融合基因的技術特點
融合基因可在原核細胞(如大腸桿菌) 也可在真核細胞中進行表達。原核表達系統的特點是時程短,費用低,是科研中的主要工具。其缺點是真核蛋白表達沒有得到確切修飾;大量蛋 白常常沉淀成不溶性包涵體聚合物,需要復雜的變性和復性過程;大量蛋白的分泌較困難。真核表達系統的特點是蛋白翻譯后加工機會多,甚至可被改造成人源型;真核細胞易被轉染,具有遺傳穩定性和可重復性;產物可被分泌,提純簡單,成本低。......閱讀全文
細胞融合技術電融合法
在直流電脈沖的誘導下,細胞膜表面的氧化還原電位發生改變,使異種細胞粘合并發生質膜瞬間破裂,進而質膜開始連接,直到閉和成完整的膜,形成融合體。優點:融合率高、重復性強、對細胞傷害小;裝置精巧、方法簡單、可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過程;免去PEG誘導后的洗滌過程、誘導過程可控性強。
植物轉基因技術的特點
利用植物來生產疫苗的最大優點是他可以作為食品直接口服。通過各種植物轉基因技術將多臺疫苗基因轉入植物,從而得到表達多肽疫苗的轉基因植物。隨著抗體基因工程能將抗體基因(從小的活性單位到完整抗體的重、輕鏈基因)從單抗雜交瘤中分離出來,人們就開始想辦法利用轉基因植物來表達這些抗體。 1989年Hiat
融合基因跟基因突變的區別
這應該是腫瘤患者用藥過程中才會出現的問題 融合基因比例升高就意味著耐藥性的產生 比如說ALK ROS 等基因的融合 專業角度來說的話基因融合和基因突變實際上是兩個平行關系 屬于基因變異的兩者類型
bcr/abl融合基因的基因檢測方法
Southern Blot即DNA印跡,可以對bcr-abl融合基因DNA重排進行分子生物學檢測。將經限制性內切酶酶切及瓊脂糖電泳分離的DNA片段轉移到固相雜交膜上,胚系DNA會產生特征性片段,但發生過基因重排的細胞DNA因酶切位點有所改變會產生有別于胚系的DNA酶切片段。大多數bcr基因的斷裂點集
關于融合蛋白的特點介紹
融合基因可在原核細胞(如大腸桿菌) 也可在真核細胞中進行表達。 原核表達系統的特點是時程短,費用低,是科研中的主要工具。其缺點是真核蛋白表達沒有得到確切修飾;大量蛋 白常常沉淀成不溶性包涵體聚合物,需要復雜的變性和復性過程;大量蛋白的分泌較困難。真核表達系統的特點是蛋白翻譯后加工機會多,甚至可
融合基因的操作程序
在構建融合蛋白中,一個關鍵的問題是兩蛋白間的接頭序列( Linker ),即連接肽。它的長度對蛋白質的折疊和穩定性非常重要。如果接頭序列太短,可能影響兩蛋白高級結構的折疊,從而相互干擾;如果接頭序列太長,又涉及免疫原性的問題,因為接頭序列本身就是新的抗原。一般來說, 3-5個氨基酸的Linker可滿
融合基因的制備方法介紹
1、進行目的基因的克隆:根據基因序列互補原則,設計合適的引物序列,以cDNA為模板,利用PCR技術擴增不同的目的DNA片段。2、在載體中進行重組:通過限制內切酶將兩個DNA片段進行酶切并回收,然后通過連接酶將兩個具有相同末端酶切位點的基因片段進行體外連接,并克隆到高表達質粒載體中,構建重組質粒。3、
關于融合基因的分類介紹
根據構成融合基因的種類,可以將融合基因分為四大類: (1)由報告基因和功能基因構成的融合基因。常用的報告基因有:GFP(綠色熒光蛋白)基因、GUS基因、LacZ基因和Luciferasese(蟲熒光素酶)基因等,主要目的是對功能基因進行示蹤,研究其功能及特性。 (2)由信號肽或單體蛋白的序列
常見融合蛋白功能特點
1、免疫球蛋白(Ig)融合蛋白免疫球蛋白融合蛋白是指在基因水平將目的基因同Ig部分片段基因相連,并在真核或原核細胞中表達出的具有上述兩部分結構域的重組蛋白。據目的蛋白與Ig不同片斷相連,可將其分為二大類 :一類為Fab(Fv)融合蛋白; 另一類為 Fc融合蛋白。2、甲狀旁腺激素(PTH)融合蛋白甲狀
