蛋白質凝膠染色法實驗（二）
關鍵步驟通常如下所述。(1) 固定凝膠，以固定蛋白質條帶，并移除凝膠中的干擾物質, 如 S D S 、緩沖液和鹽，這些物質會結合銀并造成背景染色。(2) 用能夠結合蛋白質并提高銀結合能力的物質, 或是能夠干擾剩余未結合的銀造成的背景染色的物質來孵育凝膠。總之，這些各種各樣的方法都和敏化作用有關。(3) 銀離子浸泡處理凝膠。(4) 結合的銀離子還原成不溶且可見的金屬銀，便出現了有色度的銀染信號。(5) 終止顯色過程，以防止凝膠介質中的背景染色遮掩住蛋白質條帶。后兩個步驟對時間的依賴導致了技術的復雜性, 步驟 (2)?(4) 中幾次需要一定時間的清洗步驟也是如此。銀染法在銀試劑和相應顯影條件的基礎上明顯存在區別。堿性法將堿性環境下一種銀的二元胺復合物作為銀試劑, 并在酸性甲醛溶液中顯影; 酸性法將弱酸性硝酸銀作為銀試 劑 ，并在堿性甲酸溶液中顯影。酸性染色法最近變得更受歡迎，因為它相對于堿性法降低了成本，并且背景染色也更容易......閱讀全文
蛋白質凝膠染色法實驗（二）
關鍵步驟通常如下所述。(1) 固定凝膠，以固定蛋白質條帶，并移除凝膠中的干擾物質, 如 S D S 、緩沖液和鹽，這些物質會結合銀并造成背景染色。(2) 用能夠結合蛋白質并提高銀結合能力的物質, 或是能夠干擾剩余未結合的銀造成的背景染色的物質來孵育凝膠。總之，這些各種各樣的方法都和敏化作用有關。(3
蛋白質凝膠染色法實驗
實驗步驟總蛋白質的檢測1. 總蛋白質色度法染色簡便的目視檢測、相對簡單的使用及廣大熟悉方法的用戶基礎群，使得考馬斯亮藍(C B B )—直是最普遍使用的總蛋白質凝膠染色劑。如需要比考馬斯亮藍染色更高的檢測敏感度，那么銀染法是可選擇的色度方法。如果需要對切下的蛋白質進行質譜分析，則首選不會引入共價蛋白
蛋白質凝膠染色法實驗
實驗步驟 總蛋白質的檢測 1. 總蛋白質色度法染色 簡便的目視檢測、相對簡單的使用及廣大熟悉方法的用戶基礎群，使得考馬斯亮藍(C B B )—直是最普遍使用的總蛋白質凝膠染色劑。如需要比考馬斯亮藍染色更高的檢測敏感度，那么銀
蛋白質凝膠染色法實驗3
糖蛋白的檢測1. 通用糖蛋白檢測糖 基 化 是 真 核 細 胞 中 最 常 見 的 蛋 白 質 翻 譯 后 修 飾 。寡 糖 通 常 連 接 于 天 冬 酰 胺 側 鏈(iV-連 接 糖 基 化 ) 或 絲 氨 酸 和 蘇 氨 酸 羥 基 側 鏈 (〇 連 接 糖 基 化）。凝 膠 中 蛋 白 質
蛋白質凝膠染色法實驗（三）
尼羅紅蛋白質凝膠染色劑尼羅紅 (Nile red) 是一種吩囉嗪酮類染料, 當其從水轉入到疏水環境，如 S D S 微粒或蛋白質-S D S 復合物中時，便顯示出強烈的熒光增強作用。尼 羅 紅 不 會 與 S D S 單體發生顯著作用》利用這一特點開發出了一種適合 S D S 凝膠的迅速
蛋白質凝膠染色法實驗（一）
總蛋白質的檢測1. 總蛋白質色度法染色簡便的目視檢測、相對簡單的使用及廣大熟悉方法的用戶基礎群，使得考馬斯亮藍(C B B )—直是最普遍使用的總蛋白質凝膠染色劑。如需要比考馬斯亮藍染色更高的檢測敏感度，那么銀染法是可選擇的色度方法。如果需要對切下的蛋白質進行質譜分析，則首選不會引入共價蛋白
蛋白質凝膠染色法實驗2
2. 總蛋白質熒光法染色熒光染色法結合了檢測靈敏度 (可與銀染法媲美) 與染色流程簡便性 (與考馬斯亮藍染 色 或 Z n?2+?反染法相同），且其線性定量范圍較比色法大 10?100 倍 。檢測依賴于儀器,需要一個單色激發光源、能將波長較長的發射光從波長較短 (也更亮）的激發光中分離出來的選擇性光
蛋白質凝膠染色法實驗（四）
