流式細胞儀檢測實驗用TUNEL流式細胞定量凋亡細胞
實驗材料要分析的細胞試劑、試劑盒 PBS95%乙醇(不是100%乙醇)冰冷多聚甲醛固定液TdT反應液TdT 生物素-dUTP混合液異硫氰酸熒光素(FITC)-鏈霉親和素(streptavidin)結合物儀器、耗材12 mm×75 mm圓底離心管配有269模型轉子的IEC 6R6000離心機(或相當的設備)實驗步驟1a)多色分析:進行免疫熒光染色。重懸染色細胞于PBS,轉移含5×105個細胞的細胞液至一 12 mm×75 mm圓底離心管。必須確保用于多色染色的熒光團沒有被TUNEL步驟的固定劑破壞。FITC、PE和Texas紅不受影響。Duochromes (PE和Texas紅的結合物,如Red 613)也不受影響,但是別藻藍素(APC)會被固定劑破壞。1b) TUNEL檢測:轉移含5 ×105的細胞液至一 12 mm×75 mm圓底離心管。2)加入1?2 ml PBS,然后 4℃,300 g (IEC 269轉子則為1200 r......閱讀全文
流式細胞儀檢測實驗用TUNEL流式細胞定量凋亡細胞
實驗材料要分析的細胞試劑、試劑盒 PBS95%乙醇(不是100%乙醇)冰冷多聚甲醛固定液TdT反應液TdT 生物素-dUTP混合液異硫氰酸熒光素(FITC)-鏈霉親和素(streptavidin)結合物儀器、耗材12 mm×75 mm圓底離心管配有269模型轉子的IEC 6R6000離心機(或相當的
流式細胞儀檢測實驗_用TUNEL流式細胞定量凋亡細胞
實驗材料要分析的細胞試劑、試劑盒 PBS95%乙醇(不是100%乙醇)冰冷多聚甲醛固定液TdT反應液TdT 生物素-dUTP混合液異硫氰酸熒光素(FITC)-鏈霉親和素(streptavidin)結合物儀器、耗材12 mm×75 mm圓底離心管配有269模型轉子的IEC 6R6000離心機(或相當的
用流式細胞儀檢測細胞凋亡
? 細胞凋亡的檢測方法眾多,流式細胞儀檢測凋亡,是常用的方法。由于流式細胞儀固有的特點――可以準確的進行凋亡細胞的計數。因此,具有其它方法無可比擬的優越性。下面我們就簡單明了地介紹流式在檢測凋亡方面的應用。在凋亡誘導劑的作用下,首先是細胞色素C和apa f-1形成復合體,線粒體的功能發生衰退;后是c
用流式細胞儀檢測細胞凋亡
細胞凋亡的檢測方法眾多,流式細胞儀檢測凋亡,是常用的方法。由于流式細胞儀固有的特點――可以準確的進行凋亡細胞的計數。因此,具有其它方法無可比擬的優越性。下面我們就簡單明了地介紹流式在檢測凋亡方面的應用。在凋亡誘導劑的作用下,首先是細胞色素C和apa f-1形成復合體,線粒體的功能發生衰退;后是cas
細胞凋亡:流式細胞儀檢測實驗
實驗方法原理 實驗材料 要分析的細胞在FACS緩沖液中試劑、試劑盒 FACS緩沖液冰冷的100%乙醇(如果細胞是抗體標記的則用70%乙醇)1 mg ml RNase A含50μg ml 二碘化丙錠(PI)的PBS儀器、耗材 流式細胞儀實驗步驟 1)凋亡刺激后,從培養液中沉淀所要分析的細胞,同樣沉淀一
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
PI單染色法 Heochst 33342/PI雙染色法 Annexin V/PI雙染色法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主要根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
PI單染色法 Heochst 33342/PI雙染色法 Annexin V/PI雙染色法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主要根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞
細胞凋亡:流式細胞儀檢測實驗
用次GoZG1 DNA峰值計算細胞凋亡 用TUNEL流式細胞定量凋亡細胞 通過TUNEL組織切面中的凋亡細胞的原位雜交 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
實驗方法原理 其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變最具特征性,主要包括以下幾個方面:?1. ?細胞核的改變?由于凋亡細胞核的改變,造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
