聚丙烯酰氨凝膠電泳的基本信息
聚丙烯酰胺凝膠電泳簡稱為PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的一種常用電泳技術。聚丙烯酰胺凝膠由單體丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成，聚合過程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有兩種：化學聚合法和光聚合法。化學聚合以過硫酸銨（APS）為催化劑，以四甲基乙二胺（TEMED）為加速劑。在聚合過程中，TEMED催化過硫酸銨產生自由基，后者引發丙烯酰胺單體聚合，同時甲叉雙丙烯酰胺與丙烯酰胺鏈間產生甲叉鍵交聯，從而形成三維網狀結構。PAGE根據其有無濃縮效應，分為連續系統和不連續系統兩大類，連續系統電泳體系中緩沖液pH值及凝膠濃度相同，帶電顆粒在電場作用下，主要靠電荷和分子篩效應。不連續系統中由于緩沖液離子成分，pH，凝膠濃度及電位梯度的不連續性，帶電顆粒在電場中泳動不僅有電荷效應，分子篩效應，還具有濃縮效應，因而其分離條帶清晰度及分辨率均較前者佳。不連續體系由......閱讀全文
聚丙烯酰氨凝膠電泳的基本信息
聚丙烯酰胺凝膠電泳簡稱為PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的一種常用電泳技術。聚丙烯酰胺凝膠由單體丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成，聚合過程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有兩種：化學聚合法和光聚合法。化學聚合以過硫酸
聚丙烯酰氨凝膠電泳的形式
聚丙烯酰胺凝膠為網狀結構，具有分子篩效應。它有兩種形式：非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（Native-PAGE）和變性聚丙烯酰胺凝膠電泳。
聚丙烯酰氨凝膠電泳的原理
1、聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺單體（以后簡稱單體）在水溶液中聚合而成的親水性高聚物，是一種透明而不溶于水并有韌性的凝膠。2、制備凝膠時需要的原料是：丙烯酰胺，亞甲基雙丙烯酰胺（雙體，用作交聯劑）在水溶液中用催化劑引發聚合。常用的催化劑有：二甲氨基丙腈（DMAPN）；過硫酸銨，四甲基乙二胺；過硫酸銨或
聚丙烯酰氨凝膠電泳的過程
蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時，它的遷移率取決于它所帶凈電荷以及分子的大小和形狀等因素。如果加入一種試劑使電荷因素消除，那電泳遷移率就取決于分子的大小，就可以用電泳技術測定蛋白質的分子量。1967年，Shapiro等發現陰離子去污劑十二烷基硫酸鈉（SDS）具有這種作用。當向蛋白質溶液中加入足夠量SD
聚丙烯酰氨凝膠電泳的作用
SDS是陰離子去污劑，作為變性劑和助溶試劑，它能斷裂分子內和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白分子的二、三級結構。而強還原劑如巰基乙醇，二硫蘇糖醇能使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS后，分子被解聚成多肽鏈，解聚后的氨基酸側鏈和SDS結合成蛋白- SDS膠束，所帶的負電荷
