二次鑒別性消化法檢測磷酸肽中特定氨基酸實驗
基本方案 實驗方法原理 實驗材料 洗脫的磷酸肽 試劑、試劑盒 消化酶 消化緩沖液 2-巰基乙醇 合適 pH 的電泳緩沖 儀器、耗材 適合于酶消化的溫度的水浴 TLC 平板（20 cm × 20 cm 100 維素） 實驗步驟 ......閱讀全文
二次鑒別性消化法檢測磷酸肽中特定氨基酸實驗
實驗材料洗脫的磷酸肽試劑、試劑盒消化酶消化緩沖液2-巰基乙醇合適 pH 的電泳緩沖儀器、耗材適合于酶消化的溫度的水浴TLC 平板（20 cm × 20 cm 100 維素）實驗步驟1. 在微量離心管中用 50 μl 合適的緩沖液溶解洗脫下的磷酸肽，短暫離心在管底收集所有的溶液。取 1 μl 肽溶液滴
二次鑒別性消化法檢測磷酸肽中特定氨基酸實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 洗脫的磷酸肽
二次鑒別性消化法檢測磷酸肽中特定氨基酸實驗
實驗方法原理 實驗材料 洗脫的磷酸肽試劑、試劑盒 消化酶消化緩沖液2-巰基乙醇合適 pH 的電泳緩沖儀器、耗材 適合于酶消化的溫度的水浴TLC 平板（20 cm × 20 cm 100 維素）實驗步驟 1. 在微量離心管中用 50 μl 合適的緩沖液溶解洗脫下的磷酸肽，短暫離心在管底收集所有的溶液。
食品檢測中硝酸一硫酸消化法
此法是在樣品中加入硝酸和硫酸的混合液，或先加入硫酸加熱，使有機物分解，在消化過程中不斷補加硝酸。這樣可縮短炭化過程，并減少消化時間，反應速度適中。由于堿土金屬的硫酸鹽在硫酸中的溶解度較小，故此法不宜做食品中堿土金屬的分析。如果樣品含較大量的脂肪和蛋白質時，可在消化的后期加入少量的高氯酸或過氧化氫，以
磷酸化位點分析實驗磷酸肽的質譜分析
實驗方法原理用于確定磷酸肽中磷酸化位點的壓譜方法有兩種不同的基本原理。第一種方法依賴于在質譜儀條件下，如在 ESI 質譜儀的碰撞室或離子源中，或MALDI-MS 的 PSD 過程中，磷酸酯鍵的化學穩定性。因此，磷酸肽可通過磷酸酯鍵斷裂產生的診斷離子鑒定。第二種方式依靠檢測磷酸酯基團使肽段增加的質量數
細胞傳代實驗_消化法
實驗方法原理用胰蛋白酶消化細胞，用于貼壁細胞傳代培養。實驗材料細胞試劑、試劑盒胰蛋白酶酒精PBS儀器、耗材超凈工作臺酒精燈酒精棉球培養箱顯微鏡吸管離心管離心機實驗步驟一、傳代前準備?1. ?預熱培養用液：把已經配制好的裝有培養液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內預熱。?2. ?用75%酒精
食品檢測中硝酸一高氯酸消化法
此法可先加硝酸進行消化，待大量的有機物分解后，再加入高氯酸，或者以硝酸高氯酸混合液先將樣品浸泡過夜，或小火加熱待大量泡沫消失后，再提高消化溫度，直至完全消化為止。此法氧化能力強，反應速度快，炭化過程不明顯；消化溫度較低，揮發損失少。但由于這兩種酸受熱都易揮發，故當溫度過高、時間過長時，容易燒干，并可
蛋白質胰蛋白酶磷酸肽圖譜制定實驗——固相蛋白消化
試劑、試劑盒甲醇PVP-360（溶于乙酸）50 mmol L 碳酸氫銨pH 8.0儀器、耗材PVDF 膜／硝酸纖維素膜保鮮膜／聚酯薄膜實驗步驟1. 用 SDS-PAGE 凝膠電泳分離?32P 標記的樣品，用標準的濕式或半干式蛋白質轉移方法將蛋白質轉移到 PVDF 或硝酸纖維素膜上。2. 將膜晾干并用
