基因表達的系列分析實驗
SAGE(Velculescuetal.1995) 是基于 PCR 技術的一種高靈敏度研究基因表達的方法，可得到 mRNA 文庫的定性及定量信息。自 1995 年此技術產生以來，發表了大量的相關文章，表明 SAGE 可同時檢測大量基因的表達水平的變化。實驗材料玻璃及塑料器皿試劑、試劑盒溶液與緩沖液引物儀器、耗材試劑盒MPC-EPCR儀Gene PulserII 型系統實驗步驟一、一般原則若用于 SAGE 的 RNA 有足夠的量，最好用 2.5~5 ug polyA+RNA, 可按實驗方案 A 進行。這里我們還提供了實驗方案 B，它在多個步驟上已做了修改，適用于僅有微量的原材料（例如，利用這個流程我們能從來自于 300fxm 腦切片的海馬樣品中獲得基因表達譜)。后一實驗方案尤適用研究神經組織表達，由于其復雜的神經環路及高度特化的結構，獲得大量均質組織以分離 RNA 往往是不可能的。下面對兩組實驗方案第 1 步到第 8 步進行了詳細......閱讀全文
基因表達的系列分析實驗
SAGE(Velculescuetal.1995) 是基于 PCR 技術的一種高靈敏度研究基因表達的方法，可得到 mRNA 文庫的定性及定量信息。自 1995 年此技術產生以來，發表了大量的相關文章，表明 SAGE 可同時檢測大量基因的表達水平的變化。實驗材料玻璃及塑料器皿試劑、試劑盒溶液與緩沖液引
基因表達的系列分析實驗
實驗材料?玻璃及塑料器皿試劑、試劑盒?溶液與緩沖液引物儀器、耗材?試劑盒MPC-EPCR儀Gene PulserII 型系統實驗步驟 一、一般原則若用于 SAGE 的 RNA 有足夠的量，最好用 2.5~5 ug polyA+RNA, 可按實驗方案 A 進行。這里我們還提供了實驗方案 B，它在多
基因表達的系列分析實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 玻璃及塑料器皿 試劑、試劑盒 溶液與緩沖液 引物
基因表達系列分析實驗（SAGE）
實驗材料感興趣的細胞或組織試劑、試劑盒糖原EDTA緩沖液SDSBSATween 20連接子T4 DNA 連接酶BsmFIPC8SeeDNA乙酸鈉乙醇DMSOPCR引物乙酸銨DNA ladder聚丙烯酰胺 TBE凝膠DNA參照pZErO-1 質粒TE緩沖SOC培養液Tris · Cl儀器、耗材微量離心
基因表達系列分析實驗（SAGE）（三）
58. 用 1：10 000 的 SYBR Green I 染 15 min。在 UV 盒上觀察，分出感興趣的區帶。59. 把每一塊凝膠放入底部有約 0.5 mm 小洞的 0.5 ml 微量離心管中（用 21-G 針頭刺的）。60. 把 0.5 離心管連同凝膠塊放入 2.0 ml 的硅烷化的離心管里
基因表達系列分析實驗（SAGE）（二）
31. 乙醇沉淀：11.5 ml 樣品10 ul SeeDNA100 ul 糖原5.1 ml 7.5 mol/L 乙酸銨38.3 ml 100％ 乙醇干冰/甲醇浴 15 min。然后室溫溶化 2 min。32. 輕輕渦旋混勻，臺式離心機的吊桶轉子室溫約 3000 g （4000 r/min） 離心
基因表達系列分析實驗（SAGE）（一）
實驗方法原理 實驗材料 感興趣的細胞或組織試劑、試劑盒 糖原EDTA緩沖液SDSBSATween 20連接子T4 DNA 連接酶BsmFIPC8SeeDNA乙酸鈉乙醇DMSOPCR引物乙酸銨DNA ladder 聚丙烯酰胺 TBE凝膠DNA參照pZErO-1 質粒TE緩沖SOC培養液Tris · C
基因表達系列分析實驗（SAGE）（四）
83. 用作測序的 2 ul PCR 產物（所需的確切用量取決于測序的方案，并應當優化）用下述方法處理：0.1 ul 外切核酸酶 I0.1 ul 蝦堿性磷酸酶1.8 ul 50 mmol/L Tris·Cl，pH 8. 0加 2 ul 消化混合液到 2 ul DNA 中。84. 在熱循環儀上進行反應
基因表達的系列分析
