篩選質粒載體構建表達文庫實驗
試劑、試劑盒 封閉緩沖液氯仿裂解緩沖液檢測抗原-抗體復合物所用試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩沖液 125I 標記的蛋白質 A 或 125I 標記的免疫球蛋白放射性碘化第二抗體第一抗體LB 或 SOB 瓊脂平板儀器、耗材 空氣培養箱平頭鑷子 裝有防水黑墨水（印度墨水）并帶有 18 號針頭的注射器硝酸纖維素濾膜塑料盒和玻璃陪氏大平皿Whatman3 MM 濾紙 質粒表達文庫實驗步驟 材料緩沖液及溶液貯存液，緩沖液及試劑的組分請見附錄 1。將貯存液稀釋至合適濃度。封閉緩沖液：10 mmol/L Tris-Cl（pH8.0)150 mmol/LNaCl0.05%(V/V)Tween-2020%(V/V) 胎牛血淸其他備選封閉液如 5%(m/V) 脫脂奶粉或含 1%(m/V) 明膠和 3%(m/V) 牛血清白蛋白的 TNT緩沖液。各種試劑的優點，不同實驗室各執一辭。建議研究者進行預實驗以確定哪種與篩選用第一和第二抗體合用效果最好。封......閱讀全文
篩選質粒載體構建表達文庫實驗
試劑、試劑盒 封閉緩沖液氯仿裂解緩沖液檢測抗原-抗體復合物所用試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩沖液 125I 標記的蛋白質 A 或 125I 標記的免疫球蛋白放射性碘化第二抗體第一抗體LB 或 SOB 瓊脂平板儀器、耗材 空氣培養箱平頭鑷子 裝有防水黑墨水（印度墨水）并帶有 18 號針頭的注射器硝酸纖維
篩選質粒載體構建表達文庫實驗
檢測結合抗體的方法有以下 3 種：放射化學篩選，生色反應篩選及化學發光反應篩選。3 種方法的優缺點在本章導言中有所論述。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒封閉緩沖液氯仿裂解緩沖液檢測抗原-抗體復合物所用試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩
篩選質粒載體構建表達文庫實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 封閉緩沖液 氯仿 裂解緩沖液 檢測抗原-抗體復合物所用試劑 SM TNT 緩沖液 洗滌緩沖液
篩選構建于λ噬菌體載體的表達文庫實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 封閉緩沖液 氯仿 IPTG 抗原-抗體復合物檢測試劑 SM TNT 緩沖液 洗滌緩沖液 放射
篩選構建于λ噬菌體載體的表達文庫實驗
在典型的免疫篩選實驗中，λ噬菌體表達載體構建的文庫應鋪在不含異丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG) 的大腸桿菌菌株的平板上。誘導物的缺少保證了噬菌斑順利形成前不產生對宿主有毒性的融合蛋白，2~4 h 后，將平板從 42°C 移到 37°C 以穩定溫度敏感型的所有融合蛋白。本實驗來源于分子克隆實驗指
篩選構建于λ噬菌體載體的表達文庫實驗（一）
試劑、試劑盒 封閉緩沖液氯仿IPTG抗原-抗體復合物檢測試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩沖液放射性碘標記第二抗體第一抗體LB 瓊脂板LB 頂層瓊脂板硝酸纖維素濾膜λ噬菌體表達文庫E.coli儀器、耗材 預設 42°C 的空氣培養箱培養管平頭鑷子裝有防水黑墨水（印度墨水）并帶有 18 號針頭的注射器實驗步
篩選構建于λ噬菌體載體的表達文庫實驗（二）
方法λ噬菌體的平板培養1. 取適當大腸桿菌菌株的單克隆進行接種，按第 2 章方案 1 介紹的方法制備用于鋪平板的培養細菌。2. 假定每個 90 mm 平皿和 150 mm 平皿分別可長出 2X104 個和 5X104 個噬菌斑，計算篩選文庫所需平皿數。對應每個平皿準備一個無菌試管（13 mm
真核表達文庫的構建與篩選實驗
類似方案 1、方案 2 描述了在真核表達載體上進行 cDNA 文庫構建與篩選的方法, 流程分為以下兩個階段：1. 在真核表達載體上構建 cDNA 文庫；2. 在真核表達載體上構建的 cDNA 文庫的篩選。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊，作者：黃培堂。實驗材料宿主細胞質粒或λ噬菌體表達載體
