DNA作圖實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 限制酶緩沖液儀器、耗材 電泳儀實驗步驟 用低頻率切割的不同限制性內切酶分別完全消化DNA。2. 從每個反應取小份樣品作電泳分析,用已知的分子量標準作對照。剩余的樣品置于冰浴。3. 比較分子量標準估算出DNA片段的長度,推導出每種限制性內切酶的酶切位點數目。4. 從1的每個樣品管中取少許置另外的管中,用第二種內切酶消化,電泳分析比較酶切結果。(1)兩種酶切割。(2)第一種酶單獨切割。(3)第二種酶單獨切割。5. 估算DNA片段的長度,重復此步驟,直到明確一致而且相互不矛盾的限制性內切酶位點被推導出來,DNA圖譜便告完成。......閱讀全文
DNA作圖實驗
實驗材料?DNA試劑、試劑盒?限制酶緩沖液儀器、耗材?電泳儀實驗步驟 ? 用低頻率切割的不同限制性內切酶分別完全消化DNA。2.? 從每個反應取小份樣品作電泳分析,用已知的分子量標準作對照。剩余的樣品置于冰浴。3.? 比較分子量標準估算出DNA片段的長度,推導出每種限制性內切酶的酶切位點數目。4.?
DNA作圖實驗
多種酶消化 限制酶部分消化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 應用遺傳學技術構建能顯示基因以及其他序列待征在基因組上位置的圖。
DNA作圖實驗——多種酶消化
主要用于顯示基因以及其他序列待征在基因組上位置的圖。實驗方法原理應用遺傳學技術構建能顯示基因以及其他序列待征在基因組上位置的圖。實驗材料DNA試劑、試劑盒限制酶緩沖液儀器、耗材電泳儀實驗步驟1. ?用低頻率切割的不同限制性內切酶分別完全消化DNA。?2. ?從每個反應取小份樣品作電泳分析,用已知的分
DNA作圖實驗——限制酶部分消化
實驗材料DNA試劑、試劑盒限制酶緩沖液儀器、耗材電泳儀實驗步驟1. ?用低頻率切割的不同限制性內切酶分別完全消化DNA。2. ?用32P末端標記消化產物,5’末端可先用小牛腸堿性磷酸酶處理。3. ?用T4多核苷酸激酶進行標記。4. ?3’末端可先用大腸捍菌DNA聚合酶ⅠKlenow片段或T4 DNA
DNA-酶-I-足跡法對-DNA-上的蛋白質結合位點作圖實驗
實驗材料 新鮮組織、培養的細胞、來自細胞或組織的蛋白成分試劑、試劑盒 細胞勻漿緩沖液細胞重懸緩沖液細胞淋洗緩沖液乙醇Ficoll 400甲酰胺染色液MgCl2 CaCl2 溶液NaClNonidetP-40酚:氯仿磷酸鹽緩沖液聚乙烯醇終止液組織勻漿液組織重懸緩沖液臺盼藍染料DNA 酶 I
DNA-酶-I-足跡法對-DNA-上的蛋白質結合位點作圖實驗
DNA 酶 I 足跡法對 DNA 上的蛋白質結合位點作圖實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 新鮮組織、培養的細胞、來自細胞或組織的蛋白成分
DNA-酶-I-足跡法對-DNA-上的蛋白質結合位點作圖實驗
本方案介紹在放射性標記的 DNA 片段上確定蛋白質結合位點的作圖方法。本方案使用 DNA 酶 I 切割 DNA, 而在替代方案中是用羥自由基斷裂 DNA。如果希望得到優化足跡法反應的建議,請參見本方案最后部分的疑難解析以及優化 DNA 酶 I 足跡法反應的欄目。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)
DNA-酶-I-超敏感位點作圖
DNA 酶 I 超敏感位點作圖法經常用于定位真核基因的調控區。由于還未被理解的原因,基因帶有對 DNA 酶 I 切割敏感的分開的序列,而且這些所謂超敏感位點圖譜是隨基因的激活狀態而變化的(Weintrauband Gmudine1976)。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J.