(3) 用 10% 〇 //V ) 甲醇、7 % ( V /V ) 乙酸進行簡單的凝膠脫色。利用基于微波爐的方案可以加快染色過程的進行。 SYPRO R uby 蛋白質凝膠染料具有相對較高的消光系數和量子產率，因此它十分亮眼, 化學穩定性和光穩定性都很高。光譜的激發可借助紫外線或是藍光光源;
蛋白質凝膠染色法實驗（五）
磷 蛋 白 的 檢 測作為基本的細胞信號機制, 指定氨基酸殘基的可逆磷酸化作用的重要性已無需爭辯。當前磷蛋白染料具有受ZL保護的構型，即磷酸基結合部分共價連接于熒光團。檢測的方式是選擇性結合磷酸化的氨基酸，但是沒有熒光增強作用。從某種程度上講, 許多可溶的熒光復合物都可作為總蛋白質染色劑
蛋白質凝膠過濾層析實驗
凝膠過濾層析（也叫分子篩）是利用具有多孔網狀結構的顆粒的分子篩作用，根據被分離樣品中各組分相對分子質量大小的差異進行分離的技術。 凝膠過濾層析（GF）法又稱為排阻層析或分子篩方法，主要是根據蛋白質的大小和形狀，即蛋白質的質量進行分離和純化。層析柱中的填料是惰性的多孔網狀結構物質，多是交聯的聚糖
凝膠中蛋白質的洗脫實驗
SDS-PAGE 在確定樣品中多肽的數量和大小方面已被證明是極有用的分析方法。若能熟練運用的話, 它還具有分離許多大小不一的單體蛋白質的能力。許多人在凝膠電泳應用的早期希望可以利用凝膠的高分辨率特性來獲得小量的純凈蛋白質。實驗步驟一、通過擴散來洗脫凝膠中的蛋白質將 SDS 從蛋白質中移除的早期方法由
凝膠中蛋白質的洗脫實驗
一、通過擴散來洗脫凝膠中的蛋白質將 SDS 從蛋白質中移除的早期方法由 Weber 和 Kutter(1971) 發表，但當用于微量的蛋白質時，這個方法既麻煩又會造成大部分蛋白質的損失。這一領域較多的早期方法已經發表（HagerandBurgess,1980)，但卻需要重新討論 (butbear
凝膠中蛋白質的洗脫實驗
實驗步驟 一、通過擴散來洗脫凝膠中的蛋白質 將 SDS 從蛋白質中移除的早期方法由 Weber 和 Kutter(1971) 發表，但當用于微量的蛋白質時，這個方法既麻煩又會造成大部分蛋白質的損失。 這一領域較多的早期方法已經發
蛋白質技術專題：凝膠過濾層析實驗
凝膠過濾層析（gel filtration chromatography）法又稱排阻層析或分子篩方法，主要是根據蛋白質的大小和形狀，即蛋白質的質量進行分離和純化。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網狀結構物質，多是交聯的聚糖類物質，使蛋白質混合物中的物質按分子大小的不同進行分離。實驗方法蛋白質的凝膠過濾
蛋白質的分離實驗——凝膠層析法
蛋白質分離純化是用生物工程下游技術從混合物之當中分離純化出所需要得目的蛋白質的方法。應用于（1） 化學物質的分離、提純、濃縮;（2）染料、染料中間體的濃縮及脫鹽（3）超細粉體生產過程中的產品回收;（4）生產廢水中有用物質的提純、回用;（5）海洋生物提取物的濃縮、提純（6）氨基酸、蛋白質的濃縮、提純。
變性梯度凝膠電泳實驗（二）
實驗過程1、將兩塊玻璃對齊放入電泳支架上（帶缺口的玻璃缺口朝上并位于內側），旋緊固定螺絲并夾好夾子。注入去離子水，檢測是否漏水后倒出去離子水。2、配制高變性劑濃度凝膠溶液和低變性劑濃度凝膠溶液，在灌膠前加入適量的10%過硫酸銨溶液和TEMED作為聚合引發劑和催化劑并充分混勻。關閉梯度混合儀的兩個閥門
凝膠遷移實驗系列二實驗操作方法
1.探針的標記：（1） 如下設置探針標記的反應體系：待標記探針 （1.75pmol/微升） ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?2微升T4 Polynucleotide Kinase Buffer （10X） ? ? ? 1微升Nuclease-Free Water ? ? ? ? ? ?
