PCR基本實驗方法（二）
Recommended Reaction Conditions:Initial Conditions:Initial denaturation at start: 92 - 97oC for 3 - 5 min. If you denature at 97oC, denature sample only; add rest of mix after reaction colls to annealing temperature (prevents premature denaturation of enzyme).Initial annealing temperature: as high as feasible for 3 min (eg: 50 - 75oC). Stringent initial conditions mean less non-specific product, especi......閱讀全文
PCR實驗中的污染預防及處理（二）
?????? （二）環境污染：在排除試劑污染的可能性外，更換試劑后，若不久又發現試劑被污染了，如果預防措施比較嚴密，則考慮可能為環境污染。?????? 環境污染中常見的污染源主要有：?????? 1. 模板提取時真空抽干裝置；?????? 2. 凝膠電泳加樣器；?????? 3. 電泳裝置；????
大規模－PCR－制作－cDNA－微陣列實驗（二）
第 3 階段：克隆的擴增與 PCR 產物的評估一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑DEPC 處理過的 H20TAE 緩沖液，1×（40 mmol/L Tris-乙酸鹽，1 mmol/L EDTA，pH 約 8.5)DNA 點樣緩沖液（200 g/LFicoll400，0.1mol/LNa2EDTA，pH
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至40~60℃左右，引物與模板
RTPCR實驗方法大全
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。?要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。?3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2 濃度、退
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至40~60℃左右，引物與模板
Taq酶PCR實驗方法介紹
General AdvicePCR allows the production of more than 10 million copies of a target DNA sequence from only a few molecules. The sensitivity of this tec
384well－PCR實驗方法
Beforehand.choose empirically the annealing temperature of primers;make sure you have enough PCR-plates, Q-covers and sealing tape;prepare the stocks:
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至40~60℃左右，引物與模板
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至40~60℃左右，引物與模板
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至40~60℃左右，引物與模板
microRNA－RTPCR實驗方法
Stem-loop實時定量RT PCR傳統實時定量RT PCR只能檢測到miRNA前體，而Stem-loop實時定量RT PCR技術可以解決這一問題。Stem loop實時定量RT PCR是一項高特異度、敏感度的檢測miRNA表達的實驗技術，包括設計具有莖環（stem loop）結構的反
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至40~60℃左右，引物與模板
RTPCR實驗方法總結
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。?3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2+濃度、退火
實驗分析方法PCR擴增產物
孔板夾心雜交法： 該法是通過一固定于微孔板的捕獲探針與PCR產物的某一區域特 異雜交使產物的間接地固定于微孔板上，然后，再用一生物素 等非放射性標記物標記的檢測探針與產物的另一特異性較一次 雜交，漂洗后顯色即可判斷結果。該法需要兩個雜交過程來檢測 一個產物，因此，其特異性較一次雜交的檢測法高。該法
PCR實驗室最容易忽視的環節（二）
3.濾芯吸頭測試吸頭需使用經校準的移液器（1）準確性：將n個吸頭分別吸取定量的純水稱重，重量與體積的關系按照1 g/mL換算。（2）氣密性：取n個吸頭，吸取最大量程的含有1％甘油的墨水，觀察有色液體不出現在濾塞之上，液面相同為合格。（3）防氣溶膠性能：取n個吸頭，吸取陽性核酸，反復吹吸10次，換另一
實時熒光定量PCR（RealTimePCR）實驗流程（二）
五、cDNA與引物質量檢測 取0.2ml薄壁PCR管，編號。向各管中加入含染料2×PCRTaqMix10ul;加入正反向引物各0.5ul(引物濃度10uM)，向管中加入混合的cDNA各1ul。各管補加水至20ul。 組份加量 2×PCRTaqMix10ul 10uMPrime