中文名稱基因表達的系列分析英文名稱serial analysis of gene expression;SAGE定 義通過構建較短的表達序列標簽規模化地檢測基因表達種類及其豐度的實驗技術。應用學科遺傳學（一級學科），基因組學（二級學科）
基因表達系列分析簡介
1995年Velculescu等提出了基因表達系列分析(Serial Analysis of Gene Expression,SAGE)技術，能同時對上千個轉錄本進行研究。 SAGE是一種快速分析基因表達信息的技術,它通過快速和詳細分析成千上萬個表達序列標簽（Expressed Sequenc
關于基因表達系列分析的實驗路線的介紹
（1） 以biotinylated oligo(dT）為引物反轉錄合成cDNA，以一種限制性內切酶（錨定酶 Anchoring Enzyme， AE）酶切。錨定酶要求至少在每一種轉錄物上有一個酶切位點，一般4堿基限制性內切酶能達到這種要求，因為大多數mRNA要長于256堿基（44）。通過鏈霉抗生
什么是基因表達的系列分析？
中文名稱基因表達的系列分析英文名稱serial analysis of gene expression;SAGE定 義通過構建較短的表達序列標簽規模化地檢測基因表達種類及其豐度的實驗技術。應用學科遺傳學（一級學科），基因組學（二級學科）
基因表達系列分析的原理簡介
第一、一個9～10堿基的短核苷酸序列標簽包含有足夠的信息，能夠唯一確認一種轉錄物。例如，一個9堿基順序能夠分辨262144個不同的轉錄物（49），而人類基因組估計僅能編碼80000種轉錄物，所以理論上每一個9堿基標簽能夠代表一種轉錄物的特征序列。 第二、如果能將9堿基的標簽集中于一個克隆中進行
基因表達系列分析的優點和應用的介紹
SAGE是一項快捷、有效的基因表達研究技術，任何具備PCR和手動測序器具的實驗室都能使用這項技術，結合自動測序技術能夠在3個小時內完成1000個轉錄物的分析。另外使用不同的錨定酶（識別5～20堿基的Ⅱ類核酸內切酶），使這項技術更具靈活性。 首先SAGE可應用于人類基因組研究。1995年 Vel
用－cDNA－芯片分析人類基因表達實驗
實驗材料 母板試劑、試劑盒 細菌細胞中的標記LB 培養基氨芐青霉素乙醇Super 肉湯培養基 甘油96孔堿裂液T low E 緩沖液10 X PCR 緩沖液 20 X SSC琥拍酸酐儀器、耗材 96深孔板和V 形塑料細胞培養皿水平微量培養板離心96孔多位點復制針1 加侖儲存袋多微孔的帶層帶孔的振蕩器
TLP基因的表達模式分析
實驗概要本實驗對水稻、擬南芥及楊樹的TLP基因表達模式進行了分析，為進一步研明植物中TLP基因的功能奠定基礎。實驗步驟1. 水稻TLP基因的RT-PCR分析?? 1) 植物材料選取水稻的根、莖、葉、花和種子的新鮮組織用于RNA的提取。水稻材料采集后，用液氮速凍，以保證RNA不被降解，然后凍存于-70
Cell：基因表達分析的反思
在最新一期（10月26日）的《細胞》（Cell）雜志上，來自懷特黑德研究所的研究人員報告稱在生成和注釋來自全基因表達（global gene expression）分析的數據時所采用的一種常用假設可以造成當前廣泛的生物學研究中關于基因活性與細胞行為的結論出現嚴重錯誤。 懷特黑德研究所成員Richa
多藥抗藥基因的表達實驗
實驗方法原理?大多MDR細胞膜上出現MDR-1基因及其基因產物P-糖蛋白過度表達。實驗材料?RNA試劑、試劑盒?PBS氯仿異丙醇萘酸異硫氰酸肽十二烷基肌酸鈉構櫞酸鈉乙酸鈉二疏基乙醇乙醇Taq酶儀器、耗材?離心機紫外分光光度計瓊脂糖凝膠電泳PCR儀實驗步驟 一、細胞總RNA提取1.? 收集約5×107
多藥抗藥基因的表達實驗
PCR擴增法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 大多MDR細胞膜上出現MDR-1基因及其基因產物P-糖蛋白過度表達。 多藥抗藥基因的表達實驗是通過反轉錄和PCR的方法來檢測這些特
多藥抗藥基因的表達實驗
