核酸酶保護實驗
實驗材料 核酸酶試劑、試劑盒 ATPCTPGTPMUTPEDTANaCl甲酰胺Tris-HClRNase ARNase T1RNasinDTTUTPT7RNA聚合酶DNaseⅠ飽和酚氯仿酵母tRNANaAc無水乙醇SDS蛋白酶K異丙醇丙烯酰胺亞甲雙丙烯酰胺TBE尿素過硫酸胺TEMED儀器、耗材 低溫離心機恒溫培養箱恒溫水浴鍋電泳儀保鮮膜實驗步驟 1. 在一個高壓過的微量離心管中建立20 μl 的反應復合物如下：（1）4 μl 5×轉錄緩沖液（2）1 μl 200 mmol/的3NTP混合液（3）10 μl ［α-32P］CTP（4）1 μl 胎盤核酸酶抑制劑（5）1 μl 1 mg/ml 模板DNA（6）1 μl 噬菌體RNA聚合酶（7）SP6 RNA聚合酶反應時在40℃保溫30~60 min。采用T7或T3 RNA聚合酶則在37℃溫育。&nbs......閱讀全文
核酸酶保護實驗
實驗材料核酸酶試劑、試劑盒ATPCTPGTPMUTPEDTANaCl甲酰胺Tris-HClRNase ARNase T1RNasinDTTUTPT7RNA聚合酶DNaseⅠ飽和酚氯仿酵母tRNANaAc無水乙醇SDS蛋白酶K異丙醇丙烯酰胺亞甲雙丙烯酰胺TBE尿素過硫酸胺TEMED儀器、耗材低溫離心機
什么是核酸酶？
核酸酶有DNase、RNase、核酸酶S1等，可水解相應的DNA和RNA，核酸酶S1可降解單鏈DNA和RNA，用量增大也可降解雙鏈核酸。它可用于切去ds-cDNA合成中產生的發夾環。 末端轉移酶在Mg 存在下，選擇3′－OH端單鏈DNA為引物加成核苷酸，在Co 存在下，選擇3′－OH端雙鏈DN
核酸酶保護實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 核酸酶 試劑、試劑盒 ATP CTP GTP MUTP
核酸酶保護實驗
實驗材料 核酸酶試劑、試劑盒 ATPCTPGTPMUTPEDTANaCl甲酰胺Tris-HClRNase ARNase T1RNasinDTTUTPT7RNA聚合酶DNaseⅠ飽和酚氯仿酵母tRNANaAc無水乙醇SDS蛋白酶K異丙醇丙烯酰胺亞甲雙丙烯酰胺TBE尿素過硫酸胺TEMED儀器、耗材 低溫
外切核酸酶的種類
為限制性核酸內切酶（restrictionendonuclease，簡稱限制酶）。當外源DNA侵入細菌后，限制性內切酶可將其水解切成片段，從而限制了外源DNA在細菌細胞內的表達，而細菌本身的DNA由于在該特異核苷酸順序處被甲基化酶修飾，不被水解，從而得到保護。 限制性核酸內切酶的研究和應用發展
核酸酶的主要種類
核酸外切酶有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸，所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸，稱為3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸
RNA－SI－核酸酶作圖
實驗材料 [γ-32P」ATP合適的寡核苷酸DNA 模板l10XdNTP 混合物KLenow 片段合適的限 制性內切核酸酶X 射線膠片洗脫緩沖液tRNA 石蠟油S1 核酸酶試劑、試劑盒 10X 激酶緩沖液PNK10X 復性緩沖液6% 聚丙烯酰胺 8mol L 尿素溶液 (溶于 0.5XTBE) 及甲
兆核酸酶的定義
中文名稱兆核酸酶英文名稱meganuclease定 義一類核酸酶內切酶，其識別序列較長，位點極為罕見，切割產生的片段很大，是定位基因操作的工具。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
核酸酶的發展歷史
20世紀70年代，在細菌中陸續發現了一類核酸內切酶，能專一性地識別并水解雙鏈DNA上的特異核苷酸順序，稱為限制性核酸內切酶（restriction endonuclease，簡稱限制酶）。當外源DNA侵入細菌后，限制性內切酶可將其水解切成片段，從而限制了外源DNA在細菌細胞內的表達，而細菌本身的DN