基因分型定量檢測技術的技術特點
基因芯片技術突出特點是集成化、微型化、自動化,代表了未來分子診斷的發展趨勢。其優點有以下幾個方面:一是高度的靈敏性和準確性;二是快速簡便;三是可同時檢測多種疾病。因此已廣泛應用于DNA序列測定、基因表達譜分析、基因組研究、基因突變檢測及多態性分析、疾病的臨床診斷和預測、藥物研究與開發以及法醫鑒定、工
電融合技術簡介
當細胞置于非常高的電場中,細胞膜就變得具有通透性,能讓外界的分子擴散進細胞內,這一現象稱為電融合,又叫電穿孔。
細胞融合技術
細胞融合(cell fusion)或細胞雜交(cell hybridization)是指真核細胞通過介導和培養,兩個或多個細胞合并成一個雙核或多核細胞的過程。人工的細胞融合開始于20世紀50年代, 60年代到70代作為一門新興的技術, 發展非常快, 應用范圍也極為廣泛, 除了同種類細胞間可以
融合蛋白技術簡介
在基因操作中,對一些分子數小的多肽基因常采用融合的方法與某一基因(如lac)相連,二者之間接上某一酶(如凝血酶)的切口,以增加在體內表達后產物的穩定性,也有的故意使兩個分子串連融合以提高療效,如IL-3與GM-CSF。也有與分泌性蛋白的信號肽基因組成融合基因,以使表達產物分泌到膜外或胞外。融合蛋白技
關于bcr/abl融合基因的基因結構介紹
人abl基因位于9號染色體長臂,有1b、1a和2~11共12個外顯子。轉錄始自1b或1a,形成的兩種mRNA長度分別為7kb和6kb,合成的兩種蛋白質分子量均約為145,前者定位于細胞膜,而后者主要在細胞核內。abl主要結構有N端的肉瘤同源2(srchomology,SH2)、SH1。SH2結合
轉基因技術的特點和應用
轉基因技術被稱為“人類歷史上應用最為迅速的重大技術之一”。操作和轉移的一般是經過明確定義的基因,功能清楚,后代表現可準確預期。自然界中同樣廣泛存在自發的轉基因現象,譬如植物界的異花授粉、天然雜交以及農桿菌天然轉基因系統等等。?轉基因技術應用在社會各個領域 中,較為常見的包括了利用轉基因技術改良農作物
基因工程疫苗的技術特點
使用DNA重組生物技術,把天然的或人工合成的遺傳物質定向插入細菌、酵母菌或哺乳動物細胞中,使之充分表達,經純化后而制得的疫苗。應用基因工程技術能制出不含感染性物質的亞單位疫苗、穩定的減毒疫苗及能預防多種疾病的多價疫苗。
細胞融合技術仙臺病毒法融合
仙臺病毒法融合①兩種細胞在一起培養,加入病毒,在4℃條件下病毒附著在細胞膜上。并使兩細胞相互凝聚;②在37℃中,病毒與細胞膜發生反應,細胞膜受到破環,此時需要Ca2+和Mg2+,最適PH為8.0一8.2;③細胞膜連接部穿通,周邊連接部修復,此時需Ca2+和ATP;④融合成巨大細胞,仍需ATP。
PEG誘導融合的特點和原理
?PEG誘導融合的特點:其優點是融合成本低,勿需特殊設備;融合子產生的異核率較高;融合過程不受物種限制。其缺點是融合過程繁瑣,PEG可能對細胞有毒害。PEG的作用機理: Kao等認為,由于PEG分子具有輕微的負極性,故可以與具有正極性基團的水、蛋白質和碳水化合物等形成H鍵,從而在原生質體之間形成分子
融合蛋白技術的臨床應用
1、DNA疫苗目前,疫苗已經經歷了三代:第一代疫苗是用減毒或殺死的病原體來激活機體免疫系統;第二代疫苗是用生物技術和重組DNA技術研制的組分疫苗注射機體誘導免疫應答; 第三代疫苗是直接注射基因重組的抗原基因來激活人體免疫系統,即DNA疫苗。DNA疫苗與傳統疫苗相比有著明顯的優勢,如易于生產,穩定性強
細胞電融合技術的簡介