?多藥抗藥基因的表達實驗是通過反轉錄和PCR的方法來檢測特定基因的過度表達。一、細胞總RNA提取1. ?收集約5×107個細胞，冷PBS洗滌。2. ?加入400 ul RNA提取液（含6 mol/l 的異硫氰酸肽，0.5%十二烷基肌酸鈉，0.025 mol/l 構櫞酸鈉pH7.0，0.25 mol/
痘苗病毒系統基因表達實驗
重組痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂質體轉染 兩種重組痘苗病毒共感染細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案從構建外源基因位于 PT7 和 T7 終止子之間的質
表達譜基因芯片實驗
表達譜基因芯片可應用于：（1）疾病診斷；（2）新藥開發；（3）環境保護。實驗方法原理按照預定位置固定在固相載體上很小面積內的千萬個核酸分子所組成的微點陣陣列。在一定條件下，載體上的核酸分子可以與來自樣品的序列互補的核酸片段雜交。如果把樣品中的核酸片段進行標記，在專用的芯片閱讀儀上就可以檢測到雜交信號
痘苗病毒系統基因表達實驗
實驗方法原理 本方案從構建外源基因位于 PT7 和 T7 終止子之間的質粒載體開始，然后用重組質粒通過脂質體介導轉染已經被vTF7-3（可以持續表達T7 RNA聚合酶的痘苗病毒）感染的細胞。收獲后，基因產物在細胞內的表達可以用脈沖標記的方法或用「重組痘苗病毒及其產物的鑒定實驗」中敘述的方法分
RSV感染的基因表達譜分析
發表在11月12日的PLOS Medicine雜志上的一項研究，采用全血基因表達譜分析估測了兒童RSV感染的發病機制和疾病嚴重程度，揭示了在兒童中由RSV感染引起的免疫反應的系統學調節異常，表明分子標記能夠用來預測疾病的嚴重程度。 呼吸道合胞體病毒(RSV，Respiratory sy
基因表達差異分析方法進展
? 高等真核生物的基因組一般具有80 000～100 000個基因，而每一個細胞大約只表達其中的15%［1］。基因在不同細胞間及不同生長階段的選擇性表達決定了生命活動的多樣性，如發育與分化、衰老與死亡、內環境穩定、細胞周期調控等。比較細胞間基因表達的差異為我們揭示生命活動的規律提供了依據。
基因表達快速分析新技術
實驗概要介紹了一種新的基因表達快速分析技術-MPSS 技術的基本原理、技術路線及其優點和應用。實驗原理MPSS技術是利用限制性內切酶和熒光檢測知識,發展出的一種辨認和測定細胞每一個cDNA 克隆片段末端16～20bp序列的方法,從而查明細胞內所有基因的表達情況。MPSS 分析系統大體可劃分為三大部分
環境對果蠅基因表達的效應實驗
實驗方法原理?實驗材料?彎翅果蠅試劑、試劑盒?果蠅培養基 乙醚儀器、耗材?恒溫培養箱 立體解剖鏡 培養瓶及麻醉瓶實驗步驟 1.從保種的彎翅果蠅(基因型為cu/cu)培養瓶中建立3種培養體系,雌蠅不要求是處女蠅。在培養瓶上貼上20℃、25℃、28℃標簽,初始培養溫度均為25℃,一直培養到化蛹(這樣可以
環境對果蠅基因表達的效應實驗
表型的許多方面都受到生物體遺傳組成和其生存環境的影響,因此可以說表型是基因型與環境相互作用的產物。果蠅卷曲翅基因的表達常受到環境的修飾,通過觀察該基因在不同環境下的表達情況,即可顯示環境對基因表達的影響。卷曲翅基因(cu)對溫度敏感,純合體(cu/cu)果蠅在高溫下培養時翅膀頂端彎曲(圖7-1),但
痘苗病毒系統基因表達實驗（二）
實驗方法原理含有 pT7 控制的外源基因（本實驗「重組痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂質體轉染」）的重組質粒，通過同源重組可整合到痘苗病毒中,并制備重組病毒儲液。將此病毒儲液與 vTF7-3 共同感染貼壁或懸浮細胞，在培養過程中，外源基因被高效的 T7 RNA 聚合酶轉錄，并在感染細胞的細胞質完成
痘苗病毒系統基因表達實驗（一）
本節介紹依賴于在哺乳動物細胞質合成噬菌體 T7 RNA 聚合酶的瞬時細胞質表達系統。首先，將感興趣的基因插入質粒中，使其位于 T7 RNA 聚合酶啟動子（PT7）的控制下。應用脂質體轉染，重組質粒進入感染了 vTF7-3 的細胞質中，而 vTF7-3 是一種能編碼噬菌體T7 RNA聚合酶的重組痘苗病