PCR測序方法詳細介紹
直接測序法 一、原理 PCR擴增獲得雙鏈DNA產物經變性形成單鏈,測序引物與其中一條模板鏈上的互補序列退火。退火的引物在低進行性反應條件下(如低溫和低dNTP濃度),通過DNA聚合酶催化作用延伸20——80個核苷酸;由于此反應體系中摻入放射性標記的dNTP,能使新合成的DNA鏈中含有多個放射性標記,便于產生高放射顯影度。標記的DNA鏈在高進行性反應條件下,通過DNA聚合酶催化進行延伸,通過在反應體系中摻入 ddNTP,使鏈延伸反應終止。反應產物經過電泳分離和放射自顯影,就可以進行序列判讀。 二、材料 (1)DNA模板PCR產物離子交換色譜純化,作為DNA模板,濃度為:0.01——0.1mmol/L。 (2)引物20個核苷酸的DNA引物可以不經過純化,直接用作測序引物,引物濃度 l mmol/L&nbs......閱讀全文
定向測序的方法介紹
中文名稱定向測序英文名稱directed sequencing定 義對染色體上已知序列鄰近段落的連續DNA測定的方法。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
土壤水分測定方法詳細介紹
土壤水分是植物生長的關鍵性因子，各國對土壤含水量都進行了一系列的研究，美國、澳大利亞、巴西等國家，對土壤水分的研究投入相當大，而且也具備了一定的實力。但是國外比較偏重于水分入滲、森林水文方面的研究，對某地區植被與土壤水分的相互作用研究較少。國內從上世紀50年代開始，逐漸對土壤水分進行細致深入地研究，
讓基因組測序繞過PCR
?在基因組測序中，PCR擴增似乎是繞不過去的一步。然而，PCR也帶來一些問題，包括不均勻擴增，導致某些序列的比例過高。對目前的新一代測序（NGS）平臺而言，測序某些堿基組成上存在嚴重偏向的基因組區域仍是一大挑戰。在GEN雜志上，Patricia Fitzpatrick Dimond博士介紹了PCR-
PCR實驗技術指南之產物測序
1. DNA 直接測序：指直接分析不經分離的PCR 擴增產物，如果各個位點上堿基序列都是一致的，則所得信號是確定的，否則，在那些有相異堿基的位點出現模糊信號， 如果模板在多數情況下被正確擴增，則少數的突變將被掩蓋，這是結果顯示的是模板的序列.但是，當擴增的前幾輪即出現錯誤擴增并被后續的循環積累，這時
pcr實驗詳細步驟是怎么樣的
1、模板的取材主要依據PCR的壙增對象，可以是病原體標本如病毒、也可以是病理生理標本如細胞等。2、標本處理的基本要求是除去雜質，并部分純化標本中的核酸。多數樣品霓要經過SDS和蛋白 酶K處理。難以破碎的細菌，可用溶菌酶加EDTA處理。3、引物最好在模板cDNA的保守區內設計，引物長度一般在15~30
進口PCR儀的常見問題詳細解答
1. 進口PCR儀cDNA產量的很低 可能的原因： *RNA模板質量低 *對mRNA濃度估計過高 *反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足 *同位素磷32過期 *反應體積過大，不應超過50μl 2. 進口PCR儀擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺 *zui常見的原因在于
進口PCR儀的常見問題詳細解答
1. 進口PCR儀cDNA產量的很低 可能的原因： *RNA模板質量低 *對mRNA濃度估計過高 *反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足 *同位素磷32過期 *反應體積過大，不應超過50μl 2. 進口PCR儀擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺 *zui常見的原因在于
pcr實驗詳細步驟是怎么樣的
1、模板的取材主要依據PCR的壙增對象，可以是病原體標本如病毒、也可以是病理生理標本如細胞等。2、標本處理的基本要求是除去雜質，并部分純化標本中的核酸。多數樣品霓要經過SDS和蛋白 酶K處理。難以破碎的細菌，可用溶菌酶加EDTA處理。3、引物最好在模板cDNA的保守區內設計，引物長度一般在15~30
