使用串聯切向流過濾高效濃縮慢病毒載體
簡介VSV-G-假型自我滅活慢病毒載體是不可或缺的生物實驗工具之一，與之前的γ-逆轉錄病毒載體不同的是，慢病毒載體可轉導非分裂細胞，并可攜帶更多的轉基因盒，在細胞中的轉基因表達時間也更長，即可獲得更高的滴度，而其遺傳毒性相對較低。一般情況下產毒細胞上清液中的載體滴度足以轉導常規細胞系，但原代細胞較難轉導，需要進行載體濃縮以獲得較高濃度。此外，一些載體因整合了會降低滴度的遺傳元件，且大多數細胞類型也不耐受產毒細胞生長培養基或其分泌蛋白，所以濃縮及清洗是慢病毒載體使用的必要步驟。超速離心是病毒顆粒濃縮的常用方法之一，但其濃縮系數較低，每次處理量也偏小，且繁瑣的多步操作會降低病毒顆粒回收率。離心過濾是相對較簡單的濃縮方法，但過濾器本身會捕獲截留大量載體，造成損耗。相較而言，切向流過濾（TFF）操作簡單，損耗低，且可通過洗濾過程有效降低產毒細胞代謝物及分泌蛋白，但傳統的一步式TFF濃縮程度僅可達50-100倍，本實驗使用兩步TFF，成功......閱讀全文
使用串聯切向流過濾高效濃縮慢病毒載體
簡介VSV-G-假型自我滅活慢病毒載體是不可或缺的生物實驗工具之一，與之前的γ-逆轉錄病毒載體不同的是，慢病毒載體可轉導非分裂細胞，并可攜帶更多的轉基因盒，在細胞中的轉基因表達時間也更長，即可獲得更高的滴度，而其遺傳毒性相對較低。一般情況下產毒細胞上清液中的載體滴度足以轉導常規細胞系，但原代細胞較難
簡述慢病毒載體的載體質粒
載體質粒上HIV-1的順式序列通常包括兩端的LTR、剪切位點及包裝信號Ψ等。此外，研究表明，gag基因5′端的序列可提高載體RNA的包裝效率；Rev蛋白需要與Rev反應元件(RRE)相作用，將未剪切的載體轉錄產物從細胞核轉運到胞漿。因此，Naldini等在載體上保留了gag基因5′端350bp的
慢病毒的濃縮與純化
方法一 超速離心沉淀法1. 取6個Ultra-clear SW28離心管，用70%乙醇消毒后，放在超凈工作臺中打開紫外燈繼續消毒30分鐘。2. 每個Ultra-clear SW28離心管中加入約32ml的預先處理的病毒上清液。3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。將移液管一
慢病毒怎么純化和濃縮
慢病毒濃縮后沉淀用多少體積1%bsa重懸慢病毒濃縮后沉淀用多少體積1%bsa重懸慢病毒濃縮后沉淀用多少體積1%bsa重懸
慢病毒的濃縮與純化
實驗概要本文介紹了慢病毒濃縮與純化的兩種方法：超速離心沉淀法，PEG-8000濃縮法。實驗材料慢病毒上清液實驗步驟超速離心沉淀法： 1. 取6個Ultra-clear SW28離心管，用70%乙醇消毒后，放在超凈工作臺中打開紫外燈繼續消毒30分鐘； 2. 每個Ultra-clear SW28離心管中
關于慢病毒載體的介紹
慢病毒載體（Lentiviral vector）較逆轉錄病毒載體有更廣的宿主范圍，慢病毒能夠有效感染非周期性和有絲分裂后的細胞。慢病毒載體能夠產生表達shRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性細胞、干細胞、受精卵以及分化的后代細胞中表達shRNA，實現在多種類型的細胞和轉基因小鼠中特異而穩定
切向流超濾：膠乳銀納米顆粒粒徑篩選和濃縮的“綠色”...