DNA-酶-I-超敏感位點作圖
實驗材料 真核細胞試劑、試劑盒 緩沖液 AEDTA乙醇裂解緩沖液磷酸鹽緩沖液臺盼藍染料DNA 酶 I 稀釋緩沖液DNA 酶 I 溶液蛋白酶 K 溶液RNA 酶溶液酚:氯仿SDS 緩沖液TE儀器、耗材 Sorvall H1000B 轉頭或等價物帶螺帽的試管振蕩水浴鍋實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液、緩
DNA-酶-I-超敏感位點作圖
? ? ? ? ? ? 實驗材料 真核細胞 試劑、試劑盒 緩沖液 A EDTA 乙醇 裂解緩沖液
減數分裂作圖實驗
實驗材料酵母菌株試劑、試劑盒消解酶 100T儀器、耗材毛細吸管頭強力膠水光學玻璃纖維YPD平板YPD培養管實驗步驟第 1 天顯微針的制備四分體解剖針可以通過手工拉制細玻璃絲或使用「技術和方案 23, 制備四分體解剖針」中描述的光學纖維玻璃絲來制備。將會演示針的準備過程并且提供給你一些必需品,以便你可
減數分裂作圖實驗
實驗材料?酵母菌株試劑、試劑盒?消解酶 100T儀器、耗材?毛細吸管頭強力膠水光學玻璃纖維YPD平板YPD培養管實驗步驟 第 1 天顯微針的制備四分體解剖針可以通過手工拉制細玻璃絲或使用「技術和方案 23, 制備四分體解剖針」中描述的光學纖維玻璃絲來制備。將會演示針的準備過程并且提供給你一些必需品,
mRNA的S1作圖實驗
M13模板 雙鏈模板 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 mRNA 試劑、試劑盒
mRNA的S1作圖實驗
實驗材料 mRNA試劑、試劑盒 瓊脂糖電泳緩沖液ATP寡聚核苷酸引物多核苷酸激酶緩沖液T4儀器、耗材 離心機分光光度計搖床實驗步驟一、圖片簡介?二、實驗步驟?1. ?用1×堿性制膠緩沖液制備1.2%的低融點瓊脂糖,并將凝固好的膠在1×堿性電泳緩沖液中浸泡過夜。?2. ?將以下試劑混合以制備磷酰化的寡
mRNA的S1作圖實驗——雙鏈模板
實驗材料mRNA試劑、試劑盒NaOHEDTA乙酸銨儀器、耗材離心機蒸發器實驗步驟1. ?對于18 μg DNA溶液,加入10×NaOH/EDTA溶液至1×的濃度,在室溫放置5 min。2. ?加入1.5倍體積的1.5 mol/l pH4.5乙酸銨緩沖液中和。3. ?加2.5倍體積乙醇-70℃沉淀15
什么是轉錄作圖?
中文名稱轉錄作圖英文名稱transcription mapping定 義標明轉錄物序列在基因組上的位置。應用學科遺傳學(一級學科),基因組學(二級學科)
什么是基因作圖?
基因作圖(英文gene mapping)是一種遺傳學作圖,用來定位染色體中特定的DNA片段。是基因組研究的成果之一,主要分為以重組率為定位依據的遺傳輿圖,以及以DNA片段實際位置為依據的物理輿圖,兩這各有不同用途與優缺點。
什么是RNA作圖?
