轉染實驗常用的報告基因（植物、動物）
報告基因(reporter gene)是一種編碼可被檢測的蛋白質或酶的基因，是一個其表達產物非常容易被鑒定的基因。把它的編碼序列和基因表達調節序列相融合形成嵌合基因，或與其 它目的基因相融合，在調控序列控制下進行表達，從而利用它的表達產物來標定目的基因的表達調控，篩選得到轉化體。 作為報告基因，在遺傳選擇和篩選檢測方面必須具有以下幾個條件：(1)已被和全序列已測定;(2)表達產物在受體細胞中不存在，即無背景，在被轉染的細胞中無相似的內源性表達產物;(3)其表達產物能進行定量測定。 在植物基因工程研究領域，已使用的報告基因主要有以下幾種： 胭脂堿合成酶基因(nos)、章魚堿合成酶基因(ocs) nos、 ocs這兩個基因是致瘤土壤農桿菌(Agrobacterium tumfaciens)的Ti質粒特有的，對Ti質粒進行改造，用相應的致瘤農桿菌轉化植物體時，如果外源基因轉入植物體中，則這兩種報告基因......閱讀全文
轉染實驗常用的報告基因（植物、動物）
報告基因(reporter gene)是一種編碼可被檢測的蛋白質或酶的基因，是一個其表達產物非常容易被鑒定的基因。把它的編碼序列和基因表達調節序列相融合形成嵌合基因，或與其 它目的基因相融合，在調控序列控制下進行表達，從而利用它的表達產物來標定目的基因的表達調控，篩選得到轉化體。
報告基因實驗
實驗方法原理報告基因是一個分子生物學概念，它是指一類在細胞、組織/器官或個體處于特定情況下會表達并使得他們產生易于檢測、且實驗材料原本不會產生的性狀的基因。作為報告基因，在遺傳選擇和篩選檢測方面必須具有以下幾個條件：①已被克隆和全序列已測定；②表達產物在受體細胞中本不存在，即無背景，在被轉染的細胞中
雙熒光素酶報告基因實驗怎么轉染目的和內參兩種質粒
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。
雙熒光素酶報告基因實驗怎么轉染目的和內參兩種質粒
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。
細胞轉染實驗的實驗步驟細胞轉染
1）轉染試劑的準備A.將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。B.震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。2）選擇合適的混合比例（1：1－1：2/脂質體體積：DNA質量）來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩
報告基因檢測的精明之選—LipoD293DNA轉染試劑
使用lipoD293轉染試劑來轉染哺乳動物細胞（比如Hela 、PC3），以期檢測熒光酶報告基因，同其他轉染試劑相比較，您會得到更多的熒光酶讀數，更少的細胞死亡率。使用unsupplemented RPM11640/DMEM替代Opti-MEM培養基來稀釋lipoD293及DNA（luciferas
真核細胞轉染實驗
學習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法——脂質體介導的轉染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。實驗材料真核細胞試劑、試劑盒脂質體 轉染液儀器、耗材CO2孵箱 離心管 6孔板
真核細胞轉染實驗
真核細胞的轉染 實驗材料 真核細胞 試劑、試劑盒 脂質體 轉染液
昆蟲細胞轉染實驗
實驗材料昆蟲細胞試劑、試劑盒胎牛血清脂質體轉染劑儀器、耗材培養皿錐形瓶培養箱離心機轉子實驗步驟1. ?接種2x106個Sf9細胞于60 mm 培養皿，在含10%胎牛血清的完全培養液或無血清培養液中培養，于27℃培養30~60 min，讓細胞貼壁。2. ?相應于毎一待轉染的培養皿，吸取40 ul 無菌
昆蟲細胞轉染實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 昆蟲細胞 試劑、試劑盒
細胞轉染實驗介紹
一、實驗目的學習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法——脂質體介導的轉染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。二、實驗原理上圖所示是脂質體介導轉染的示意圖，它顯示了外源質粒進入細胞的一般過程。外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介
昆蟲細胞轉染實驗
實驗材料 昆蟲細胞試劑、試劑盒 胎牛血清脂質體轉染劑儀器、耗材 培養皿錐形瓶培養箱離心機轉子實驗步驟 1. ?接種2×106個Sf9細胞于60 mm 培養皿，在含10%胎牛血清的完全培養液或無血清培養液中培養，于27℃培養30~60 min，讓細胞貼壁。2. ?相應于毎一待轉染的培養皿，吸取40
細胞轉染實驗目的
學習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法—脂質體介導的轉染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。
昆蟲細胞轉染實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 昆蟲細胞 試劑、試劑盒
報告基因實驗——MUG－熒光分析
實驗材料組織提取物試劑、試劑盒GUS 緩沖液MUG儀器、耗材96 孔板數顯熒光計實驗步驟1. 分別取 25 ul 和 50?ul 組織提取物樣品于 96 孔板中（黑色或者白色），包括未轉化的對照組織，加 GUS 緩沖液至總體積為 200 ?ul，混勻。2. 加入 100 μl 含 2.5 mg/ml