第二代測序原理的詳細解析！
2005年，羅氏推出了第一款二代測序儀羅氏454，生命科學開始進入高通量測序時代。后續隨著Illumina系列測序平臺的推出，極大降低了二代測序的價格，推動了高通量測序在生命科學各個研究領域的普及。目前，高通量測序已經成為一種常規研究方法，大量科研工作中均會用到。然而，為什么二代測序能實現高通量
PCR是什么？PCR電泳圖詳細分析怎么看
聚合酶鏈式反應（PCR）是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。 PCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要
詳細介紹阿貝折光儀使用方法
一. 儀器的安裝。 將折光儀置于靠窗的桌子或白熾燈前。但勿使儀器置于直照的日光中，以避免液體試樣迅速蒸發。用橡皮管將測量棱鏡和輔助棱鏡上保溫夾套的進水口與 超級恒溫槽串聯起來，恒溫溫度以折光儀上的溫度計讀數為準. 二. 加樣 松開鎖鈕，開啟輔助棱鏡，使其磨砂的斜面處于水平位置，用 滴定管加小量
生理記錄儀使用方法詳細介紹
生理記錄儀是一種墨水描筆式直線記錄儀，配合合適的換能器或電極，可記錄動物的腦電、心電、血壓、呼吸、胃腸平滑肌、骨骼肌、心肌收縮等電信號和非電生物信號。生理記錄儀采用插件式結構。若更換插件、換能器及電極，還可測量其他相應的生理指標。???生理記錄儀使用方法????1． 生理記錄儀通電前的操作??? （
常用化學試劑的分類方法詳細介紹
一、化學試劑的分類 試劑分類的方法較多。如按狀態可分為固體試劑、液體試劑。按用途可分為通用試劑、專用試劑。按類別可分為無機試劑、有機試劑。按性能可分為危險試劑、非危險試劑等。 從試劑的貯存和使用角度常按類別和性能2種方法對試劑進行分類。 （一）無機試劑和有機試劑 這種分類方法與化學的物質
實驗室常用的滅菌方法詳細介紹
實驗醫學微生物學常用的器材一般包括玻璃器材、金屬器械、橡膠制品及塑料制品等，每類器材的處理及消毒措施都有不同。嚴格的消毒滅菌工作極為重要，直接影響著整個實驗能否順利進行。 (一)消毒滅菌方法 目前常用的消毒滅菌方法多采用物理方法(如干熱滅菌法、濕熱滅菌法、過濾除菌法、射線殺菌法等)和化學方法
PCR儀的測序反應試驗講解
PCR儀進行測序反應試驗時應按照步驟依次進行： 1.取0.2ml的PCR管，用記號筆編號，將管插在顆粒冰中，加入規定試劑。總反應體積5μl，不加輕礦物油或石蠟油，蓋緊PCR管，用手指彈管混勻，稍離心。將PCR管置于PCR儀上進行擴增。98℃變性2min后進行PCR循環，PCR循環參數為96℃10
讓基因組測序繞過PCR擴增
在基因組測序中，PCR擴增似乎是繞不過去的一步。然而，PCR也帶來一些問題，包括不均勻擴增，導致某些序列的比例過高。對目前的新一代測序（NGS）平臺而言，測序某些堿基組成上存在嚴重偏向的基因組區域仍是一大挑戰。在GEN雜志上，Patricia Fitzpatrick Dimond博士介紹了PCR
熒光定量PCR詳細流程和問題解析
選擇單通道實驗還是多通道實驗？這是要根據實驗需要來選擇的，如果有一個、兩個或是三個基因要進行比較，并用看家基因進行對照，可以考慮選擇多通道實驗。多通道實驗的好處是可以消除樣本加樣的誤差。但要克服的困難也比較多，一是條件的優化比較麻煩，即多種PCR反應以及探針要在同一個反應條件下進行，并且效率都要比較
聚合酶鏈式反應（PCR）詳細步驟
一、準備工作1、實驗器具與材料：（1）移液槍：200ul、10ul（2）吸頭：200ul、20ul（3）吸頭臺：放置200ul和20ul的吸頭一個（4）EP管1.5ml、100ul2、實驗器具的處理與準備塑料制品：（包括吸頭、EP管等）送至高壓3次，試驗前將槍頭放入吸頭臺。3、試劑配制和準備：（1）
詳細解析實時熒光定量PCR探針法技術原理