RNA－SI－核酸酶作圖
? ? ? ? ? ? 實驗材料 [γ-32P」ATP 合適的寡核苷酸 DNA 模板l 10XdNTP 混合物 KLenow 片段 合適的限 制性內切核酸酶
外切核酸酶的種類
20世紀70年代，在細菌中陸續發現了一類核酸內切酶，能專一性地識別并水解雙鏈DNA上的特異核苷酸順序，稱為限制性核酸內切酶（restrictionendonuclease，簡稱限制酶）。當外源DNA侵入細菌后，限制性內切酶可將其水解切成片段，從而限制了外源DNA在細菌細胞內的表達，而細菌本身的DNA
核酸酶的分類介紹
核酸外切酶有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸，所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸，稱為3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸
核酸酶的作用機制
不同來源的核酸酶，其專一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，稱為核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于DNA，稱為脫氧核糖核酸酶（DNase），有些核酸酶專一性較低，既能作用于RNA也能作用于DNA，因此統稱為核酸酶（nuclease）。根據核酸酶作用的位置不同，又可將核酸酶
外切核酸酶的介紹
一、核酸外切酶 有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸，所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸，稱為3′→5′外切酶，例
核酸酶的基本信息
能夠將聚核苷酸鏈的磷酸二酯鍵切斷的酶，稱為核酸酶。核酸酶屬于水解酶，作用于磷酸二酯鍵的P-O位置。?核酸酶是在核酸分解的第一步中，作用于水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵的一種核酸。在高等動植物中都有作用于磷酸二酯鍵的。不同來源的核酸酶，其專一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，稱為核糖核酸
外切核酸酶的基本介紹
一、核酸外切酶有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸，所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸，稱為3′→5′外切酶，例如，蛇毒
什么是核糖核酸酶？
指能水解RNA磷酸二酯鍵的酶稱核糖核酸酶(ribonuclease，RNase)。不同的RNase其專一性不同，例如牛胰核糖核酸酶(RNase I)，它的作用位點是嘧啶核苷3’一磷酸與其他核苷酸之間的連接鍵，而核糖核酸酶T1(RNase T1)的作用位點是3’鳥苷酸與其他相鄰核酸之間的5’一OH
核酶和核酸酶的區別
核酶是有催化活性的RNA, 即化學本質是RNA,卻具有酶的催化功能。核酶的功能很包括切割RNA、切割DNA,、連接RNA、磷酸酶活性等。與蛋白質酶相比，核酶的催化效率較低，是一種較為原始的催化酶。核酶可降解特異的mRNA序列。核酶又稱核酸類酶、酶RNA、核酶類酶RNA。 它的發現打破了酶是蛋白質的傳
核糖－核酸酶H的定義
所有類型細胞均含有不止一種核糖核酸酶H。核糖核酸酶H(RNaseH)催化DNA-RNA雜合體的RNA部分的核內降解，產生不同鏈長帶3'羥基和5'磷酸末端的寡核糖核酸。
核糖－核酸酶H的特征
