
PEI－沉淀法分級分離可溶性提取物實驗
試劑、試劑盒 提取液硫酸銨聚乙烯亞胺 緩沖液 A二硫蘇糖醇儀器、耗材 Tissuc-TearorTM 勻漿器實驗步驟 材料與設備提取液〔0.2% 脫氧膽酸鈉 (DOC) 上清，見實驗 1，P.146~147〕Tissuc-TearorTM 勻漿器（Fisher Scientific 15-338-5
PEI－沉淀法分級分離可溶性提取物實驗
試劑、試劑盒提取液硫酸銨聚乙烯亞胺緩沖液 A二硫蘇糖醇儀器、耗材Tissuc-TearorTM 勻漿器實驗步驟材料與設備提取液〔0.2% 脫氧膽酸鈉 (DOC) 上清，見實驗 1，P.146~147〕Tissuc-TearorTM?勻漿器（Fisher Scientific 15-338-55)硫酸
RNA－和－DNA－提取：洗脫
DNA 提取方案的還剩余IDE步驟步就是從硅膠中釋放純 DNA 或 RNA。對于 DNA 制備,通常使用 pH 值為 8-9 的 10 mM Tris。DNA 在弱堿性 pH 值下更穩定,在緩沖液中溶解得更快。即使對于 DNA 顆粒也是如此。水的 pH 值往往較低,低至 4-5,并且高分子量 DNA
蛋白質沉淀技術
在過去的 100 年里，雖然人們已經使用過多種不同的沉淀方法，但是 AS 沉淀一直都得到了最廣泛的應用，尤其對于酸性蛋白質。此外，PEI 沉淀的應用也正日益普及。接下來，將會對這兩種方法進行詳細的討論, 隨后對其他幾種沉淀方法做簡單概述，并針對沉淀過程中沉淀的處理和純化效率的最大化提出一般性建議。實
蛋白質沉淀技術
蛋白質沉淀技術 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 一、AS 沉淀 1.原理 雖然有些其他鹽類也可以用做沉淀劑，但是 AS
免疫親和層析實驗
試劑、試劑盒免疫親和介質溴化氰（CNBr)活化的 Sepharose 4BHCl55% 飽和 AMS 沉淀物偶聯緩沖液乙醇胺緩沖液 BLAC 洗脫緩沖液二硫蘇糖醇硫氰酸鉀疊氮鈉儀器、耗材Econo-柱SDS-PAGE 電泳裝置實驗步驟材料與設備免疫親和介質（帶固定化的 MAb NT73; 見下文)溴
免疫親和層析實驗
試劑、試劑盒 免疫親和介質溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4BHCl55% 飽和 AMS 沉淀物偶聯緩沖液乙醇胺緩沖液 BLAC 洗脫緩沖液二硫蘇糖醇硫氰酸鉀疊氮鈉儀器、耗材 Econo-柱SDS-PAGE 電泳裝置實驗步驟 材料與設備免疫親和介質（帶固定化的 MAb NT73; 見
免疫親和層析實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 免疫親和介質 溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4B HCl 55% 飽和 AMS 沉淀物 偶聯緩沖液
蛋白質沉淀技術（三）
3.策略 C 的基本操作程序(1) 配制 10%(V/V)[5%(m/V)] 的 PEI 儲存液。PEI(WV) 常以 50%(m/V) 的黏稠液體狀態存在（來自于 MPBiochemicals 的 PEI, 其相對分子質量 Mw=50000?100000, 也可采用其他來源，如 Sigma 和
細菌過表達產物（無二硫鍵者）新純化實驗
實驗步驟 操作程序第 1 天今天的目的是試驗 T7 RNA 聚合酶表達的誘導條件，確定其在上清/沉淀中的分布情況，并為第二天的分離純化步驟作出初步評估。1) 取一份 50-ml 經低密度培養過夜的大腸桿菌細胞培養物，開始工作。2) 于 A600n
細菌過表達產物（無二硫鍵者）新純化實驗
實驗步驟操作程序第 1 天今天的目的是試驗 T7 RNA 聚合酶表達的誘導條件，確定其在上清/沉淀中的分布情況，并為第二天的分離純化步驟作出初步評估。1) 取一份 50-ml 經低密度培養過夜的大腸桿菌細胞培養物，開始工作。2) 于 A600nm 為 0.3~0.7 時，用 0.8 mmol/L I
細菌過表達產物（無二硫鍵者）新純化實驗
實驗步驟 操作程序第 1 天今天的目的是試驗 T7 RNA 聚合酶表達的誘導條件，確定其在上清/沉淀中的分布情況，并為第二天的分離純化步驟作出初步評估。1) 取一份 50-ml 經低密度培養過夜的大腸桿菌細胞培養物，開始工作。2) 于 A600nm 為 0.3~0.7 時，用 0.8 mmol/L
