熒光定量PCR實驗中的核酸提取對照
可以使用內參基因，假病毒混合基質，滅活病毒混合基質來監控提取到擴增的流程。......閱讀全文
熒光定量PCR實驗中的核酸提取對照
可以使用內參基因，假病毒混合基質，滅活病毒混合基質來監控提取到擴增的流程。
熒光定量PCR實驗中的擴增對照
通常說的陽性對照和陰性對照指的是擴增試劑盒中附帶的不需要提取的陽性對照和陰性對照，更準確的定義應該是擴增陽性對照和擴增陰性對照。擴增陽性對照含有陽性擴增模板，擴增陰性對照應含有陰性擴增模板（基質核酸）。擴增對照只能監控每次擴增過程中的擴增系統是否正常，不能監控采樣、提取和每份樣品的操作過程。如果是檢
熒光定量PCR實驗中的陽性對照和陰性對照
陽性對照和陰性對照是指在相同的處理條件下，比如一份已知的感染樣品和一份已知的未感染樣品，都進行了提取和擴增最終獲得了陽性結果和陰性結果。陰陽性對照強調處理過程與樣品一致，并且有明確的預期結果。
熒光定量PCR實驗中的反轉錄對照
可以使用提取好的RNA內參基因，RNA假病毒混合基質，滅活RNA病毒混合基質來監控反轉錄到擴增的流程。無反轉錄對照（no-RT control）含有除反轉錄酶以外的所有成分。
熒光定量PCR實驗中的空白對照
無模板空白對照NTC是指不含有模板（陽性模板或者陰性模板）的對照。目前的試劑盒的NC一般都是水或陰性緩沖液，所以NC等同于NTC。其實兩者有不同的作用。儀器空白對照NTC是含有引物探針和反應液主要監控引物探針，反應體系有沒有被污染。這里的儀器空白對照我通常使用的是空反應管來監控儀器有無非特異性的熒光
細數熒光定量PCR中的8種對照
對照的目的是對檢測的各個環節進行監控，因此我們按照檢測的流程對對照進行梳理。常規熒光定量PCR的流程是：樣品采集-運輸-樣品處理-核酸提取-反轉錄（RNA病毒）-擴增-結果讀取。下面看看各個環節都可以使用哪些對照:1.陽性對照（Positive control，PC）和陰性對照（Negative c
熒光定量pcr陰性對照的定義
NC的作用在于消除試劑污染的因素～如果NC（無模板）也有擴增曲線那么說明試劑污染較為嚴重～所謂的陰性就是一定實驗后是沒有結果的～
熒光定量PCR實驗中的內標概念
內標是指在同一反應管中與靶序列共同擴增的一段非靶序列分子。內標有兩種形式，一種是使用天然樣品中含有的內參基因作為內標，另一種是人工添加的內標。內標的最大特點是與靶序列共同擴增，而其他的對照都是獨立擴增。
熒光定量PCR實驗中的內參基因
通常它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測基因的表達水平變化時常用它來做參照物。內參基因通常是持家基因（house-keeping gene）因為其表達水平受環境因素影響較小，而且在個體各個生長階段的幾乎全部組織中持續表達變化很小。常用的內參基因包括GAPDH、β-actin(BETA-acti
熒光定量PCR檢測負對照有信號的原因
(1)引物設計不夠優化：應避免引物二聚體和發夾結構的出現。(2）模板有基因組的污染：RNA提取過程中避免基因組DNA的引入，或通過引物設計避免非特異擴增。（3）實驗器材污染：移液器、水、槍頭或者熒光定量PCR孔內有熒光污染。
核酸檢測實驗室如何評價熒光定量PCR儀!
熒光定量PCR的檢測是一系列從采樣、保存運輸、樣品處理、核酸提取、擴增等一系列流程的組合，任何一個環節出現問題都會導致最終結果的錯誤。雖然在前面一系列的文章中講述了提取試劑、擴增試劑的評價但是這些仍遠遠不夠，因此我在后續的文章中會盡可能覆蓋到所有的檢測環節。 熒光定量PCR的檢測離不開熒光定量
熒光定量PCR－陰性對照曲線上揚為什么
熒光定量PCR 陰性對照曲線上揚為什么溶解曲線是判斷擴增產物是否單一的曲線，顧名思義，其跟模板（或其濃度）沒有關系，擴增什么基因就應該有其相對應的溶解曲線，類似于電泳。那么你擴增幾種基因就應該有幾種對應的峰（一般SYBR法的目的基因在80~90℃之間），我說的是一般情況，這個跟擴增片段長短有關系。出
206.5萬！該地區疾控中心采購熒光定量PCR、核酸提取儀等
一、項目基本情況 項目編號：BGZJ-ZC22313 項目名稱：白銀市白銀區疾病預防控制中心PCR實驗室能力提升項目設備采購項目（二次） 預算金額：206.5(萬元) 最高限價：206.5(萬元) 采購需求：實時熒光定量PCR系統1臺、分液平臺2臺、核酸提取儀1臺等（進口產品已論證具體
熒光定量PCR實驗步驟
1、總RNA抽提（槍頭和離心管均經過濕熱滅菌，無RNA酶） 1）取勻漿器，加入1ml的Trizol Reagent，置冰上預冷。 2）取100mg組織，加入到勻漿器中。 3）充分研磨直至無可見組織塊。 4）12000rpm離心10min取上清。 5）加入250 μl三氯甲烷，顛倒離心管
熒光定量PCR實驗指南4
3.8 防止殘余（Carry-over）污染PCR易受污染的影響，因為它是一種敏感的擴增技術。小量的外源DNA污染可以與目的模板一塊被擴增。當前一次擴增產物用來進行新的擴增反應時，會發生共同來源的污染。這稱之為殘余污染。從其他樣品中純化的DNA或克隆的DNA也會是污染源（非殘余污染）。可以在PCR過
熒光定量PCR實驗指南5
您可以選擇熒光染料SYBGREEN體系，具體請參照說明書。您可靈活使用20-50ul間其他體積，注意保證終濃度相同。A2010A0106試劑盒:反應體系終濃度(自配熱啟動熒光系統)：1-2U的hotstartTaq酶、3-5.5mM的Mg2+ 、0.2mM的dNTPs、1×PCRbuffer（A
熒光定量PCR實驗基本步驟