真核表達文庫的構建與篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 宿主細胞 質粒或λ噬菌體表達載體 包裝提取物 電轉化感受態大腸桿菌 試劑、試劑盒
真核表達文庫的構建與篩選實驗
實驗材料 宿主細胞質粒或λ噬菌體表達載體包裝提取物電轉化感受態大腸桿菌試劑、試劑盒 限制性內切核酸酶緩沖液限制性內切核酸酶通過 poly(A)+富集的 mRNAcDNA 文庫含適當抗生素的 Terrific 球脂平板含適當抗生素的 Terrific 肉湯培養基儀器、耗材 cDNA 合成試劑盒實驗步驟
質粒載體的篩選特征介紹
選擇質粒載體的要素是要了解可用到的載體的特征和預測重組克隆所用于的實驗。 所有的質粒載體都有三個共同的特征：一個復制子、一個選擇性標志和一個克隆位點。復制子是含有DNA復制起始位點的一段DNA（ori），也包括表達由質粒編碼的復制必需的RNA和蛋白質的基因。選擇性標志對于質粒在細胞內持續存在時
Northwestern篩選蛋白表達文庫實驗
實驗方法原理 Northwestern 篩選蛋白表達文庫的方法是通過構建 IPTG 可誘導的融合蛋白表達文庫（融合蛋白的 N 端由載體序列編碼，C 端由克隆到載體的 cDNA 文庫編碼），進而誘導融合蛋白表達，并將蛋白質固定于硝酸纖維素濾膜上，以標記的 RNA 探針進行篩選，最終獲取能與靶
Northwestern篩選蛋白表達文庫實驗
Northwestern 篩選蛋白表達文庫的方法是通過構建 IPTG 可誘導的融合蛋白表達文庫（融合蛋白的 N 端由載體序列編碼，C 端由克隆到載體的 cDNA 文庫編碼），進而誘導融合蛋白表達，并將蛋白質固定于硝酸纖維素濾膜上，以標記的 RNA 探針進行篩選，最終獲取能與靶 RNA 分子特異性結合
Northwestern篩選蛋白表達文庫實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Northwestern 篩選蛋白表達文庫的方法是通過構建 IPTG 可誘導的融合蛋白表達文庫（融合蛋白的 N 端由載體序列編碼，C 端由克隆到載體的 cDNA 文庫編碼），進而誘導融合蛋白表達，并將蛋白質固定于硝酸纖維素濾
自殺性質粒載體的構建
自殺性質粒載體完全可以自己構建，只要保證兩點：１，自殺性質粒載體不能在你的宿主菌里進行復制，也就是說載體上不能有能在宿主菌中復制的復制子；２，要由篩選標記．?自殺性質粒載體不能在你的宿主菌里進行復制，否則會導致細菌染色體突變株的構建失敗。但是在構建時，要注意以下方面：1。在制備質粒載體和DNA插入片
質粒克隆載體的設計和構建的原則
①選擇合適的出發質粒出發質粒也叫親本質粒，它應含有質粒克隆載體必備的元件，如復制起始位點、選擇標記基因、克隆位點、啟動子和終止子等。②正確獲得構建質粒克隆載體的元件一般采用限制性核酸內切酶切割出質粒DNA分子，獲得含有某種元件的DNA片段，還可以采用PCR技術從靶DNA中擴增出含某種元件的特異性DN
質粒克隆載體的設計和構建過程遵循的原則
①選擇合適的出發質粒 出發質粒也叫親本質粒,它應含有質粒克隆載體必備的元件,如復制起始位點、選擇標記基因、克隆位點、啟動子和終止子等。 ②正確獲得構建質粒克隆載體的元件 一般采用限制性核酸內切酶切割出質粒DNA分子,獲得含有某種元件的DNA片段,還可以采用PCR技術從靶DNA中擴增出含某種
含有目的基因真核表達－pEGFPC1載體的構建實驗_質粒提取
試劑、試劑盒質粒提取試劑盒限制性核酸內切酶儀器、耗材離心機振蕩培養箱電泳裝置冰盒恒溫水浴箱實驗步驟1. ?挑取含有目的DNA重組體的單個菌落接種在3 ml LB（含有Amp或Kan）液體培養基中，37 ℃，225 rpm培養12～16 hrs。?2. ?提取質粒?⑴離心菌液，廢棄上清。?⑵加入250
質粒與載體
一、質粒絕大多數的生物都是以DNA 的形式來儲藏其遺傳信息。遺傳物質要能生生不息地傳給后代的首要條件就是它至少要具有一個復制原(ori, origin of replication，或譯為復制起點)，使整個基因體得以復制。含有復制原的遺傳物質稱為replicon，我們姑且把它譯為為復制體吧！原核性復
