淋巴細胞轉化試驗方法
T細胞在體外培養時,受到非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA)或特異性抗原刺激后,可出現代謝旺盛、蛋白質和核酸合成增加、細胞體積增大并能進行分裂的淋巴母細胞,此稱為淋巴細胞轉化現象。淋巴細胞轉化率的高低,可以反映機體的細胞免疫水平,因此,可作為測定機體免疫功能的指標之一。本實驗采用形態學方法進行淋巴細胞轉化試驗。T淋巴細胞在體外培養過程中受有絲分裂原如植物血凝素刺激后,轉化為體積較大的母細胞,胞漿增多而深染,核增大并可見核仁裂,計數轉化細胞的百分率可反映機體的細胞免疫功能。【材料】1.RPMLl640培養液(用前調至含小牛血清10%、青霉素100u/m1、鏈霉素μg/m1,用NaHCO3調pH至7.2-7.4)。2.PHA(用RPMIl 640基礎培養液配成1000μg/m1)。3.吉姆薩染液。4.離心機、恒溫箱、計數器及顯微鏡等。【方法】取無菌肝素抗凝血0.1m1,加入1.8m1細胞培養液中,同時加入PHA0.1m1,對照管......閱讀全文
淋巴細胞轉化試驗
實驗方法原理 T、B細胞在抗原或有絲分裂原的刺激下可轉化為淋巴母細胞,借此可了解淋巴細胞對異物刺激的反應性。儀器、耗材 試管吸管細胞培養物PHA瑞氏染液載玻片實驗步驟 1. 取肝素抗凝血1~2毫升,用淋巴細胞分離液分離淋巴細胞;2. 調整細胞濃度為2×106/毫升;3. 加PHA,使終濃度為1%;4
淋巴細胞轉化試驗
實驗方法原理T、B細胞在抗原或有絲分裂原的刺激下可轉化為淋巴母細胞,借此可了解淋巴細胞對異物刺激的反應性。儀器、耗材試管吸管細胞培養物PHA瑞氏染液載玻片實驗步驟1. 取肝素抗凝血1~2毫升,用淋巴細胞分離液分離淋巴細胞;2. 調整細胞濃度為2×106/毫升;3. 加PHA,使終濃度為1%;4. 5
淋巴細胞轉化試驗(MTT)
(一)原理:四甲基偶氯唑鹽(MTT)可作為線粒體中琥珀酸脫氫酶的底物。當有活細胞存在時,線粒體內琥珀酸脫氫酶可將淡黃色的MTT還原成紫蘭色的甲臢,將結晶的甲臢溶解釋放后,可根據所測的OD值反映活細胞的數量和活性,從而推知待測樣品的水平。 (二)材料: MTT、電子天平、PBS液、二甲基亞砜、
T-淋巴細胞轉化試驗
一、 基本原理T 細胞在體外培養時,受到非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出現細胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細胞轉化。淋巴細胞轉化率的高低可以反映機體的細胞免疫水平,因此可作為測定機體免疫功能的指標之一。淋巴細胞轉化試驗有形態計數法、MTT 法和同位素法三種。
T-淋巴細胞轉化試驗
實驗概要本文介紹了T 淋巴細胞轉化試驗(T Lymphocyte Transformation Test)的基本原理和操作步驟。實驗原理T 細胞在體外培養時,受到非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出現細胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細胞轉化。淋巴細胞轉化率的高低
什么是淋巴細胞轉化試驗
淋巴細胞轉化試驗是檢測細胞免疫功能的經典試驗。基本原理是采用T淋巴細胞敏感 的刺激物在體外刺激T淋巴細胞,T淋巴細胞受到刺激后可發生形態學和生物化學的變化,部分小淋巴細胞轉化為不成熟的母細 胞,并進行有絲分裂。用形態學法或放射性 核素法檢測T細胞的增殖程度,并以此評定相應的細胞功能。
淋巴細胞轉化試驗的目的
淋巴細胞轉化試驗是檢測細胞免疫功能的經典試驗。基本原理是采用T淋巴細胞敏感 的刺激物在體外刺激T淋巴細胞,T淋巴細胞受到刺激后可發生形態學和生物化學的變化,部分小淋巴細胞轉化為不成熟的母細 胞,并進行有絲分裂。用形態學法或放射性?核素法檢測T細胞的增殖程度,并以此評定相應的細胞功能。
淋巴細胞轉化試驗方法