切向流超濾：膠乳銀納米顆粒粒徑篩選和濃縮的“綠色”技術銀納米顆粒（AgNP）因其抗菌特性，廣泛應用于消費品、水體消毒劑、治療藥物以及生物醫學設備的生產，但其適用性受粒徑限制。對均質AgNP進行粒徑控制，并消除穩定劑及有機溶劑的毒性影響，在技術和效率上都存在諸多挑戰。切向流超濾（TFU）常用于蛋白質、
小型切向流超濾系統簡介
了解切向流超濾技術切向流過濾（TFF），也叫錯流過濾（CFF），是指液體流動方向與過濾方向相垂直的過濾形式。液體流動在過濾介質表面產生剪切力，減小了濾餅層或凝膠層的堆積，從而保證了穩定的過濾速度。根據被截留的顆粒或分子大小可分為微濾MF、超濾UF、納濾NF和反滲透RO。TFF技術目前被廣泛應用于制藥
關于慢病毒載體的概念介紹
慢病毒載體是指以人類免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 來源的一種病毒載體，慢病毒載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息，是慢病毒載體系統的主要組成部分。攜帶有外源基因的慢病毒載體在慢病毒包裝質粒、細胞系的輔助下，經過病毒包裝成為有感染力的病毒顆粒，通過感染細胞或活體組織，實現外源基因在
簡述慢病毒載體的輔助成分
慢病毒載體輔助成分包括： 慢病毒包裝質粒和可產生病毒顆粒的細胞系。 慢病毒載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA 到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞，在細胞中進行病毒的包裝
關于慢病毒表達載體的介紹
慢病毒表達載體，即通常所說的穿梭載體，包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA 到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞，在細胞中進行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基中
使用切向流過濾法純化血紅蛋白
在現代醫學中，輸血是出血性休克、貧血等病癥重要的治療方法，也是常規手術的重要組成部分，但是肝炎及AIDS等小概率傳播風險，總是干擾著輸血的安全進行。此外，輸血前，還需對供體血液進行分型，并與受體血型交叉匹配，以避免出現排異現象。對此，一種相對簡便的替代方法是，使用血紅蛋白（Hb）類氧載體（HBOCs
慢病毒的濃縮與純化——PEG8000濃縮法
實驗概要本實驗介紹了用PEG-8000濃縮法濃縮與純化慢病毒的操作步驟。主要試劑1. NaCl2. PEG8000主要設備1. 高壓滅菌鍋2. 0.45μm濾頭3. 高速離心機4. 低溫冰箱實驗步驟1. 5X PEG8000 NaCl配制稱取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在2
mRNA藥物制備的關鍵技術——切向流過濾的高效應用
mRNA藥物作為一種新型的生物制藥技術，因其在治療和預防疾病方面的潛力而受到廣泛關注。切向流過濾（TFF）技術高效率、高回收率特點，在mRNA藥物制備中作用很大。一、什么是mRNA？mRNA是細胞中的一種核糖核酸，它攜帶遺傳信息，指導細胞制造特定的蛋白質。在mRNA藥物中，人工合成的mRNA被設計用
病毒包裝技術——慢病毒載體構建及包裝流程
一、實驗流程（1和2為并列步驟）慢病毒過表達質粒載體的構建設計上下游特異性擴增引物，同時引入酶切位點，PCR(采用高保真KOD酶，3K內突變率為0%)從模板中（CDNA質粒或者文庫）調取目的基因CDS區（coding sequence）連入T載體。將CDS區從T載體上切下，裝入慢病毒過表達質粒載體。
高滴定度慢病毒載體產物實驗
實驗材料293T細胞試劑、試劑盒杜氏改良培養基TE 緩沖液CaCl22 X HeBSPBS漂白劑儀器、耗材乙醇噴壺組織培養皿培養箱滅菌離心管過濾器組織培養瓶實驗步驟展開
高滴定度慢病毒載體產物實驗
基本方案 高滴定度 HIV-I 基本載體轉染 293T 細胞實驗步驟 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 293T細胞
高滴定度慢病毒載體產物實驗
基本方案 高滴定度 HIV-I 基本載體轉染 293T 細胞實驗步驟實驗材料293T細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒杜氏改良培養基 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