聚丙烯酰氨凝膠電泳的實驗材料
一．設備進行凝膠電泳的裝置見圖版4。1）直流電源如果一次進行電泳的管數在20管以內可以用最大電流300毫安的整流器（硅或硒整流器），調壓范圍0—300伏。2）電泳裝置包括二個緩沖液槽和電泳 管。液槽可以用玻璃或塑料制成，在底部鉆孔。插入電泳管，用有孔橡皮塞固定。電泳管選用孔徑均勻一致的玻璃管切制。長
聚丙烯酰氨凝膠電泳的作用原理
作用原理：聚丙烯酰胺凝膠為網狀結構，具有分子篩效應。它有兩種形式：非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（Native-PAGE）和變性聚丙烯酰胺凝膠電泳。
聚丙烯酰氨凝膠電泳的作用原理
在蛋白質的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中，蛋白質能夠保持完整狀態，并依據蛋白質的分子量大小、蛋白質的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開；在DNA的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中，DNA呈雙鏈狀態泳動，其遷移率會受堿基組成和序列的影響。在變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中，由于加入了變性劑——蛋白質變性劑常為SDS
聚丙烯酰氨凝膠電泳的實驗材料
一．設備進行凝膠電泳的裝置見圖版4。1）直流電源如果一次進行電泳的管數在20管以內可以用最大電流300毫安的整流器（硅或硒整流器），調壓范圍0—300伏。2）電泳裝置包括二個緩沖液槽和電泳 管。液槽可以用玻璃或塑料制成，在底部鉆孔。插入電泳管，用有孔橡皮塞固定。電泳管選用孔徑均勻一致的玻璃管切制。長
聚丙烯酰氨凝膠電泳的工作原理
1、聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺單體（以后簡稱單體）在水溶液中聚合而成的親水性高聚物，是一種透明而不溶于水并有韌性的凝膠。2、制備凝膠時需要的原料是：丙烯酰胺，亞甲基雙丙烯酰胺（雙體，用作交聯劑）在水溶液中用催化劑引發聚合。常用的催化劑有：二甲氨基丙腈（DMAPN）；過硫酸銨，四甲基乙二胺；過硫酸銨或
聚丙烯酰氨凝膠電泳樣品處理方法
根據樣品分離目的不同，主要有三種處理方法：還原SDS處理、非還原SDS處理、帶有烷基化作用的還原SDS處理。1、還原SDS處理：在上樣buffer中加入SDS和DTT（或β-巰基乙醇）后，蛋白質構象被解離，電荷被中和，形成SDS與蛋白相結合的分子，在電泳中，只根據分子量來分離。一般電泳均按這種方式處
聚丙烯酰氨凝膠電泳的操作方法
1、凝膠管的制備將電泳玻管用小橡皮塞塞住底部，然后灌入新配的凝膠溶液。每管加至液體高度為7.5cm。為了保證凝膠表面平整可用注射器通過細針頭小心地加一層（高約1厘米）蒸餾水于表面上，勿使與凝膠液混合，室溫放置。如果條件合適溶液于30-60分鐘內聚合而成凝膠。凝膠溶液的配制方法：溶液甲：丙烯酰胺（氯仿
聚丙烯酰氨凝膠電泳的操作方法
1、凝膠管的制備將電泳玻管用小橡皮塞塞住底部，然后灌入新配的凝膠溶液。每管加至液體高度為7.5cm。為了保證凝膠表面平整可用注射器通過細針頭小心地加一層（高約1厘米）蒸餾水于表面上，勿使與凝膠液混合，室溫放置。如果條件合適溶液于30-60分鐘內聚合而成凝膠。凝膠溶液的配制方法：溶液甲：丙烯酰胺（氯仿