當細胞置于非常高的電場中,細胞膜就變得具有通透性,能讓外界的分子擴散進細胞內,這一現象稱為電穿孔。運用這一技術,許多物質,包括DNA、RNA、蛋白質、藥物、抗體和熒光探針都能載入細胞。作為一種基因轉導方法,電穿孔已被廣泛用于各種細胞類型,包括細菌、酵母、植物和動物細胞;而且,它還能作為注射方法(稱為
細胞融合技術的意義
⒈理論上說任何細胞,都有可能通過體細胞雜交而成為新的生物資源。這對于種質資源的開發和利用具有深遠的意義。⒉融合過程不存在有性雜交過程中的種性隔離機制的限制,為遠緣物種間的遺傳物質交換提供了有效途徑。⒊體細胞雜交產生的雜種細胞含有來自雙親的核外遺傳系統,在雜種的分裂和增殖過程中雙親的葉綠體、線粒體DN
融合蛋白技術的操作要點
在構建融合蛋白中,一個關鍵的問題是兩蛋白間的接頭序列( Linker ),即連接肽。它的長度對蛋白質的折疊和穩定性非常重要。如果接頭序列太短,可能影響兩蛋白高級結構的折疊,從而相互干擾;如果接頭序列太長,又涉及免疫原性的問題,因為接頭序列本身就是新的抗原。一般來說, 3-5個氨基酸的Linker可滿
細胞電融合技術的優點
與其他常用的導入外源物質的方法相比,電穿孔具有很多優點。首先,不必象顯微注射那樣使用玻璃針,不需要技術培訓和昂貴的設備,可以一次對成百萬的細胞進行注射。第二,與用化學物質相比,電穿孔幾乎沒有生物或化學副作用。第三,因為電穿孔是一種物理方法,較少依賴細胞類型,因而應用廣泛。實際上,對大多數細胞類型,用
細胞融合技術的發展
19世紀30年代,科學家們相繼在肺結核,天花,水痘,麻疹等疾病患者的病理組織中觀察到多核細胞。細胞融合19世紀70年代,科學家們在蛙的血細胞中也看到了多核細胞的現象,但是當時科學發展水平的限制,沒有給予足夠重視。1962年,日本科學家發現日本血凝型病毒能引起艾氏腹水瘤細胞融合的現象。1965年,英國
bcr/abl融合基因的移植時間
既往經驗表明,當病情進展到加速或急變期后實施異基因SCT后效果不佳,多數專家主張應在慢性期移植,結論是CML診斷后盡早(一年內)移植。
bcr/abl融合基因的移植時間
既往經驗表明,當病情進展到加速或急變期后實施異基因SCT后效果不佳,多數專家主張應在慢性期移植,結論是CML診斷后盡早(一年內)移植。
關于bcr/abl融合基因的簡介
由t (9;22) (q34;q11)產生的費城染色體(Ph)在血液腫瘤中具有重要的診斷和預后意義,出現于90%以上的CML、30%成人ALL、2%~20%兒童ALL以及少數AML和MM患者。位于9q34的ABL基因與位于22q11的BCR基因相互易位,形成BCR/ABL和ABL/BCR融合基因
bcr/abl融合基因的治療方法
CML治療的目的是控制血液學和遺傳學異常、消除癥狀、最大限度地延長生存。抑制劑既然酪氨酸激酶在CML的發生中起了關鍵作用,抑制其活性成為CML治療的一個新途徑。已經合成了較特異的abl酪氨酸激酶抑制劑,即STI-571(伊馬替尼,格列衛)。伊馬替尼是2-苯氨嘧啶衍生物,它可以選擇性地阻斷ATP與Ab
常見融合蛋白功能特點介紹
1、免疫球蛋白(Ig)融合蛋白免疫球蛋白融合蛋白是指在基因水平將目的基因同Ig部分片段基因相連,并在真核或原核細胞中表達出的具有上述兩部分結構域的重組蛋白。據目的蛋白與Ig不同片斷相連,可將其分為二大類 :一類為Fab(Fv)融合蛋白; 另一類為 Fc融合蛋白。2、甲狀旁腺激素(PTH)融合蛋白甲狀
基因組重排技術的特點介紹
基因組重排技術結合了傳統誘變技術和細胞融合技術,是一項對整個微生物基因組重排的新型育種技術。基因組重排技術通過多親本原生質體遞歸融合,可以使工程菌快速獲得多樣復雜優良表型,并且無須了解其基因組學、代謝組學等具體背景。介紹了基因組重排技術的過程及應用,展現了基因組重排技術的優點,并給出了基因組重排技術