DNA片段的瓊脂糖凝膠電泳原理和操作步驟
原 理瓊脂糖凝膠電泳是重組DNA研究中常用的技術，可用于分離，鑒定和純化DNA片段。不同大小、不同形狀和不同構象的DNA分子在相同的電泳條件下(如凝膠濃度、電流、電壓、緩沖液等)，有不同的遷移率，所以可通過電泳使其分離。凝膠中的DNA可與熒光染料溴化乙錠(EB)結合，在紫外燈下可看到熒光條帶，籍此可分析實驗結果。操作步驟：1. 將凝膠成形模具兩端用醫用膠布封好，水平放置，將選好的梳子放好，梳子底部與模具之間留1mm空間。2. 稱取DNA電泳用瓊脂糖0.8g放入250ml的三角燒瓶中，加入100ml 1×TAE緩沖液，混勻后，將燒瓶置于電爐上，加熱煮沸，直至瓊脂糖完全溶解。3. 關閉電爐，取下三角燒瓶，將其置室溫下冷卻至70℃左右(手握燒瓶可以耐受)，再加入溴化乙錠(10mg/ml)5μl，混勻后，即將凝膠溶液倒入膠板鋪板。本實驗所用制膠板約需膠液100ml。4. 室溫下待凝膠完全凝固，需時約30分鐘，揭去二端膠布，拔出梳齒，將膠......閱讀全文
DNA片段的回收實驗
樹脂回收法 微量柱法 液氮凍融法 常規方法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方法特別適合于PCR片段的回收，具有純度高、操作簡潔等特點，經此方法
DNA片段的回收實驗
實驗方法原理 本方法特別適合于PCR片段的回收，具有純度高、操作簡潔等特點，經此方法回收的片段可有效的用于重組載體構建。通過15分鐘的純化過程，PCR產物即能被有效地從含引物二聚體、非特異性擴增引物片斷等混合物中分離出來，成為高度無鹽的、不含其他大分子成分的純化片斷。在較寬的分子量范圍內有較高的回收
DNA片段回收與純化
????質粒、噬菌體等經酶切，電泳；PCR產物經電泳后，常常需要對一些DNA電泳片段進行回收和純化，用于亞克隆、探針標記等。DNA回收和純化常用方法有壓碎法、低融點瓊脂糖法、凍融法等，也有現成的試劑盒供應。一、凍融法1.??紫外燈下仔細切下含待回收DNA的膠條，將切下的膠條（小于0.6g）搗碎，置于
DNA片段的制備方法
常用以下方法獲得DNA片段：①用限制性核酸內切酶將高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超聲波)取得DNA隨機片段；③在已知蛋白質的氨基酸順序情況下，用人工方法合成對應的基因片段；④從mRNA反轉錄產生cDNA。
DNA片段的連接技術
一、目的與原理DNA酶切片段的聯接是兩DNA片段相鄰的5‘磷酸和3’羥基間可有連接酶催化形成磷酸二酯鍵，這個連接反應在體外一般都有大腸桿菌DNA連接酶和T4DNA連接酶催化，但是分子生物學試驗中主要采用T4DNA連接酶，因該酶在正常條件下，即能完成連接反應。本實驗擬通過T4DNA連接酶對酶切片斷的連
DNA片段探針的應用實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 雜交液洗膜液儀器、耗材 注射器超聲儀水浴鍋實驗步驟 1. ?用5~20 ml 雜交液Ⅰ依次浸泡10~20張硝酸纖維素濾膜。濾膜裝入雜交袋中，加入足夠的雜交液，密封后42℃預雜交1 h。?2. ?往帶螺蓋的試管中，加入放射性探針和2 mg 超聲波處理的鯡魚精DNA，煮沸1
DNA片段的亞克隆實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 CIPdNTPDNA聚合酶T4聚合酶DTTATP儀器、耗材 水浴鍋電泳儀培養箱實驗步驟 1. ?在20 μl 反應體積內用合適的酶完全消化DNA。75℃加熱15 min，滅活酶。如若無需進一步的酶促處理，接歩驟6。2. ?如果5’磷酸需要去除，加入2 μl 10×CIP
DNA片段的亞克隆實驗
基本方案 凝膠塊中DNA連接 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
微量柱法純化DNA片段