聚丙烯酰氨凝膠電泳的樣品處理方法
根據樣品分離目的不同，主要有三種處理方法：還原SDS處理、非還原SDS處理、帶有烷基化作用的還原SDS處理。1、還原SDS處理：在上樣buffer中加入SDS和DTT（或β-巰基乙醇）后，蛋白質構象被解離，電荷被中和，形成SDS與蛋白相結合的分子，在電泳中，只根據分子量來分離。一般電泳均按這種方式處
聚丙烯酰氨凝膠電泳的實驗設備介紹
1、直流電源如果一次進行電泳的管數在20管以內可以用最大電流300毫安的整流器（硅或硒整流器），調壓范圍0-300V。2、電泳裝置包括二個緩沖液槽和電泳管。液槽可以用玻璃或塑料制成，在底部鉆孔。插入電泳管，用有孔橡皮塞固定。電泳管選用孔徑均勻一致的玻璃管切制。長10厘米，內徑5毫米。脫色用玻璃管長1
聚丙烯酰氨凝膠電泳的實驗結果分析
1、電泳條件的選擇為了選擇血清蛋白電泳較合適的條件，我們分別對單體濃度、雙體濃度、配制凝膠時所用不同正離子、各種電壓、二甲氨基丙腈的濃度、過硫酸銨的濃度等條件進行了試驗。根據以上試驗結果，我們在分離血清蛋白時選用的條件是：單體濃度6.25-6.5%，雙體占總丙烯酰胺量的4-5%，正離子采用三羥甲基氨
聚丙烯酰氨凝膠電泳的實驗器材介紹
1、直流電源如果一次進行電泳的管數在20管以內可以用最大電流300毫安的整流器（硅或硒整流器），調壓范圍0-300V。2、電泳裝置包括二個緩沖液槽和電泳管。液槽可以用玻璃或塑料制成，在底部鉆孔。插入電泳管，用有孔橡皮塞固定。電泳管選用孔徑均勻一致的玻璃管切制。長10厘米，內徑5毫米。脫色用玻璃管長1
聚丙烯酰氨凝膠電泳實驗方法介紹
設備1、直流電源如果一次進行電泳的管數在20管以內可以用最大電流300毫安的整流器（硅或硒整流器），調壓范圍0-300V。2、電泳裝置包括二個緩沖液槽和電泳管。液槽可以用玻璃或塑料制成，在底部鉆孔。插入電泳管，用有孔橡皮塞固定。電泳管選用孔徑均勻一致的玻璃管切制。長10厘米，內徑5毫米。脫色用玻璃管
聚丙烯酰氨凝膠電泳樣品處理方法介紹
根據樣品分離目的不同，主要有三種處理方法：還原SDS處理、非還原SDS處理、帶有烷基化作用的還原SDS處理。1、還原SDS處理：在上樣buffer中加入SDS和DTT（或β-巰基乙醇）后，蛋白質構象被解離，電荷被中和，形成SDS與蛋白相結合的分子，在電泳中，只根據分子量來分離。一般電泳均按這種方式處
聚丙烯酰氨凝膠電泳實驗的操作方法
1、凝膠管的制備將電泳玻管用小橡皮塞塞住底部，然后灌入新配的凝膠溶液。每管加至液體高度為7.5cm。為了保證凝膠表面平整可用注射器通過細針頭小心地加一層（高約1厘米）蒸餾水于表面上，勿使與凝膠液混合，室溫放置。如果條件合適溶液于30-60分鐘內聚合而成凝膠。凝膠溶液的配制方法：溶液甲：丙烯酰胺（氯仿
聚丙烯酰氨凝膠電泳的樣品處理方式
根據樣品分離目的不同，主要有三種處理方法：還原SDS處理、非還原SDS處理、帶有烷基化作用的還原SDS處理。1、還原SDS處理：在上樣buffer中加入SDS和DTT（或β-巰基乙醇）后，蛋白質構象被解離，電荷被中和，形成SDS與蛋白相結合的分子，在電泳中，只根據分子量來分離。一般電泳均按這種方式處
聚丙烯酰氨凝膠電泳的基本原理