包涵體沉淀（σ32)的溶解、重折疊和離子交換層析實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 包涵體沉淀 緩沖液 A 脫氧膽酸鈉 N-十二烷基肌氨酸鈉 儀器、耗材
包涵體沉淀（σ32)的溶解、重折疊和離子交換層析實驗
試劑、試劑盒?包涵體沉淀緩沖液 A脫氧膽酸鈉N-十二烷基肌氨酸鈉儀器、耗材?Tissuc-TearorTM 勻漿器透析袋POROS 50S 陽離子交換柱SDS-PAGE 電泳裝置實驗步驟 材料與設備包涵體沉淀 (見實驗 1,P.147)Tissuc-TearorTM 勻漿器（FisherScient
包涵體沉淀（σ32)的溶解、重折疊和離子交換層析實驗
試劑、試劑盒包涵體沉淀緩沖液 A脫氧膽酸鈉N-十二烷基肌氨酸鈉儀器、耗材Tissuc-TearorTM 勻漿器透析袋POROS 50S 陽離子交換柱SDS-PAGE 電泳裝置實驗步驟材料與設備包涵體沉淀 (見實驗 1,P.147)Tissuc-TearorTM?勻漿器（FisherScientifi
蛋白質沉淀技術（二）
(4) 小心倒出上清液，并測量其體積。依據表 20.1 所示的以百分飽和度從低到高的順序加入 AS 以確定所需 AS 的質量。繼續伴以快速的攪拌并緩慢加入 AS，以避免局部形成較高鹽濃度，之后靜置 30 min, 使其形成沉淀。(5) 如步驟 (3) 中所示進行離心。盡量去除上清液, 若之前已經仔細
競爭性－RTPCR:－競爭子－RNA－的構建實驗
試劑、試劑盒 乙醇雙蒸水DNA 模板[a-32P]ATP儀器、耗材 RT-PCR 競爭子構建試劑盒實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑乙醇去除 RNA 酶的雙蒸水2. 核酸和寡核苷酸DNA 模板（0.5~1.0ug 線性化的質粒模板或 0.1~0.5ugPCR 模板）3. 放射性復合物[a-3
競爭性－RTPCR:－競爭子－RNA－的構建實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙醇 雙蒸水 DNA 模板 [a-32P]ATP 儀器、耗材 RT
競爭性－RTPCR:－競爭子－RNA－的構建實驗
第一部分：競爭子的設計；第二部分：競爭子RNA的合成、純化和定量。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒乙醇雙蒸水DNA 模板[a-32P]ATP儀器、耗材RT-PCR 競爭子構建試劑盒實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑乙醇去除 RNA 酶的雙蒸水2. 核酸
純化RNA實驗——從組織中純化總RNA
實驗材料組織試劑、試劑盒RNA 抽提緩沖液氯仿實驗步驟1. 從動物取下組織，直接進行第 2 步或在液氮中快速冷凍新鮮解剖的組織。冷凍后的組織可以貯存在 -70℃。2. 組織（0.05~0.3 g）在 2.0 ml RNA 抽提緩沖液中勻漿。3. 每管加 200 μl 氯仿，混合均勻，冰浴 15 分鐘
酶測定法實驗
在本單元中，用一種較簡單的方法測定它對核心 RNA 聚合酶自非特異性模板 poly(dAT) 起始轉錄的刺激作用。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南，作者：朱厚礎。試劑、試劑盒核心 RNA 聚合酶純σ32 標準品純化的 σ32 樣品核心 RNA 聚合酶-σ32 復合物樣品[α-32P]UTP終止液
酶測定法實驗
酶測定法實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 核心 RNA 聚合酶 純σ32 標準品 純化的 σ32 樣品
酶測定法實驗
試劑、試劑盒 核心 RNA 聚合酶純σ32 標準品純化的 σ32 樣品核心 RNA 聚合酶-σ32 復合物樣品[α-32P]UTP終止液DEAE-纖維素（DE81) 紙片P04 清洗緩沖液乙醇反應液儀器、耗材 水浴鍋實驗步驟 材料與設備核心 RNA 聚合酶 (2.3 mg/ml)純σ32 標準品 (