實驗概要目的DNA片段的回收技術是重組DNA中的關鍵技術，回收是指從電泳介質中純化出目的片斷。目前待回收的片斷主要有酶切片斷和各種PCR片斷；回收的介質主要有瓊脂糖和PAGE；回收的方法主要有樹脂回收、微量柱回收、玻璃奶回收、液氮凍凍融回收及透析袋大量回收等，下面分別介紹樹脂、微量柱及液氮凍凍融回收
PCR擴增分離目的DNA片段
一、目的了解多聚合酶鏈反應DNA 擴增技術的基本原理和實驗應用，掌握PCR反應基本技術。二、原理PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈式反應是1986 年由Kallis Mullis 發現。這項技術已廣泛地應用于分子生物學各個領域，它不僅可用于基因分離克隆和核酸序列分
凍融法回收DNA片段
凍融法回收DNA片段可用于：（1）獲取純化的DNA片段；（2）回收PCR產物。實驗方法原理凍融法是指采用反復冷凍與融化時由于細胞中形成了冰晶及剩余液體中鹽濃度的增高可以使細胞破裂。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜采用此法。?實驗材料DNA膠條試劑、試劑盒Tris-HCl飽和酚
DNA小片段的純化回收
DNA 電泳小于100bp的片斷通常在電泳時就比較難觀察分辨，需要用分辨率很高的瓊脂糖或者丙烯酰胺凝膠。比如Cambrex的NuSieve 3:1或者GTG，或者是大名鼎鼎的MetaPhor瓊脂糖。所以實際上對于小片斷，可以分為兩種情況：一個是真的要回收電泳中特別小的片斷，這種情況我們前面有提到，比
DNA片段探針的應用實驗
甲酰胺法 水溶液中雜交 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
凍融法回收DNA片段
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 凍融法是指采用反復冷凍與融化時由于細胞中形成了冰晶及剩余液體中鹽濃度的增高可以使細胞破裂。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜采用此法。? 實驗材料
DNA的酶切與連接——DNA片段連接
實驗方法原理核酸片段可以通過連接酶的作用連接起來而獲得重組分子。實驗材料λDNA EcoT14I：由11條DNA片段組成試劑、試劑盒T4 DNA連接酶及其配套的10×連接緩沖液 0.5×TBE電泳緩沖液 6×Loading Buffer Goldview 瓊脂糖儀器、耗材電泳儀 水浴鍋 移液器 微波
染色體DNA的片段化
實驗概要瓊脂糖(agarose)或聚丙烯酰胺(PAGE)電泳是分離、鑒定和純化DNA的標準方法。瓊脂糖凝膠的分辨率比聚丙烯酰胺電泳低，但分離范圍廣，可以分離200 bp一50 kb的DNA。細胞凋亡時染色體從核小體間斷裂形成大小為180-200bp整數倍的片段，在瓊脂糖凝膠中電泳后可呈現出規
DNA片段的回收實驗——常規方法
實驗材料NA片段試劑、試劑盒純化試劑盒異丙醇儀器、耗材離心機電泳儀電泳槽取液器微量真空裝置抽濾裝置實驗步驟1. ?PAGE電泳，如EB染色的則在紫外燈下切下目的片斷，如齦染或其他非放染色的則在關下切下目的片斷。2. ?用少量脫緩沖液I將目的片斷膠條洗至一Eppendorf管中，用玻棒將凝膠搗碎，用1
長片段DNA如何設計測序引物
如果是測序引物的話，因為目前的測序技術一端只能到800bp左右，所以一對引物差不多能測1.5kb左右的片段，超出這個范圍測出來的也不太可信了。所以如果你的目的片段在這個范圍內，設計1對引物就行了，如果超出這個范圍，比如說有6k左右，那就要設計四對引物，設計方法跟常規的一樣，只是把握這個間隔就好了。1
大片段DNA測序(>50KB)
大片段DNA的測序: 通過鳥槍法 (Shot Gun Sequencing) 測序?鳥槍法測序的操作方法1. 用限制酶切下目的片段的大片段Insert DNA, 并用Agarose凝膠電泳進行回收。2. 對回收的大片段DNA用物理方法 (如超聲波等) 進行切斷處理，然后用T4 DNA Polymer
DNA片段的亞克隆實驗——凝膠塊中DNA連接