目前主流的實時熒光定量PCR?（Quantitative Real-time PCR）方法分為染料法和探針法，染料法以SYBR Green法為代表，SYBR Green染料游離時熒光微弱，但但一旦與雙鏈DNA結合后，熒光大大增強，反應管中的熒光強度與反應管中雙鏈DNA的數量成正比例關系，因此熒光定量
聚合酶鏈反應(PCR)詳細實驗操作步驟
一、實驗原理 聚合酶鏈反應(PCR)技術是在體外進行的由引物介導的酶促DNA擴增反應。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四種脫氧核糖核苷酸(dNTP)及適當濃度的Mg2+存在的條件下，依賴于DNA聚合酶的體外酶促合成反應。兩個引物分別位于靶序列兩端，同兩條模板的3’端互補，由此限定擴增片
菌落PCR（Colony－PCR）方法
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。具體方法：1、PCR混合物的制備T
Taq酶PCR實驗方法介紹
General AdvicePCR allows the production of more than 10 million copies of a target DNA sequence from only a few molecules. The sensitivity of this tec
Real－time－PCR－的標記方法介紹
?Real time PCR 的標記方法一般包括以下幾類：熒光染料嵌合法（SYBR Green I）和熒光探針法(Taqman探針）和分子信標法。? ? SYBR Green I 法? ??? ? Taqman探針法? ??? ??分子信標法? ??
做miRNA的PCR的方法介紹
加尾法和莖環法加尾法，是指把miRNA再人工加一個polyA的尾巴，這樣它的結構就變長，有點象是典型的mRNA結構。很多公司提供有現成的miRNA加尾法逆轉錄試劑盒。按常規方法提取總RNA，用于逆轉錄。做完逆轉錄后，可參考的方法去做PCR。注意，這時的PCR需要的上下游引物，一般是上游引物就直接用m
定量PCR的概念及方法介紹
1.利用參照物的定量方法參照物是在定量 PCR 過程中使用的一種含量已知的標準品模板。按其性質的不同可分為內參照和外參照。外參照是序列與檢測樣品相同的標準品模板,外參照物與待檢樣本的擴增分別在不同的管內進行。通過一系列不同稀釋度的已知含量外參照的擴增,建立外參照擴增前含量與擴增產物含量之間的標準曲線
循環測序：利用－PCR－和引物末端標記進行雙脫氧測序實驗
試劑、試劑盒?ddNTP 延伸 終止混合物酶及其緩沖液AmpliTaq CS 或其他無外切酶活性的 DNA 聚合酶循環測序緩沖液熱穩定的 DNA 聚合酶核酸和寡核苷酸模板 DNA儀器、耗材?小離心管 或者微孔板熱循環儀實驗步驟 材料溶液和緩沖液貯存液、緩沖液和試劑的配方請參照附錄 1。將貯存液稀釋到
循環測序：利用－PCR－和引物末端標記進行雙脫氧測序實驗
本方法成功的關鍵是模板 DNA 的純度。瓊脂糖、鹽和蛋白質的污染都會導致 DNA 聚合酶的提前終止或暫停，而 DNA 和 RNA 降解所產生的寡核苷酸將造成引物錯配。這些污染會嚴重導致假陽性條帶或空白出現。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試
熒光法DNA測序的方法介紹
中文名稱熒光法DNA測序英文名稱fluorescencebased DNA sequencing定 義通過四種不同熒光試劑分別標記四種雙脫氧核苷酸進行DNA測序的方法。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
詳細介紹熱解析進樣器的運行方法
熱解析技術是在程序溫度(指等速升溫、等速降溫、恒溫或步級升溫等)控制下測量物質的物理性質隨溫度變化，用于研究物質在某一特定溫度時所發生的熱學、力學、聲學、光學、電學、磁學等物理參數的變化。熱解析進樣器與紫外分光光度法、紅外光譜分析法、原子吸收光譜法、核磁共振波譜法、電子能譜分析法、掃描電子顯微鏡法、
機械分析天平使用方法詳細介紹（二）
2、檢查天平橫梁兩端的吊耳是否掛好；