實驗方法原理 其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變zui具特征性,主要包括以下幾個方面:1. 細胞核的改變由于凋亡細胞核的改變,造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染性
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
流式細胞儀檢測細胞凋亡可以: 鑒定細胞凋亡形態; 可以準確的進行凋亡細胞的計數; 可以進行特異的定性分析和定量分析。 實驗原理 細胞凋亡時,在細胞、亞細胞和分子水平上會發生的特征性改變,這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變最具特征
流式細胞儀檢測實驗_TUNEL組織切面中的凋亡細胞原位雜交
實驗材料要分析的新鮮組織試劑、試劑盒 含1% (m V)多聚甲醛的PBS (低溫攬拌溶解過夜用之前過濾)Tris緩沖鹽(TBS)含 0.1% (V V) H2O2 的 TBSTdT反應液TdT 地高辛(digo×igenin下同)-dUTP混合液2% (V V)馬血清或含FBS的TBS羊抗地高辛初級
流式細胞儀檢測實驗TUNEL組織切面的凋亡細胞的原位雜交
實驗材料要分析的新鮮組織試劑、試劑盒 含1% (m V)多聚甲醛的PBS (低溫攬拌溶解過夜用之前過濾)Tris緩沖鹽(TBS)含 0.1% (V V) H2O2 的 TBSTdT反應液TdT 地高辛(digo×igenin下同)-dUTP混合液2% (V V)馬血清或含FBS的TBS羊抗地高辛初級
實驗時間_流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
流式細胞儀檢測細胞凋亡可以:鑒定細胞凋亡形態;可以準確的進行凋亡細胞的計數;可以進行特異的定性分析和定量分析。實驗原理細胞凋亡時,在細胞、亞細胞和分子水平上會發生的特征性改變,這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變最具特征性。通過流式細胞儀檢測這
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗protocol
40年來,流式細胞術一直由多色流式主導。 盡管Fulwyler發明的初代儀器基于庫爾特體積,但熒光在短短幾年內成為流式細胞儀主導技術。 從20世紀80年代初到現在,技術開發人員一直致力于構建能夠測量更多熒光參數(我們通常將其稱為“顏色”)的儀器。 最開始,G?hde在1968年首次發表關于熒光
細胞凋亡檢測實驗——TUNEL法
實驗方法原理脫氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以摻入到凋亡細胞雙鏈或單鏈DNA的3-OH末端,與dATP形成異多聚體,并可與連接了報告酶(過氧化物酶或堿性磷酸酶)的抗地高辛抗體結合。在適合底物存在下,過氧化物酶可產生很強的顏色反應,特異準確
流式細胞儀檢測細胞凋亡
細胞凋亡的檢測方法眾多,流式細胞儀檢測凋亡,是常用的方法。由于流式細胞儀固有的特點――可以準確的進行凋亡細胞的計數。因此,具有其它方法無可比擬的優越性。下面我們就簡單明了地介紹流式在檢測凋亡方面的應用。在凋亡誘導劑的作用下,首先是細胞色素C和apa f-1形成復合體,線粒體的功能發生衰退;后是cas
流式細胞儀細胞凋亡檢測
一 PI單染色法??基本原理? 其原理主要是根據細胞?凋亡時在細胞、亞細胞和分子?水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變最具特征性,主要包括以下幾個方面:1.?細胞核的改變:由于凋亡細胞核的改變,造成各種染色體熒光染料
流式細胞儀定量分析細胞凋亡
流式細胞儀定量分析,細胞凋亡檢測原理細胞發生凋亡時,其細胞膜的通透性也增加,但是其程度介于正常細胞與壞死細胞之間。利用這一特點,被檢測細胞懸液用熒光素染色,利用流式細胞儀測量細胞懸液中細胞熒光強度來區分正常細胞、壞死細胞核凋亡細胞。流式細胞儀定量分析細胞凋亡,應用價值流式細胞儀檢測具有以下特點:1)
流式細胞儀定量分析細胞凋亡
流式細胞儀檢測具有以下特點:1)、檢測的細胞數量大,因此其反映群體細胞的凋亡狀態比較準確2)、可以做許多相關性分析3)、結合被檢測細胞的DNA含量的分析,可確定凋亡的細胞所處的細胞周期■檢測形態學及細胞膜完整性的Hoechs-PI雙染色法細胞發生凋亡時,其細胞膜的通透性液增加,但其程度介于正常細胞和
