GFP(綠色熒光蛋白基因)的免疫印跡2
第二部分：免疫印跡染色[儀器、材料與試劑](一)儀器與器具1．電泳儀(要求為大電流低電壓)2．電泳轉移槽及轉移夾3．水平搖床4．小塑料盒5．鑷子6．搪瓷盤(二)材料1．醋酸纖維膜2．濾紙3．一次性塑料手套(三)試劑1．轉移電泳緩沖液25mmo1／L Tris，192mmo1／L 甘氨酸，20％甲醇，pH 8.36.05gTris + 28．83g Gly + 400mL甲醇，用dH20溶解并定容至2L2．PBS貯存液(10xPBS)0.2mo1／L 磷酸緩沖液，PH＝7.4，含8.7％ 的NaCl3．PBS緩沖液：10xPBS貯存液用重蒸水10倍稀釋4．封閉液：PBS + 5％脫脂奶粉5．漂洗液：PBS + 0.2％Triton X-1006．麗春紅染色液：4％三氯醋酸，1％麗春紅7．一抗：兔抗GFP血清，用PBS適稀釋50-100倍8．辣根過氧化物酶標記的蛋白A (HRP-pA)9．DAB顯色液：DAB 1mg，溶于5mL的5......閱讀全文
GFP(綠色熒光蛋白基因)的免疫印跡2
第二部分：免疫印跡染色[儀器、材料與試劑](一)儀器與器具1．電泳儀(要求為大電流低電壓)2．電泳轉移槽及轉移夾3．水平搖床4．小塑料盒5．鑷子6．搪瓷盤(二)材料1．醋酸纖維膜2．濾紙3．一次性塑料手套(三)試劑1．轉移電泳緩沖液25mmo1／L Tris，192mmo1／L 甘氨酸，20％甲醇，
GFP(綠色熒光蛋白基因)的免疫印跡1
[實驗原理]免疫印跡（Western blotting 或 Immunoblotting）一般由凝膠電泳、樣品的印跡和免疫學檢測三個部分組成。第一步是做SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，使待測樣品中的蛋白質按分子量大小在凝膠中分成帶。第二步把凝膠中已分成條帶的蛋白質轉移到一種固相支持物上，用得最多的材料
T克隆綠色熒光蛋白（GFP）基因實驗
【原理】經TaqDNA聚合酶擴增后的PCR產物末端都帶有單個A。正是基于這一原理，pGEM-T質粒經EcoRV切成平端后，在開口端加上一個T制成T載體，一方面避免了自身環化，另一方面由于T-A互補，從而提高了T載體與PCR產物之間的連接效率。由于T-A克隆只需純化PCR產物，因而操作較為簡便。pGE
綠色熒光蛋白GFP性質
GFP熒光極其穩定，在激發光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比熒光素（fluorescein）強，特別在450～490nm藍光波長下更穩定。 GFP需要在氧化狀態下產生熒光，強還原劑能使GFP轉變為非熒光形式，但一旦重新暴露在空氣或氧氣中，GFP熒光便立即得到恢復。而
綠色熒光蛋白（GFP）的應用
骨架和細胞分裂 Kevin Sullivan's 實驗室 酵母菌內SPB 和微管動力學 酵母菌中肌動蛋白的動力 果蠅中MEI-S332蛋白 果蠅有絲分裂和mRNA運輸 網丙菌屬細胞骨架 RNA剪切因子的核內運輸 網丙菌屬的趨化作用 網丙菌屬中細胞骨架動力和細胞運動 核
綠色熒光蛋白(GFP)標記亞細胞定位
一、原理利用綠色熒光蛋白(GFP)來示蹤胞內蛋白的技術。利用GFP融合蛋白技術來進行活細胞定位研究是目前較為通行的一種方法，在光鏡水平進行研究，不需要制樣，沒有非特異性標記的影響。并且GFP的分子量為27kD，經激光掃描共聚集顯微鏡激光照射后，可產生一種綠色熒光，從而對蛋白質進行精確定位。激光掃描共
GFP綠色熒光蛋白的檢測方法有哪些