在許多反轉錄病毒中與多功能酶的反轉錄酶有關，在病毒基因組進入DNA轉錄的不同階段執行重要的功能。在真細菌中，核糖核酸酶H確信在以下方面是所必需的：從Okazaki片段去除RNA引物時、在轉錄子進入DNA聚合酶I啟動DNA合成所用引物的轉錄過程時，以及在去除R-環為在大腸桿菌染色體復制起點提供不規則D
外切核酸酶的基本介紹
核酸分解的第一步是水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵,在高等動植物中都有作用于磷酸二酯鍵的核酸酶。不同來源的核酸酶,其專一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA,稱為核糖核酸酶（RNase）,有些核酸酶只能作用于DNA,稱為脫氧核糖核酸酶（DNase）,有些核酸酶專一性較低,既能作用于RNA
核糖核酸酶的分類
（一）核糖核酸酶A核糖核酸酶A（RNase A）來源于牛胰臟，是一種內切核糖核酸酶，可特異攻擊RNA上嘧啶殘基的3’端，切割胞嘧啶或尿嘧啶與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵，反應終產物是3’嘧啶核苷酸和末端帶3’嘧啶核苷酸的寡核苷酸。無輔助因子及二價陽離子存在時，核糖核酸酶A的作用可以被胎盤RNA酶抑制劑
核酸酶的基本分類
能夠將聚核苷酸鏈的磷酸二酯鍵切斷的酶，稱為核酸酶。核酸酶屬于水解酶，作用于磷酸二酯鍵的P-O位置。?核酸酶是在核酸分解的第一步中，作用于水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵的一種核酸。在高等動植物中都有作用于磷酸二酯鍵的。
核糖核酸酶保護分析
一、體外轉錄在無菌1.5 ml 微型離心管中，結合以下內容：4 ul 5倍轉錄緩沖液2 ul 0.1 M DTT4 ul 2.5 MM NTP（A，C，G）0.8 ul RNA酶抑制劑（25 U/ul）RNA酶抑制劑（Promega）中100 UM冷UTP1 ul/ug ?UL線性DNA模板5 ul
SI核酸酶特性和用途
這是一種從米曲霉（Aspergillus oryzae）中分離的高度單鏈特異的外切酶。活性：可以降解單鏈DNA或RNA或雙鏈的單鏈區。其主要用途有：1. 在cDNA合成過程中，切開cDNA的發夾末端；2. 載體構建過程中，切去DNA片段的單鏈尾巴，形成平末端結構。
概述核酸酶的發展歷史
20世紀70年代，在細菌中陸續發現了一類核酸內切酶，能專一性地識別并水解雙鏈DNA上的特異核苷酸順序，稱為限制性核酸內切酶（restriction endonuclease，簡稱限制酶）。當外源DNA侵入細菌后，限制性內切酶可將其水解切成片段，從而限制了外源DNA在細菌細胞內的表達，而細菌本身的
核糖－核酸酶H的定義
所有類型細胞均含有不止一種核糖核酸酶H。核糖核酸酶H(RNaseH)催化DNA-RNA雜合體的RNA部分的核內降解，產生不同鏈長帶3'羥基和5'磷酸末端的寡核糖核酸。
核酸酶的發展歷史介紹
20世紀70年代，在細菌中陸續發現了一類核酸內切酶，能專一性地識別并水解雙鏈DNA上的特異核苷酸順序，稱為限制性核酸內切酶（restriction endonuclease，簡稱限制酶）。當外源DNA侵入細菌后，限制性內切酶可將其水解切成片段，從而限制了外源DNA在細菌細胞內的表達，而細菌本身的
5.5－RNA－SI－核酸酶作圖
SI 核酸酶是種內切酶，它是從米曲霉米曲霉 (Aspergillusoryzae) 中分離得到。它能降解單鏈核酸，卻不能降解雙鏈核酸。此外，它能高靈敏度地降解局部錯配的雙鏈分子，即使只有一對堿基錯配，也能因 S1 核酸酶的切割而被檢測出來。用 S1 核酸酶來識別和切割錯配或未復性的區域，再通過變性內
內切核酸酶的基本信息
中文名稱內切核酸酶英文名稱endonuclease定 義從核酸分子內部切割磷酸二酯鍵而生成DNA片段的酶。應用學科遺傳學（一級學科），分子遺傳學（二級學科）