細胞轉染實驗的實驗目的
學習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法—脂質體介導的轉染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。
細胞轉染實驗的實驗原理
外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法、脂質體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入；磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和
細胞轉染實驗的實驗步驟
細胞傳代(1)試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。(2)棄掉培養皿中的培養基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。(3)用Tip頭加入1mlTrypsin液，消化1分鐘（37。C，5%CO2)。用手輕拍培養瓶壁，
細胞轉染：脂質體轉染的幾個實驗方法
實驗原理 脂質 體(LR)試劑是陽離子脂質體DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它適用于把DNA 轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前條件下最方面的轉染方法之一。轉染率高，優于磷酸鈣法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA轉染到各種細胞。用LR進行轉染時，首先需要優化轉染條件，應找出該批LR對轉
電穿孔轉染－DNA－實驗
電穿孔可以有效地轉染磷酸鈣-DNA 沉淀物等其他方法轉染效果不好的細胞系。但是，與其他轉染方法一樣，未使用過的細胞系進行電穿孔轉染的實驗條件要經過優化。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料指數生長的哺乳動物細胞培養液試劑、試劑盒Giem
痘苗載體轉染細胞實驗
實驗方法原理 將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，外源基因的兩端為痘苗病毒基因組非必需基因片段。隨后，將重組質粒轉染病毒感染的細胞，痘苗病毒基因組與質粒上同源的部分發生同源重組。應用適當的篩選方案，經幾輪噬斑純化，從細胞裂解物中獲得重組病毒。實驗材料 pSCll／pRB21／pSC65／pLW
影響轉染實驗的因素
影響轉染的因素很多，主要因素有以下幾個。一、細胞狀態在開始轉染細胞之前，先制定一個適當的種板方案，使細胞密度從轉染開始到結束都保持最佳狀態。一般低的細胞代數（
電穿孔轉染－DNA－實驗
實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養液試劑、試劑盒 Giemsa 染液甲醇磷酸鹽緩沖液丁酸鈉載體 DNA細胞生長培養基儀器、耗材 組織培養皿基因脈沖器 II電穿孔設備與電轉化池Sorvall H1000B 轉子或類似設備實驗步驟 材料緩沖液與溶液貯存液、緩沖液與試劑的成分見附錄 1。稀釋貯存液至所需
電穿孔轉染－DNA－實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養液 試劑、試劑盒 Giemsa 染液 甲醇 磷酸鹽緩沖液
痘苗載體轉染細胞實驗
CaCl2 法 DOTAP 法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，外源基因的兩端為痘苗病毒基因組非必需基因片段。隨后，將重組質
細胞轉染實驗的原理
外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法、脂質體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入；磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和
細胞轉染實驗的步驟
細胞傳代(1)試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。(2)棄掉培養皿中的培養基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。(3)用Tip頭加入1mlTrypsin液，消化1分鐘（37。C，5%CO2)。用手輕拍培養瓶壁，
細胞轉染實驗的目的
學習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法—脂質體介導的轉染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。
雙熒光素酶報告基因實驗原理
雙熒光素酶報告基因實驗原理具體如下：雙熒光素酶報告基因實驗原理是利用雙熒光素酶作為熒光素酶的標記來研究基因表達與調控的機制。雙熒光素酶報告基因實驗是一種基因表達定量分析技術，通過將雙熒光素酶Luciferase作為報告基因插入到需要研究的靶基因啟動子區域或轉錄后區域，使其與靶基因協同表達。當熒光素基
細胞轉染實驗的實驗步驟細胞傳代
(1)試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。(2)棄掉培養皿中的培養基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。(3)用Tip頭加入1mlTrypsin液，消化1分鐘（37。C，5%CO2)。用手輕拍培養瓶壁，觀察到細