檢測方法：1、實驗準備? Modulus單管型多功能檢測儀? Blue熒光模塊(P/N 9200-040)? 微量適配器(P/N 9200-928)? 純化的rAcGFP1蛋白（Clontech，NO.632502）? 200ul加樣器與20ul加樣器? TE Buffer (10 mM Tris-
GFP綠色熒光蛋白的檢測方法有哪些
檢測方法：1、實驗準備? Modulus單管型多功能檢測儀? Blue熒光模塊(P/N 9200-040)? 微量適配器(P/N 9200-928)? 純化的rAcGFP1蛋白（Clontech，NO.632502）? 200ul加樣器與20ul加樣器? TE Buffer (10 mM Tris-
GFP綠色熒光蛋白的檢測方法有哪些？
檢測方法：1、實驗準備? Modulus單管型多功能檢測儀? Blue熒光模塊(P/N 9200-040)? 微量適配器(P/N 9200-928)? 純化的rAcGFP1蛋白（Clontech，NO.632502）? 200ul加樣器與20ul加樣器? TE Buffer (10 mM Tris-
熒光素酶報告基因與綠色熒光蛋白（GFP）有什么區別
只能先就標題的問題談談我的認識。后面的追問我了解得也不全面。1。兩者的結果檢測方法不同。gfp綠色熒光蛋白，很直觀，能夠直接檢到熒光，在普通的細胞培養條件下都能夠觀察到，對細胞的生命活動和其他并行的實驗安排影響很小。熒光素酶報告基因使用起來比gfp多一個步驟，因為熒光素酶是個酶，不發熒光，發熒光的是
熒光素酶報告基因與綠色熒光蛋白（GFP）有什么區別
1。兩者的結果檢測方法不同。gfp綠色熒光蛋白，很直觀，能夠直接檢到熒光，在普通的細胞培養條件下都能夠觀察到，對細胞的生命活動和其他并行的實驗安排影響很小。熒光素酶報告基因使用起來比gfp多一個步驟，因為熒光素酶是個酶，不發熒光，發熒光的是它的底物，熒光素。熒光素在細胞里（要說螢火蟲細胞我就不知道了
活體GFP綠色熒光成像系統
? 系統提供動物活體綠色熒光蛋白的實時觀察與成像等一系列的熒光檢測。能夠應用在像深度腫瘤，大動物等活體腫瘤追蹤觀察成像研究。??? 該設備是一個高靈敏度的圖像成像工作系統，主要利用特定波長的激光進行激發后，通過高靈敏度的致冷CCD進行實時檢測后，獲得所需的各類 特性的圖像，有利于進一步的分析作用?。
綠色熒光蛋白（GFP）在科學研究上的應用
綠色熒光蛋白(greenfluorescentprotein，簡稱GFP)bs-2194P是一種能在藍色波長光線激發下發出熒光的特殊蛋白質，正是這種神奇的性質，讓它成為當今生物化學領域最有力的工具之一，被稱為“生物北斗”。GFP在科學研究上有著驚人的用途，因為它能夠使我們直接看到細胞內部的運動、分布
高校實驗室如何去觀察綠色熒光蛋白GFP？
綠色熒光蛋白是一類存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔腸動物體內的生物發光蛋白，當受到紫外或藍光激發時，發射綠色熒光。其特點在于：它產生熒光無需底物或輔因子，發色團是其蛋白質一級序列固有的來源于水母的氨基酸殘基組成。水母的綠色熒光蛋白很穩定，無種屬限制，已在多種動植物細胞中表達成功并產生熒光。GFP 的熒
GFP：熒光蛋白的起源
作者：?羅輯科學?? ? ? ?綠色熒光蛋白(簡稱GFP)，是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質，從藍光到紫外線都能使其激發，發出綠色熒光。GFP的熒光非常穩定，在激發光照射下，其抗光漂白能力比熒光素強很多。因此GFP及其變種被廣泛地用作分子標記；此外，GFP還被用作砷和一些重金屬的傳感器。? ?