1、聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺單體（以后簡稱單體）在水溶液中聚合而成的親水性高聚物，是一種透明而不溶于水并有韌性的凝膠。2、制備凝膠時需要的原料是：丙烯酰胺，亞甲基雙丙烯酰胺（雙體，用作交聯劑）在水溶液中用催化劑引發聚合。常用的催化劑有：二甲氨基丙腈（DMAPN）；過硫酸銨，四甲基乙二胺；過硫酸銨或
聚丙烯酰氨凝膠電泳實驗的電泳條件的選擇
為了選擇血清蛋白電泳較合適的條件，我們分別對單體濃度、雙體濃度、配制凝膠時所用不同正離子、各種電壓、二甲氨基丙腈的濃度、過硫酸銨的濃度等條件進行了試驗。根據以上試驗結果，我們在分離血清蛋白時選用的條件是：單體濃度6.25-6.5%，雙體占總丙烯酰胺量的4-5%，正離子采用三羥甲基氨基甲烷，二甲氨基丙
聚丙烯酰氨凝膠電泳的主要成分的作用
聚丙烯酰胺：丙烯酰胺與為蛋白質電泳提供載體，其凝固的好壞直接關系到電泳成功與否與促凝劑及環境密切相關；制膠緩沖液：濃縮膠選擇pH6.8，分離膠選擇pH8.8，選擇Tris－HCl系統。TEMED與AP：催化劑，催化單丙和雙丙聚合成聚丙烯酰胺。TEMED四甲基乙二胺，催凝劑，加速AP催化作用。十二烷基
聚丙烯酰氨凝膠電泳實驗所需設備介紹
1、直流電源如果一次進行電泳的管數在20管以內可以用最大電流300毫安的整流器（硅或硒整流器），調壓范圍0-300V。2、電泳裝置包括二個緩沖液槽和電泳管。液槽可以用玻璃或塑料制成，在底部鉆孔。插入電泳管，用有孔橡皮塞固定。電泳管選用孔徑均勻一致的玻璃管切制。長10厘米，內徑5毫米。脫色用玻璃管長1
聚丙烯酰氨凝膠電泳各主要成分的作用介紹
聚丙烯酰胺：丙烯酰胺與為蛋白質電泳提供載體，其凝固的好壞直接關系到電泳成功與否與促凝劑及環境密切相關；制膠緩沖液：濃縮膠選擇pH6.8，分離膠選擇pH8.8，選擇Tris－HCl系統。TEMED與AP：催化劑，催化單丙和雙丙聚合成聚丙烯酰胺。TEMED四甲基乙二胺，催凝劑，加速AP催化作用。十二烷基
聚丙烯酰氨凝膠電泳實驗的原理和操作方法
設備1、直流電源如果一次進行電泳的管數在20管以內可以用最大電流300毫安的整流器（硅或硒整流器），調壓范圍0-300V。2、電泳裝置包括二個緩沖液槽和電泳管。液槽可以用玻璃或塑料制成，在底部鉆孔。插入電泳管，用有孔橡皮塞固定。電泳管選用孔徑均勻一致的玻璃管切制。長10厘米，內徑5毫米。脫色用玻璃管
聚丙烯酰氨凝膠電泳人血清及其酒精分劃部分的凝膠電泳
采用上述條件我們進行了正常人血清的凝膠電泳。一般可以分成15-20條區帶。根據兩向電泳方法比較了紙電泳和凝膠電泳各區帶的相對關系。紙電泳上的a：區帶在凝膠電泳中可被分離成10條以上區帶。但紙電泳中d，區帶的一部分則與凝膠電泳中自蛋白區帶相重合。在正常人血清中后白蛋白（PA）、轉鐵蛋白（Tr）和觸珠蛋
聚丙烯酰氨凝膠電泳常見問題及解決方案
常見問題及解決方案問題原因解決方案①出現“微笑”形帶（兩邊翹起中間凹下）由于凝膠的中間部分凝固不均勻所致，多出現于較厚的凝膠中待其充分凝固再作后續實驗②出現“皺眉”形帶（兩邊向下中間鼓起）主要出現在蛋白質垂直電泳槽中，一般是兩板之間的底部間隙氣泡未排除干凈可在兩板間加入適量緩沖液，以排除氣泡③帶出現
聚丙烯酰氨凝膠電泳凝膠異常的原因分析和處理辦法
兩邊翹起中間凹下形成原因主要是由于凝膠的中間部分凝固不均勻所致，多出現于較厚的凝膠中。處理辦法：待其充分凝固再作后續實驗。兩邊向下中間鼓起形成原因主要出現在蛋白質垂直電泳槽中，一般是兩板之間的底部間隙氣泡未排除干凈。處理辦法：可在兩板間加入適量緩沖液，以排除氣泡。