T細胞在體外培養時,受到非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA)或特異性抗原刺激后,可出現代謝旺盛、蛋白質和核酸合成增加、細胞體積增大并能進行分裂的淋巴母細胞,此稱為淋巴細胞轉化現象。淋巴細胞轉化率的高低,可以反映機體的細胞免疫水平,因此,可作為測定機體免疫功能的指標之一。本實驗采用形態學方法進行淋
淋巴細胞轉化試驗是什么
人類淋巴細胞在體外與特異性抗原(如結核菌素)或非特異性有絲分裂原(如植物血凝素,PHA)等一起孵育,T細胞即被激活而向淋巴母細胞轉化。T細胞轉化過程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質的合成增加,最后導致細胞分裂。 在光學顯微鏡下可計數轉化后的淋巴母細胞數,也可用氚標記的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)
T淋巴細胞轉化試驗介紹
T淋巴細胞轉化試驗:體外培養時,T淋巴細胞在有絲分裂原如植物血凝素(PHA)或刀豆素A(CONA)的刺激下,代謝活躍,增加蛋白質、RNA和DNA的合成,從而轉化為母細胞,部分細胞發生有絲分裂。從而反應T淋巴細胞的免疫功能。T淋巴細胞轉化試驗(T lymphocyte transformation
淋巴細胞轉化試驗知識點
淋巴細胞轉化試驗影響因素:1.本試驗需進行細胞培養,因此靜脈采血時要特別注意無菌操作,需用無菌肝素抗凝管放置血標本。2.采血后應立即分離淋巴細胞進行試驗。只宜暫時在室溫放置,而不可4℃存放。參考范圍:轉化細胞形態學計數方法:0.50~0.70(50%~70%)臨床意義:1.T淋巴細胞受特異性抗原或非
淋巴細胞轉化試驗的實驗解釋
形態學方法:轉化率=(60.1±7.6)%T淋巴細胞在體外經植物血凝素激活后,可轉化為淋巴母細胞,根據淋巴細胞的轉化情況,可反應機體的細胞免疫水平。淋巴細胞轉化率降低表示細胞免疫水平低下,可見于運動失調性毛細血管擴張癥、惡性腫瘤、何杰金病、淋巴瘤、淋巴肉芽腫、重癥真菌感染、重癥結核、瘤型麻風等。此外
T淋巴細胞轉化試驗的概述
T淋巴細胞轉化試驗:體外培養時,T淋巴細胞在有絲分裂原如植物血凝素(PHA)或刀豆素A(CONA)的刺激下,代謝活躍,增加蛋白質、RNA和DNA的合成,從而轉化為母細胞,部分細胞發生有絲分裂。從而反應T淋巴細胞的免疫功能。T淋巴細胞轉化試驗(T lymphocyte transformation
什么是PHA淋巴細胞轉化試驗
PHA淋巴細胞轉化試驗 是 T淋巴細胞與有絲分裂原在體外共同培養時,受到后者的刺激可發生形態學和生物化學的變化,部分小淋巴細胞轉化為不成熟的母細胞,并進行有絲分裂的試驗方法。
T淋巴細胞轉化試驗的詳細介紹
樣本要求 肝素抗凝血5ml,室溫 參考值 形態學檢測法:60.1%±7.6%。 3H-TdR滲入法:0~2%。 刺激指數(SI)>2為有意義。 臨床意義 1、T淋巴細胞在體外培養過程中受有絲分裂原刺激,可轉化成為體積較大的母細胞。計數轉化的細胞可反映機體的細胞免功能。 2、細胞免疫功
淋巴細胞轉化試驗的參考值
轉化細胞形態學計數方法:0.50~0.70(50%~70%)
T淋巴細胞轉化試驗參考值
形態學檢測法:60.1%±7.6%。 3H-TdR滲入法:0~2%。 刺激指數(SI)>2為有意義。
PHA淋巴細胞轉化試驗的正常值
計數淋巴細胞200個,識別淋巴母細胞(超過正常淋巴細胞2-4倍,核膜清晰,核染質疏松而成細網狀,核仁明顯,胞漿豐富,呈嗜堿性)、過渡型淋巴細胞(體積變化不大,僅為上述明顯核變化)、小淋巴細胞(體積稍大于紅細胞,核染質致密,無核仁),統計其轉化率。皮膚科轉化率正常值大于58%。
PHA淋巴細胞轉化試驗的注意事項
1.培養基成分對轉化率影響較大,注意其有效期。 2.小牛血清用前需滅活。 3.培養時要保證有足夠的氣體,一般10ml培養瓶內液體總量不要超過2ml。 4.PHA劑量過大對細胞有毒性,太小不足以刺激淋巴細胞轉化,試驗前應先測定PHA轉化反應劑量。 5.實驗中要嚴格無菌操作,防止污染。 不