中文名稱RNA作圖英文名稱RNA mapping定 義對RNA分子在基因上的定位分析。將RNA與相應的DNA雜交后,用單鏈特異性核酸酶(常用的如S1核酸酶)切去不發生雜交的單鏈部分,用以分析RNA與相應DNA的關系,包括確定RNA的5′和3′端、外顯子和內含子在DNA上的相應位置等。應用學科生物化
糖作圖的概念
中文名稱糖作圖英文名稱carbohydrate mapping定 義利用各種分析方法(如層析、電泳、質譜、核磁共振等)研究糖的組成時所得到結果的圖示化。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技術(二級學科)
粒度分析的作圖
粒度分析的結果,可按表6-3所示的格式整理,然后作出直方圖、頻率曲線圖、累積曲線圖和概率累積曲線圖(圖6-5,圖6-6)。圖的橫坐標表示顆粒大小,縱坐標表示百分數或累積百分數。直方圖是廣泛使用的一種粒度分布的圖解形式,以并排高低不同的矩形表示各粒級百分比。如果把每個矩形頂連點連接成一平滑曲線,即成頻
胰蛋白酶切磷酸化多肽作圖實驗
胰蛋白酶切蛋白質樣品的制備雙向薄層電泳與層析分離多肽片段反向高效液相層析繪制多肽圖譜實驗材料蛋白質 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒甲醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
胰蛋白酶切磷酸化多肽作圖實驗
胰蛋白酶切蛋白質樣品的制備 雙向薄層電泳與層析分離多肽片段 反向高效液相層析繪制多肽圖譜 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質
胰蛋白酶切磷酸化多肽作圖實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 甲醇電泳緩沖液儀器、耗材 凝膠電泳實驗步驟 1. 用單向或者雙向凝膠電泳將 32P 標記的目的蛋白質與其他不需要的成分分開。2. 電泳結束后,用 50% 甲醇清洗三次,時間控制在 6 小時,去處 SDS 和電泳緩沖液將凝膠放在兩張塞熱玢膜(Bio-Rad) 之間吸干。用
mRNA的S1作圖實驗——M13模板
S1作圖能用以確定RNA的5’端和內含子邊界。實驗材料mRNA試劑、試劑盒瓊脂糖電泳緩沖液ATP寡聚核苷酸引物多核苷酸激酶緩沖液T4儀器、耗材離心機分光光度計搖床實驗步驟一、圖片簡介?二、實驗步驟?1. ?用1×堿性制膠緩沖液制備1.2%的低融點瓊脂糖,并將凝固好的膠在1×堿性電泳緩沖液中浸泡過夜。
基因作圖的方法特點
基因作圖(英文gene mapping)是一種遺傳學作圖,用來定位染色體中特定的DNA片段。是基因組研究的成果之一,主要分為以重組率為定位依據的遺傳輿圖,以及以DNA片段實際位置為依據的物理輿圖,兩這各有不同用途與優缺點。
希爾作圖法的用途
中文名稱希爾作圖法英文名稱Hill plotting定 義對希爾方程的數據圖解表示法,可用于酶動力學、蛋白質與配體結合等分析。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技術(二級學科)
純化DNA實驗
實驗材料 細胞試劑、試劑盒 TBS抽提緩沖液儀器、耗材 離心管實驗步驟 1. 根據樣品類型,從下列方法中選一個作為步驟 1 進行操作。(1) 細胞樣品① 單層培養的細胞以用冰預冷的 TBS 將單層細胞洗滌 2 次,用刮棒把細胞刮入約 0.5 ml 的 TBS 中,將細胞懸液轉移到冰浴的離心管中,
純化DNA實驗
從哺乳動物細胞或組織分離DNA 基因組DNA的快速純化 純化質粒(堿裂解法) ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
DNA純化實驗
實驗方法原理 硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA,又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油、鹽離子等雜質因為沒有與DNA相似的特性,所以被分離開來。實驗材料?PCR產物試劑、試劑盒?PCR清潔試劑盒儀器、耗材?96孔DNA制備板96孔深孔板96孔V型底板實驗
純化DNA實驗
從哺乳動物細胞或組織分離DNA 基因組DNA的快速純化 純化質粒(堿裂解法) ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