GFP：熒光蛋白的起源
? ? ?綠色熒光蛋白(簡稱GFP)，是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質，從藍光到紫外線都能使其激發，發出綠色熒光。GFP的熒光非常穩定，在激發光照射下，其抗光漂白能力比熒光素強很多。因此GFP及其變種被廣泛地用作分子標記；此外，GFP還被用作砷和一些重金屬的傳感器。? ? ? ?1962年，下村
GFP：熒光蛋白的起源
綠色熒光蛋白(簡稱GFP)，是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質，從藍光到紫外線都能使其激發，發出綠色熒光。GFP的熒光非常穩定，在激發光照射下，其抗光漂白能力比熒光素強很多。因此GFP及其變種被廣泛地用作分子標記；此外，GFP還被用作砷和一些重金屬的傳感器。 1962年，下村脩和約翰遜在一
GFP抗體—綠色熒光蛋白的單克隆和多克隆標簽抗體
GFP（Green Fluorescent Protein，綠色螢光蛋白）是由下村脩等人在1962年在一種學名Aequorea victoria的水母中發現。其基因所產生的蛋白質，在藍色波長范圍的光線激發下，會發出綠色螢光。GFP標簽可位于蛋白質的C端或N端，該系統已廣泛 應用于各種細胞
綠色熒光蛋白融合技術在激素類興奮劑檢測中的應用
實驗方法原理重組人生長激素（rhGH）與胰島素生長因子-1（ICF-Ⅰ）是目前運動員濫用嚴而又難以檢測的內源性激素類興奮劑。以IGF-Ⅰ作為目標分析物，利用分子生物學方法構建綠色熒光蛋白（GFP）與IGF-Ⅰ的融合蛋白GFP-IGF。GFP是目前應用廣泛的一種生物報告分子，具有穩定、無毒害、無需底物
綠色熒光蛋白基因與紅色熒光蛋白基因是同源的嗎
綠色熒光蛋白基因與紅色熒光蛋白基因是同源的（1）在該實驗中，綠色熒光蛋白基因是目的基因．（2）③是將目的基因導入受體細胞的過程，當受體細胞是動物細胞時，采用最多也最有效的方法是顯微注射技術．（3）GFP基因可以作為標記基因，標記基因的作用是鑒定受體細胞中是否含有目的基因．（4）動物細胞培養時，其培養
綠色熒光蛋白的應用
由于熒光蛋白能穩定在后代遺傳，并且能根據啟動子特異性地表達，在需要定量或其他實驗中慢慢取代了傳統的化學染料。更多地，熒光蛋白被改造成了不同的新工具，既提供了解決問題的新思路，也可能帶來更多有價值的新問題。
綠色熒光蛋白簡介
綠色螢光蛋白（Green fluorescent protein；簡稱GFP），由下村脩等人于1962年在維多利亞多管發光水母中發現，其基因所產生的蛋白質，在藍色波長范圍的光線激發下，會發出綠色螢光，整個發光的過程中還需要冷光蛋白質水母素的幫助，冷光蛋白質與鈣離子（Ca2+）可產生交互作用。2008
蛋白質免疫印跡實驗
蛋白質免疫印跡實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 操作流程 (1)制備與凝膠大小一致的硝酸纖維素膜一張，吸水濾紙 2 張
蛋白質免疫印跡實驗
這是一個建立在 B urnette 實驗方案基礎上的實驗流程，小于 80k D a 的蛋白質的轉移效果很好并且結果穩定, 重復性好。應用這種膜轉移方法，我們利用多克隆抗體在下面的樣本中檢測目的蛋白：哺乳動物細胞和細菌溶解產物、細胞培養上清、組織提取物以及組織液。雖然下列實驗條件是根據我們自己的實驗需
蛋白質免疫印跡實驗
實驗步驟 操作流程(1)制備與凝膠大小一致的硝酸纖維素膜一張，吸水濾紙 2 張 (Whatman 3 MM)。(2) 將凝膠在轉印緩沖液中浸泡 30m in，將轉移膜、濾紙和海綿墊也在同樣的緩沖液浸濕。(3) 安裝轉印「夾心三明治」。將凝膠放置在玻璃平板上，然后將一張浸濕的濾紙放在凝膠上，如
蛋白質免疫印跡技術
實驗概要免疫印跡是利用聚丙烯酰胺凝膠電泳來檢測樣品或提取物中某種特定蛋白的方法。聚丙烯酰胺凝膠緊貼著膜放置，在電流的作用下蛋白質從凝膠遷移到膜上并且被固定，常用的膜是硝酸纖維素或 PVDF（聚偏乙烯氟化物）。膜是凝膠蛋白質的復制品，然后可以與抗體結合后進行染色。實驗步驟1.?? 樣品準備1)?? 抽
GFP－和熒光共振能量轉移技術測定蛋白質相互作用實驗－2
16. 標記反應以后，采用下述公式計算標記率：? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?Aλ X M / [ ( A280-? X Aλ ) X ελ ]式中 Aλ是染料在其最大吸收波長λ處的吸收度，A280 是蛋白質在 280nm 的吸收度，M 是以
綠色熒光蛋白的發現過程
1994年，華裔美國科學家錢永健（Roger Yonchien Tsien）開始改造GFP，有多項發現。世界上用的大多數是錢永健實驗室改造后的變種，有的熒光更強，有的黃色、藍色，有的可激活、可變色。到一些不常用做研究模式的生物體內找有顏色的蛋白成為一些人的愛好，現象正如當年在嗜熱生物中找到以后應用廣
綠色熒光蛋白的基本結構
野生型綠色熒光蛋白，最開始是 238 個氨基酸的肽鏈，約 25KDa。然后按一定規則，11 條β-折疊在外周圍成圓柱狀的柵欄；圓柱中，α-螺旋把發色團固定在幾乎正中心處。發色圖被圍在中心，能避免偶極化的水分子、順磁化的氧分子或者順反異構作用與發色團，致使熒光猝滅。熒光是熒光蛋白最特別的特點，而其中的