T淋巴細胞轉化試驗的參考值
形態學檢測法:60.1%±7.6%。 3H-TdR滲入法:0~2%。 刺激指數(SI)>2為有意義。
PHA淋巴細胞轉化試驗的檢查過程
操作方法: 1.取無菌肝素抗凝血0.lml,加入1.8ml細胞培養液中,同時加入1 000μg/m1 PHA 0.1m1,對照管不加PHA,將細胞置37℃、5%CO2培養3d,每天搖動1次。 2.培養結束時吸棄大部分上清液,加入8.5g/L NH4Cl 4ml混勻,置37℃水浴10min。
T淋巴細胞轉化試驗的注意事項
檢測方法可分為3H-TdR摻入法、形態學法和MTT法等。 1、3H-TdR摻入法 T淋巴細胞受PHA或特異性抗原刺激后,發生有絲分裂,細胞進入S期,且伴隨新的DNA合成,若此時加入氚標記的胸腺嘧啶核苷3H-TdR,則3H-TdR可被淋巴細胞作為合成DNA的原料攝入,根據3H-TdR的攝入量,可
淋巴細胞轉化試驗的基本原理
淋巴細胞轉化試驗是檢測細胞免疫功能的經典試驗。基本原理是采用T淋巴細胞敏感 的刺激物在體外刺激T淋巴細胞,T淋巴細胞受到刺激后可發生形態學和生物化學的變化,部分小淋巴細胞轉化為不成熟的母細 胞,并進行有絲分裂。用形態學法或放射性 核素法檢測T細胞的增殖程度,并以此評定相應的細胞功能。
淋巴細胞轉化試驗的形態學方法
形態學方法:轉化率=(60.1±7.6)%T淋巴細胞在體外經植物血凝素激活后,可轉化為淋巴母細胞,根據淋巴細胞的轉化情況,可反應機體的細胞免疫水平。淋巴細胞轉化率降低表示細胞免疫水平低下,可見于運動失調性毛細血管擴張癥、惡性腫瘤、何杰金病、淋巴瘤、淋巴肉芽腫、重癥真菌感染、重癥結核、瘤型麻風等。此外
淋巴細胞轉化試驗(MTT)原理=材料和方法
(一)原理:四甲基偶氯唑鹽(MTT)可作為線粒體中琥珀酸脫氫酶的底物。當有活細胞存在時,線粒體內琥珀酸脫氫酶可將淡黃色的MTT還原成紫蘭色的甲臢,將結晶的甲臢溶解釋放后,可根據所測的OD值反映活細胞的數量和活性,從而推知待測樣品的水平。(二)材料:MTT、電子天平、PBS液、二甲基亞砜、無菌針頭過濾
PHA淋巴細胞轉化試驗的臨床意義
PHA淋巴細胞轉化率下降,是細胞免疫功能降低的反應。此項檢查,皮膚科多用于疾病分型(如麻風)、病情判斷(如皮膚惡性腫瘤)、藥物療效觀察,以及某些免疫缺陷性和變態反應性皮膚病的研究。 異常結果: 免疫功能降低引發的各種癥狀 需要檢查的人群: 疑似麻風、皮膚惡性腫瘤癥狀的病人
影響淋巴細胞轉化試驗細胞轉化率的因素有哪些
⑴、受體細胞轉化的受體細胞一般是限制-修飾系統缺陷的突變株,即不含限制性內切酶和甲基化酶的突變株,它可容忍外源DNA分子進入體內并穩定地遺傳給后代。另外還應根據載體的性質及實驗的目的選擇合適的宿主。此外,受體細胞生長狀態和密度也很重要。不要使用經過多次轉接或儲存于4℃的培養菌。細胞生長密度以剛進
淋巴細胞轉化實驗
實驗材料 肝素試劑、試劑盒 199培養液小牛血清鏈霉素青霉素PHA儀器、耗材 注射器針頭試管吸管離心機實驗步驟1. ?采肝素抗凝血1~2毫升(1毫升血中加肝素20單位)充分混勻。37℃靜置1~2小時。紅細胞沉淀后,吸取血漿層并捎帶些紅細胞。移入另一無菌試管中。計算白細胞數然后2000 rpm 離心1
淋巴細胞轉化實驗
淋巴細胞轉化實驗在臨床上應用可用于(1)反映出受試者T細胞總體水平的應答功能,判斷細胞免疫狀態和探討發病機制(2)選擇適宜的移植供體(3)尋找遲發型變態反應的原因(4)估計疾病的療效和預后。實驗方法原理正常機體的T淋巴細胞在體外培養過程中受到特異性抗原或有絲分裂原刺激。可轉化為淋巴母細胞。細胞免疫缺
淋巴細胞轉化試驗有哪些不同的檢測方法
工具/原料 RPMI1640 培養液 Hank's 液 刀豆蛋白A(Concanvalin A, ConA),用RPMI1640 液配成1mg/ml,分裝小瓶,冷凍保存 MTT 1mg/ml 2.5%碘酒、75%酒精 方法/步驟 小鼠脾細胞懸液的制備: 取一個滅菌的平皿,