液相法篩選cDNA表達文庫中RNA結合蛋白實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將 cDNA 文庫表達的蛋白固定于硝酸纖維素膜或尼龍膜上，然后用標記的 RNA 對其進行篩選的方法是篩選 RNA 結合蛋白研究中最常用的技術。 實驗材料
液相法篩選cDNA表達文庫中RNA結合蛋白實驗
將 cDNA 文庫表達的蛋白固定于硝酸纖維素膜或尼龍膜上，然后用標記的 RNA 對其進行篩選的方法是篩選 RNA 結合蛋白研究中最常用的技術。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理將 cDNA 文庫表達的蛋白固定于硝酸纖維素膜或尼龍膜上，然后用標記的 RNA 對其進行篩選的方法
液相法篩選cDNA表達文庫中RNA結合蛋白實驗
實驗方法原理 將 cDNA 文庫表達的蛋白固定于硝酸纖維素膜或尼龍膜上，然后用標記的 RNA 對其進行篩選的方法是篩選 RNA 結合蛋白研究中最常用的技術。實驗材料 TY試劑、試劑盒 儲存液溶菌酶干粉細菌裂解緩沖液甘油水溶液實驗步驟 一、材料與設備1. 2X TY：16 g 蛋白胨，10 g 酵母提
pUC質粒載體結構
（1）來自于pBR322的Ori（2）氨芐青霉素的抗性基因(ampr)。 但核苷酸序列發生了變化（3） LacZ′基因編碼β—半乳糖酶的α—肽鏈即氨基末端。（4）MCS區段是一段用于插入外源DNA片段的特定區域，由一系列的緊密相連的限制性內切酶位點組成，而且每個限制性內切酶位點在整個載體中是唯一的。
質粒載體的分類
按復制形式分為嚴緊型和松弛型復制。根據質粒DNA復制與宿主之間的關系或在宿主細胞的拷貝數的多少，可以將質粒分為兩種不同的復制類型：嚴緊型和松弛型。嚴緊型質粒復制受宿主染色體DNA復制的嚴格控制，拷貝數較小一般只有1~3個拷貝。疏松型質粒的復制宿主的控制比較松，在宿主中的拷貝數比較多，一般有10~20
什么是質粒載體？
質粒載體是在天然質粒的基礎上為適應實驗室操作而進行人工構建的質粒。與天然質粒相比，質粒載體通常帶有一個或一個以上的選擇性標記基因（如抗生素抗性基因）和一個人工合成的含有多個限制性內切酶識別位點的多克隆位點序列，并去掉了大部分非必需序列，使分子量盡可能減少，以便于基因工程操作。
質粒載體是什么？
質粒載體是基因工程重要的載體之一。它是以質粒 DNA 分子為基礎構建而成，主要用 于原核生物和植物的基因轉移以及建立基因組文庫和cDNA 文庫。現在分子生物學使用的質粒載體都已不是原來細菌或細胞中天然存在的質粒，而是經過了許多的人工改造，從不同的實驗目的出發，人們設計了各種不同類型的質粒載體。近年來
質粒載體的載體大小的介紹
大的質粒（大于15kb）不會很好轉化而且DNA產量通常很低。在設計實驗時要考慮到加入插入片段的最終載體大小，盡量用更小的載體。 兼容性 當多于一個質粒載體必須同時存在于同一個細菌細胞中，這兩個質粒的復制子必須是兼容的。當他們不能穩定地共存時，則認為這兩個質粒是不兼容的。 選擇/檢測插入片段
RNA干擾載體的構建的實驗流程
RNA干擾載體主要用來研究基因表達調控，RNA干擾技術已已被廣泛用于基因結構功能研究和傳染性疾病及基因治療領域，進行RNA干擾實驗首先是構建RNA干擾載體，本文以pRI系列載體為例論述了干擾載體的構建的實驗流程。產品技術背景pRI系列載體是基于III類rna聚合酶啟動子：人類H1啟動子的專用于哺乳動
載體構建實驗常見問題大解析
大家是否在實驗中經常遇到載體構建的各種問題，浪費大量的時間和精力，各種各樣的問題讓人頭疼，海創科業小編作為科研老司機特意為各位科研君整理了載體構建實驗常見問題及解決方法，希望能夠幫助到大家。1. ? ? ? PCR載體構建大部分時候都要通過PCR的方法獲取目的片段，擴增PCR的時候大家盡量選用高保真
在質粒載體中進行定向克隆實驗
在質粒載體中進行定向克隆實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 大多數常用質粒都含有可被不同內切酶識別的多克隆位點。由于可供選擇的克隆位點很多 [ 如 Invitrogen 公司