實驗材料DNA試劑、試劑盒TAE瓊脂糖儀器、耗材電泳儀離心機實驗步驟1. ?重復基本方案中的步驟1~5。?2. ?在高質量的低融點膠中分離久DNA（0.7%，TAE緩沖液），切下體積盡可能小的所需DNA條帶（20~50 μl ）至小離心管中。3. ?在70℃融化低融點膠10 min 以上，每個連接反
深圳羅湖首次截獲人體組織DNA片段
深圳市出入境檢驗檢疫局羅湖局日前在一名旅客攜帶入境行李中截獲人體組織DNA片段，這是羅湖口岸首次截獲該類物品。 據相關工作人員介紹，當日在該旅客行李中發現一批離心管樣品，共36支。經查，該批樣品為人體組織DNA片段，用離心管裝載并包裹于牛皮紙盒中放置于填充干冰的保溫箱內，離心管及紙盒外無
PCR擴增樣本DNA的HLA基因片段
一、PCR擴增體系1. 1.0uM 引物2. 300ng待測樣本基因組DNA3. 2.0U Taq多聚酶4. 200uM 各種dNTP5. 用1 X PCR緩沖液（10mM Tris-HCl，pH8.3，50mM KCl，1.5mM MgCl2，0.01%明膠）調至總體積100ul，并用50ul礦物
DNA片段的回收實驗——樹脂回收法
目的DNA片段的回收技術是重組DNA中的關鍵技術，回收是指從電泳介質中純化出目的片斷。實驗方法原理本方法特別適合于PCR片段的回收，具有純度高、操作簡潔等特點，經此方法回收的片段可有效的用于重組載體構建。通過15分鐘的純化過程，PCR產物即能被有效地從含引物二聚體、非特異性擴增引物片斷等混合物中分離
分子克隆化DNA片段的制備介紹
常用以下方法獲得DNA片段： ①用限制性核酸內切酶將高分子量DNA切成一定大小的DNA片段； ②用物理方法(如超聲波)取得DNA隨機片段； ③在已知蛋白質的氨基酸順序情況下，用人工方法合成對應的基因片段； ④從mRNA反轉錄產生cDNA。
體外連接DNA片段的具體方式介紹
平末端DNA片段的連接常用的平末端DNA片段連接法，主要有同聚物加尾法、銜接物連接法及接頭連接法。同聚物加尾法這種方法的核心部分是，利用末端脫氧核苷酸轉移酶轉移核苷酸的特殊功能。末端脫氧核苷酸轉移酶是從動物組織中分離出來的一種異常的DNA聚合酶，它能夠將核苷酸(通過脫氧核苷三磷酸前體)加到DNA分子
DNA片段的回收實驗——微量柱法
實驗材料DNA片段試劑、試劑盒純化試劑盒異丙醇儀器、耗材離心機電泳儀電泳槽取液器微量真空裝置抽濾裝置實驗步驟1. ?紫外燈下從膠上切下目的片段，放入一Epphendof管中。2. ?離心管在－20℃冷卻5~10分鐘。3. ?將微量柱下套上一Epphendof管，將冷卻的膠條裝進微量柱中，4℃12 0
體外連接DNA片段的方式有哪些？
第一種方法是，用DNA連接酶連接具有互補粘性末端的DNA片段;第二種方法是，用T4DNA連接酶直接將平末端的DNA片段連接起來，或是用末端脫氧核苷酸轉移酶給具平末端的DNA片段加上poly(dA)-poly(dT)尾巴之后，再用DNA連接酶將它們連接起來;第三種方法是，先在DNA片段末端加上化學合成
體外連接DNA片段的具體方式介紹
平末端DNA片段的連接常用的平末端DNA片段連接法，主要有同聚物加尾法、銜接物連接法及接頭連接法。同聚物加尾法這種方法的核心部分是，利用末端脫氧核苷酸轉移酶轉移核苷酸的特殊功能。末端脫氧核苷酸轉移酶是從動物組織中分離出來的一種異常的DNA聚合酶，它能夠將核苷酸(通過脫氧核苷三磷酸前體)加到DNA分子
如何提高DNA片段的轉化率
一、克隆分析原理克隆分析用于將DNA片段從一個載體（質粒、黏粒或噬菌體）轉移到另一個載體上。它們通常用于構建表達系統，或是將DNA片段轉移到特殊的載體上以制備雜交探針或是制備測序用的單鏈模板。典型的載體含有三個必要的元件：一個抗生素抗性標記、一個復制起點（以便選擇轉化了的大腸桿菌宿主）以及一個或多個
DNA酶解及DNA片段瓊脂糖凝膠電泳
【目的要求】1.掌握限制性核酸內切酶概念、特點及作用原理，DNA酶解技術的應用2.掌握瓊脂糖凝膠電泳分離DNA片段原理及其操作3.熟悉電泳基本原理及其影響因素【教學內容】1．限制性核酸內切酶概念、特點及作用原理，DNA酶解技術的應用2．DNA片段瓊脂糖凝膠電泳3．電泳概念、分類、應用、基本原理及其影