慢病毒載體相關知識問答大總結
慢病毒包裝技術專題Q:什么是慢病毒 ?A: 慢病毒載體 (Lenti vector)是用于感染細胞以實現穩定導入基因或siRNA的病毒載體系統，其感染效率可以達到100%。慢病毒和細胞結合后通過包裝蛋白將含有目的基因或者干擾序列釋放到細胞內。慢病毒RNA通過逆轉錄酶轉錄為DNA。DNA整合前復合
TFF切向流超濾膜清洗步驟
TFF切向流超濾膜清洗步驟1.? ?把濾過液和回流液出口連接到清洗罐。??2.? ?關掉清洗罐的排液閥、打開回流和濾過口的閥門。??3.? ?如果您的系統采用的是離心泵，可將泵的出口閥關閉；如果您的系統采用 的是變速泵，請把泵速調到最低。??4.? 從清洗劑選擇表中，選出能去除系統內的堵塞物的適當清
中空纖維切向流過濾純化HSV疫苗
簡介單純皰疹病毒2型（HSV-2）是潰瘍性生殖器皰疹的主要病原，全球每年新增感染達2300萬例，其治療方式主要圍繞口服抗病毒治療展開，但已有HSV-2候選疫苗進入臨床試驗，包括滅活、活性衰減、亞單位、DNA及多肽疫苗等，其中，野生型病毒刪除UL5和UL29基因構建的復制缺陷型HSV-2疫苗株病毒（d
關于慢病毒載體的包裝成分介紹
包裝成分的構建應在不重組病毒的裝配和感染力的前提下，盡可能地減少無關的HIV-1蛋白的表達，為野生型病毒的恢復設置障礙。Naldini等在構建包裝質粒時，阻止env基因的表達。在此基礎上，Zufferey等將包裝包裝質粒上表達調節蛋白Nef、Vif、Vpr和Vpu的4個基因分別刪除或聯合刪除。這
關于慢病毒載體存在的問題分析介紹
盡管慢載體的研究有了很大進展，但距離臨床應用還有很長的路要走。首先，重組病毒的滴度還不夠高，除Naldini等報道的結果外，其余均在101TU/ml～103TU/ml之間，難以達到體內應用的需要；其次，由于HIV復雜的生物學性質，要像常用的小鼠逆轉錄病毒載體那樣建立穩定的HIV載體包裝細胞十分困
關于慢病毒載體的基本信息介紹
慢病毒載體可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞，從而達到良好的的基因治療效果。對于一些較難轉染的細胞， 如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等，使
簡述慢病毒載體的基本原理
慢病毒載體系統由兩部分組成，即包裝成分和載體成分。 1、包裝成分 由HIV-1基因組去除了包裝、逆轉錄和整合所需的順式作用序列而構建，能夠反式提供產生病毒顆粒所必需的蛋白。包裝成分通常被分開構建到兩個質粒上，一個質粒表達Gag和Pol蛋白，另一個質粒表達Env蛋白，其目的也是降低恢復成野生型
切向流超濾（TFF）的原理、特點及其應用
切向流超濾（TFF）能快捷、高效地進行生物分子的分離與純化處理；可用于低至10毫升、高達數千升樣品溶液的濃縮和脫鹽處理；也可以用于不同大小生物分子的分離、細胞懸液收集、以及發酵液和細胞裂解液的澄清。為什么要使用切向流超濾● 易于裝配，操作簡單-用管路和少許管路配件，簡單地連接切向流超濾裝置、泵以及壓
切向流超濾（TFF）的原理、特點及其應用
切向流超濾（TFF）能快捷、高效地進行生物分子的分離與純化處理；可用于低至10毫升、高達數千升樣品溶液的濃縮和脫鹽處理；也可以用于不同大小生物分子的分離、細胞懸液收集、以及發酵液和細胞裂解液的澄清。 為什么要使用切向流超濾● 易于裝配，操作簡單-用管路和少許管路配件，簡單地連接切向流超濾裝置、泵以及
病毒包裝技術3——慢病毒載體構建及包裝流程介紹
1 菌液的準備 1.1. 取含目的質粒的甘油菌液（-80℃或-20℃冰箱中），待菌液融化后，在超凈臺用接種環劃線于氨芐抗性的平板上，37℃倒置培養12-16h。待平板長出菌落，挑選生長狀態良好的單克隆菌落。若無目的質粒的菌液，則需取庫存質粒進行轉化，然后挑單克隆搖菌。 1.2. 將單
使用中空纖維切向流過濾（HF－TFF）優化高濃度抗體工藝1
背景/介紹抗體（Abs），或免疫球蛋白（Ig），被廣泛用于許多不同的科研和治療性應用1。特別是，單克隆抗體（mAbs）在診斷、蛋白質純化以及醫療應用中的使用顯著增加2-5。妨礙治療性mAbs使用的一個主要障礙是皮下注射需要使用較高的濃度，因為這是優先選擇的給藥方法。按FDA要求，皮下給藥時，注射體積
使用中空纖維切向流過濾（HF－TFF）優化高濃度抗體工藝2
如圖2所示，1.0mm內徑纖維的起始通量高于0.5mm內徑纖維（18L/m2/hr vs. 12L/m2/hr）。正如預期，通量隨IgG溶液濃度的增加而降低。運行過程中，TMP恒定為5psig，直到接近運行結束時，增加至約10psig。此時，通量降低至0L/m2/hr。圖2同時顯示，在整個運行過程中