1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對；2、引物、探針的設計；3、引物探針的合成；? ??4、反應體系的配制；? ??5、反應條件的設定；? ??6、反應體系和條件的優化；? ??7、熒光曲線和數據分析；? ??8、標準品的制備；
熒光定量PCR實驗指南1
第一部分一、基本步驟：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對；2、引物、探針的設計；3、引物探針的合成；4、反應體系的配制；5、反應條件的設定；6、反應體系和條件的優化；7、熒光曲線和數據分析；8、標準品的制備； 二、技術關鍵： 1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對；
熒光定量PCR實驗設計
?設置對照組：熒光定量PCR檢測一般流程如下圖，選擇檢測靶標基因，進行引物篩選及體系構建，后續進行樣本處理核酸提取，檢測分析結果。對照組是實驗的監控系統，監測實驗是否有存在異常，也是排除實驗異常關鍵所在；實驗對照設置: 通常有陽性對照，陰性對照組等。? ??? 具體可根據實驗類型進行對照組的設置；對
熒光定量PCR具體實驗步驟
熒光定量PCR具體實驗步驟，1 樣品RNA的抽提①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色
熒光定量PCR實驗指南2
2.3TaqmanMGB探針設計介紹MGB探針的優點：2MGB探針較短(14-20bp)，更容易找到所有排序序列的較短片段的保守區。2短片段探針(14-20bp)加上MGB 后，Tm值將提高10℃，更容易達到熒光探針Tm值的要求。2MGB探針的設計原則2探針的5’端避免出現G，即使探針水解為單個堿基
熒光定量PCR實驗指南3
3.3 引物、探針的純度和穩定性定制引物的標準純度對于大多數PCR應用是足夠的。部分應用需要純化，以除去在合成過程中的任何非全長序列。這些截斷序列的產生是因為DNA合成化學的效率不是100％。這是個循環過程，在每個堿基加入時使用重復化學反應，使DNA從3'到5'合成。在任何一個循環都
熒光定量PCR技術的熒光定量PCR的方法
接下來我們就來了解一下熒光定量的主要方法，我們如何選擇合適的方法？熒光定量PCR所使用的熒光化學可分為兩種：熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應的可分為特異類和非特異類兩類，特異性檢測方法是在PCR反應中利用標記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產物；而非特異性檢測方法是在在PCR反
使用熒光定量PCR方法進行核酸檢測的步驟
進行核酸檢驗，需要經過取樣、留樣、留存、核酸提取、上機檢測五個步驟。? ? 核酸檢測的第一步就是采集人體分泌物，用鼻試子或咽試子擦拭鼻腔或咽后壁及雙側咽扁桃體處。? ? 第二步醫務人員進行留樣，將試子頭浸入細胞保存液中，折斷尾部后立即旋緊管蓋。? ? 第三部要將樣本放入密閉袋中，保存好并及時送檢。?
熒光定量PCR實驗的技術要點
1、 目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對? ? 從http://www.ncbi.nlm.nih.gov/網點的genbank中下載所需要的序列。下載的方式有兩種：一為打開某個序列后，直接點擊“save”，保存格式為“.txt”文件。保存的名稱中要包括序列的物種、序列的亞型、序列的注冊號。然后
熒光定量PCR實驗中無Ct值出現的原因
(1)反應的循環數不夠：一般要在35個循環以上，但是過多的循環次數可增加背景值。(2)檢測熒光信號的步驟有誤：SYB-Rgreen法（SG法）采用的是72延伸時采集熒光信號，Taman法則是在退火結束或延伸結束時進行信號采集。(3)引物或探針降解: 可通過PAGE電泳檢測其完整性，若是電泳條帶呈彌散
熒光定量PCR
熒光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗技術，它是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針，對PCR產物進行標記跟蹤，實時在線監控反應過程，結
熒光定量PCR中溶解曲線的意思
熒光定量pcr的溶解曲線理解：用Syber Green方法做完PCR后，用來判斷產物是否相對專一。應結束后，逐漸加溫。和SyberGreen分子結合的PCR產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和SyberGreen結合。出現怪異的溶解曲線大部分都是機器設置或者反應體系的問題，建議：1、將擴增產物跑一
熒光定量PCR中溶解曲線的意思
溶解曲線是判斷擴增產物是否單一的曲線，顧名思義，其跟模板（或其濃度）沒有關系，擴增什么基因就應該有其相對應的溶解曲線，類似于電泳。那么你擴增幾種基因就應該有幾種對應的峰（一般SYBR法的目的基因在80~90℃之間），我說的是一般情況，這個跟擴增片段長短有關系。出現其他峰就該考慮是否為引物二聚體（一般
如何做好熒光定量PCR實驗
熒光定量PCR實驗指南 一、基本步驟： 1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對； 2、引物、探針的設計； 3、引物探針的合成； 4、反應體系的配制； 5、反應條件的設定； 6、反應體系和條件的優化； 7、熒光曲線和數據分析；