二手定量PCR儀基本技術資料詳情
?? 二手定量PCR儀，由熒光定量系統和計算機組成，用來監測循環過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數據。數據通過開發的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數據被繪制成熒光強度相對于循環數的圖表。原始數據收集后可以開始分析。二手定量PCR儀的軟件能使收集到的數據進行正常化處理來彌補背景熒光的差
二手定量PCR儀基本技術資料詳情
二手定量PCR儀，由熒光定量系統和計算機組成，用來監測循環過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數據。數據通過開發的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數據被繪制成熒光強度相對于循環數的圖表。原始數據收集后可以開始分析。二手定量PCR儀的軟件能使收集到的數據進行正常化處理來彌補背景熒光的差異。正常
二手定量PCR儀基本技術資料詳情
二手定量PCR儀，由熒光定量系統和計算機組成，用來監測循環過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數據。數據通過開發的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數據被繪制成熒光強度相對于循環數的圖表。原始數據收集后可以開始分析。二手定量PCR儀的軟件能使收集到的數據進行正常化處理來彌補背景熒光的差異。
PCR（聚合酶鏈式反應）的反應方法介紹基本的PCR方法
由于各種PCR反應條件(如PCR擴增次數、溫度、Taq?DNA聚合酶的濃度、引物、氯化鎂以及模板DNA)變異極大,應根據具體情況,對各種PCR反應條件進行相應調整。按以下次序,將各成分加入0.2?ml滅菌擴增管中:成分?????????????????????體積?????????????????終
RTPCR實驗方法總結大全
生物谷：?RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2+濃
RTPCR實驗方法總結(1)
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。?要求：?1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。?3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2+濃度、
應用PCR遺傳工程實驗方法
應用PCR遺傳工程實驗方法1. 設計與合成預期的末端修改的寡核苷酸引物。例如，根據 cDNA 模板設計的 5'引物為 5' dATCATATGGCTCTG GATGAACT- GTGCCTGCTGGACATGCT3'，3' 引物為 5' dATAAGCTTTT
RTPCR實驗方法總結(2)
寡聚(dT)纖維素柱純化mRNA一、試劑準備1．3M醋酸鈉（pH 5.2）2．0.1M NaOH3．1×上樣緩沖液：20mM Tris-HCl(pH 7.6)；0.5M NaCl；1M EDTA（pH 8.0）；0.1%SLS(十二烷基氨酸鈉。配制時可先配制Tris-HCl(pH 7.6)、NaCl
定量PCR原理、材料與實驗方法
一．原理應用定量PCR技術，用一種標準作對照能夠估計出一種特異性靶DNA或RNA分子的相對含量。參照物：在定量 PCR 中必須加入參照物，用來作為擴增系統的陽性對照，并作為未知樣本定量的標準，且通過競爭性作用校正擴增系統內管間的擴增效率，使其具有可比性。參照物按其性質不同可分為內參照和外參照。內參照
解決PCR實驗室污染的方法
（1）開窗通風：如在短時間內要消除實驗室污染，開窗通風促進實驗室內空氣流通，使停留在室內的核酸排放到室外。? ? （2）紫外燈照射：將實驗室內好生物安全柜內物品平鋪，打開離心機內蓋，然后將紫外等打開照射12-24小時，通風12小時以上。? ? （3）消毒液降解核酸：及時用1%-2%的次氯酸鈉擦拭操作
microRNA－RTPCR實驗方法介紹
Stem-loop實時定量RT PCR 傳統實時定量RT PCR只能檢測到miRNA前體，而Stem-loop實時定量RT PCR技術可以解決這一問題。Stem loop實時定量RT PCR是一項高特異度、敏感度的檢測miRNA表達的實驗技術，包括設計具有莖環（stem loop）結構的
RTPCR實驗方法總結大全
生物谷： RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。?要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。?3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2
建立PCR實驗室的基本條件
臨床基因擴增實驗室采用PCR技術用于臨床基因診斷，由于PCR技術對所檢測的核酸模板進行大量擴增，容易出現實驗室污染導致臨床檢測標本假陽性結果；另外由于PCR技術要求高、影響因素多（特別是RNA標本），實驗過程處理不當易導致核酸模板無擴增現象，導致臨床標本假陰性結果。因此臨床基因擴增檢驗實驗室技術驗收
PCR實驗室建設的基本設備與要求
第一章 總 則 第一條 為規范臨床基因擴增檢驗實驗室管理，保證臨床基因擴增檢驗質量，使臨床診斷和治療更為科學、合理，特制定本辦法。第二條 臨床基因擴增檢驗技術指以臨床診斷治療為目的，以擴增檢測DNA或RNA為方法的檢測技術，如聚合酶鏈反應（PCR）、連接酶鏈反應（LCR）、轉錄依賴的放大系統（TAS