流式細胞儀定量分析細胞凋亡
流式細胞儀定量分析,細胞凋亡檢測原理細胞發生凋亡時,其細胞膜的通透性也增加,但是其程度介于正常細胞與壞死細胞之間。利用這一特點,被檢測細胞懸液用熒光素染色,利用流式細胞儀測量細胞懸液中細胞熒光強度來區分正常細胞、壞死細胞核凋亡細胞。流式細胞儀定量分析細胞凋亡,應用價值流式細胞儀檢測具有以下特點:1)
細胞凋亡檢測流式細胞儀檢測技術
一、固定細胞的染色方法?1)PI單染色法?方法一?1.收集細胞(1~5)×106個,500~1000r/min離心5min,棄去培養液。?2.3ml PBS洗一次。?3.離心去PBS,加入冰預冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。?4.離心棄去固定液,3ml PBS重懸5min。?5.400目的篩網過濾
細胞凋亡檢測:流式細胞儀檢測技術
細胞調亡的流式細胞儀檢測技術一、固定細胞的染色方法1)PI單染色法方法一1.收集細胞(1~5)×106個,500~1000r/min離心5min,棄去培養液。2.3ml PBS洗一次。3.離心去PBS,加入冰預冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。4.離心棄去固定液,3ml PBS重懸5min。5.40
細胞凋亡檢測流式細胞儀檢測技術
一、固定細胞的染色方法?1)PI單染色法?方法一?1.收集細胞(1~5)×106個,500~1000r/min離心5min,棄去培養液。?2.3ml PBS洗一次。?3.離心去PBS,加入冰預冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。?4.離心棄去固定液,3ml PBS重懸5min。?5.400目的篩網過濾
細胞凋亡檢測:流式細胞儀檢測技術
細胞調亡的流式細胞儀檢測技術?一、固定細胞的染色方法?1?)?PI?單染色法?方法一1.?收集細胞(?1?~?5?)×?106?個,?500?~?1000r/min?離心?5min?,棄去培養液。2.?3ml PBS?洗一次。3.?離心去?PBS?,加入冰預冷的?70?%的乙醇固定,?4?℃,?1h
細胞凋亡(TUNEL,TUNEL染色)檢測技術
細胞凋亡是指為維持內環境穩定,??生物體內細胞在特定的內源或外源信號誘導下,其死亡途徑被激活,并在有關基因的調控下發生的程序性死亡過程。細胞凋亡是程序性死亡過程的一種主要形式,它涉及染色質凝聚和外周化、細胞質減少、核片段化、細胞質致密化、與周圍細胞聯系中斷、內質網與細胞膜融合,最終細胞片段化形成許多
流式細胞儀檢測實驗_用次GoZG1-DNA峰值計算細胞凋亡
實驗材料要分析的細胞在FACS緩沖液中試劑、試劑盒FACS緩沖液冰冷的100%乙醇(如果細胞是抗體標記的則用70%乙醇)1 mg ml RNase A含50μg ml 二碘化丙錠(PI)的PBS儀器、耗材流式細胞儀實驗步驟1)凋亡刺激后,從培養液中沉淀所要分析的細胞,同樣沉淀一未處理的對照培養液。重
流式細胞儀檢測實驗用次GoZG1-DNA峰值計算細胞凋亡
實驗材料要分析的細胞在FACS緩沖液中試劑、試劑盒FACS緩沖液冰冷的100%乙醇(如果細胞是抗體標記的則用70%乙醇)1 mg ml RNase A含50μg ml 二碘化丙錠(PI)的PBS儀器、耗材流式細胞儀實驗步驟1)凋亡刺激后,從培養液中沉淀所要分析的細胞,同樣沉淀一未處理的對照培養液。重
TUNEL細胞凋亡檢測程序
實驗概要本實驗用TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)細胞凋亡檢測試劑盒檢測了組織細胞在凋亡早期過程中細胞核DNA的斷裂情況。實驗原理其原理是熒光素(fluorescein)標記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT Enzyme)的作用下,可
流式細胞儀檢測細胞凋亡的原理
一、原理在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內側,而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內側翻向外側。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結