凝膠阻滯實驗分析RNA蛋白質作用常數實驗
凝膠阻滯實驗（gel reiardadon assay，又稱為 mobthty shift assay）方法簡單、靈敏，可以定量的特性使它在研究轉錄和基因調控中廣泛的應用。目前通常用于 RNA ( 或 DNA ) 結合蛋白的純化，確定一種已知或可能的 RNA 結合蛋白所識別的序列，建立反應常數（如親
凝膠阻滯實驗分析RNA蛋白質作用常數實驗
實驗方法原理 凝膠阻滯實驗（gel reiardadon assay，又稱為 mobthty shift assay）方法簡單、靈敏，可以定量的特性使它在研究轉錄和基因調控中廣泛的應用。目前通常用于 RNA ( 或 DNA ) 結合蛋白的純化，確定一種已知或可能的 RNA 結合蛋白所識別
凝膠阻滯實驗分析RNA蛋白質作用常數實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 凝膠阻滯實驗（gel reiardadon assay，又稱為 mobthty shift assay）方法簡單、靈敏，可以定量的特性使它在研究轉錄和基因調控中廣泛的應用。目前通常用于 RNA ( 或 DNA ) 結合蛋
蛋白質的單向SDS凝膠電泳實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 Tris·ClSDS儀器、耗材 電泳儀離心機真空泵實驗步驟 1. ?按廠商的使用指南用兩塊干凈的玻璃平板和0.75 mm 墊片組裝電泳裝置中的玻璃平板夾層，并固定在灌膠支架上2. ?配置分離膠液體并脫氣，然后加10%的過硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌混勻。3. ?用一根巴
蛋白質的單向SDS凝膠電泳實驗
Laemmli凝膠電泳法 無尿素條件下用Tris緩沖液分離多肽 連續SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 超薄凝膠的灌制和電泳 均一濃度的微型凝膠電泳 制備多塊梯度膠 ? ? ?
蛋白質印跡實驗——從SDS凝膠上轉移蛋白質
蛋白質印跡（protein blotting ) 也稱為電泳轉移（electropheretic transfer)，即把從電泳或層析分離的蛋白轉移到固定基質上的過程。固定基質通常是一些紙或膜。最通常的蛋白質印跡是將從聚丙烯酰胺凝膠電泳上分離的蛋白質分子轉移到硝化纖維素膜上。本實驗來源「蛋白質電泳實
蛋白質結合硫氫基染色法
血液和造血組織中各種細胞成份均可顯示陽性反應，被染成粉紅色（低濃度）至紫蘭（高濃度）的顏色沉淀。它定位于胞漿、胞核和粒細胞系統的特殊顆粒中。一般地說，胞漿的濃度大于胞核。 【臨床意義】 硫氫基（SH）在肌肉收縮、血液凝固、細胞通透性、激素的生成和活化以及許多酶的活性上都是很重要的，-SH基在
凝膠遷移實驗（EMSA）之二：實驗方法原理
凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通
蛋白質純度測定實驗（二）
方法制樣的方法根據所選用電泳方法的性質而定。讀者可參考本卷其他章節中有關非變性凝膠電泳和等電聚焦電泳的討論。最常用的 SDS 凝膠電泳是蛋白質純度檢測的「第一線」(front-line) 方法。由于通常純度評價是非定量的，因此不需要關心諸如極端大小分子的非線性遷移、蛋白質修飾造成的遷移異常以
蛋白質的單向SDS凝膠電泳實驗——Laemmli凝膠電泳法
電泳可用于分離復雜的蛋白質混合物，研究蛋白質的亞基組成以及證實蛋白質的均一性等，還能純化出蛋白質用于后續的研究工作。在聚丙烯酰胺凝膠電泳中，凝膠的孔徑，蛋白質的電荷、大小、性質等因素共同決定了蛋白質的電泳遷移率。實驗材料蛋白質試劑、試劑盒Tris·ClSDS儀器、耗材電泳儀離心機真空泵實驗步驟1.
二維凝膠的定量分析實驗（二）
4. 傳輸數據轉化為光密度傳輸的數據必須轉換成光密度（當然熒光染色不能做這種轉換）。在大多數的二維數據包中不需要用到這個。蛋白質濃度與光密度呈線性相關，而非傳輸值。光密度 (OD) 和傳輸值之間的關系如下：OD= - log (I/I0) 。由于這種關系不是直線，一個給定的傳輸增加值與不同的 O
免疫染色法檢定蛋白質
實驗概要轉印到紙上的蛋白質抗原，可與其專一性抗體結合，再以二次抗體-酶結合體(2nd Ab-HRP) 或Protein A-HRP 呈色；可在一群轉印色帶中，專一性地挑出目標蛋白質，是最有用的檢定工具。主要試劑1. 抗體溶液：可用傳統抗血清或單株抗體，其最適使用濃度，隨抗體效價不同而異，以下為一般適
免疫染色法檢定蛋白質
實驗概要轉印到紙上的蛋白質抗原，可與其專一性抗體結合，再以二次抗體-酶結合體(2nd Ab-HRP) 或Protein A-HRP 呈色；可在一群轉印色帶中，專一性地挑出目標蛋白質，是最有用的檢定工具。主要試劑1. 抗體溶液：可用傳統抗血清或單株抗體，其最適使用濃度，隨抗體效價不同而異，以下為一般適