原子吸收法中干法消化和濕法消化有什么優缺點
干法消化：試劑用量小，樣品消解量大，但測試樣品局限性強 濕法：試劑量大，樣品消解量小，空白易被污染，一些特定樣品，濕法無法消解
限制性內切酶消化DNA實驗——部分消化
實驗方法原理有時需要得到僅在DNA片段的內部存在的部分限制性位點切割產生DNA，這在用待克隆片段內部存在的限制酶切位點進行克隆和構建酶切圖譜時特別有用。實驗材料DNA試劑、試劑盒限制性內切酶緩沖液儀器、耗材電泳儀實驗步驟1. ?配制100 ul 含DNA和1x限制酶緩沖液的反應混合物。?2. ?將反
磷酸化位點分析實驗確定磷酸化氨基酸類型
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 蛋白樣品 實驗步驟 了解肽或蛋白質中磷酸化氨基酸的類型
磷酸化位點分析實驗確定磷酸化氨基酸類型
實驗材料蛋白樣品實驗步驟了解肽或蛋白質中磷酸化氨基酸的類型，可以限定可能的磷酸化位點，并因此簡化(對多肽鏈中磷酸化殘基的確認。磷酸化殘基類型通常由磷酸氨基酸分析或磷酸氨基酸特異性免疫檢測確定。磷酸氨基酸分析是對肽鍵進行氣相或液相水解，此水解條件下要至少保留一段磷酸酯鍵完整。?32p標記的磷酸蛋白質或
磷酸化位點分析實驗用酶和化學方法去磷酸化
實驗材料蛋白樣品實驗步驟這種方法得到特別關注、但它能提供磷酸肽中磷酸化氨基酸的定位，可以在非磷酸肽占主導地位的混合物中鑒別磷酸肽，此方法使用的是磷酸酶 。用簡單的 MALDI-TOF儀器就可以得到磷酸化蛋白水解后產生肽段的質量，同樣的樣品用磷酸酶處理后，除去了絲氨酸，蘇氨酸和酪氨酸上的磷酸，再分析其
磷酸化位點分析實驗磷酸肽的分離——RPHPLC－分離磷酸肽
實驗材料蛋白樣品儀器、耗材質譜儀實驗步驟反相 HPLC 分段收集磷酸肽重現性好，簡單，且不需要特殊裝備。在 RP-HPLC 中，磷酸肽根據其疏水性被分離。分離后收集的組分經 Cerenkov計數檢測。對 Cerenkov計數和時間作圖，顯示具放射性活性的組分的計數。純化的磷酸肽用 MS 分析；可用不
干消化法與濕消化法的優缺點
1.濕消化法：指在適量的食品樣品中，加入氧化性的強酸，然后在一定溫度條件下反應，破壞食品中的有機物，使待測的無機成分釋放出來，形成不揮發的無機化合物的方法。 優點：有機物分解速度快，加熱溫度較干灰化法低，可減少待測成分的揮發損失。 缺點：試劑用量大，有時空白值比較高，消化過程中會產生大量有害
組織的分離實驗_胰蛋白酶消化消化分離法
實驗方法原理胰蛋白酶適于消化細胞間質較小的軟組織，如胚胎組織、羊膜、上皮組織、肝、腎等軟組織，對傳代細胞也非常好。用于消化纖維性組織或較硬的癌組織則較差。Ca2+和Mg2+對胰蛋白酶的活性有一定抑制作用，故需用不含這些離子的BSS 配制。血清有抑制胰蛋白酶活性的作用，因此在做細胞傳代時，用胰蛋白酶消
酶消化法的實驗前準備相關介紹
1、預熱培養用液：把已經配制好的裝有培養液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內預熱。準備離心管、吸管，紫外線30min消毒超凈工作臺。 2、用75％酒精擦拭經過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。 3、正確擺放使用的器械：保證足夠的操作空間，不僅便于操作而且可減少污染。 4、點燃酒精燈，
初代細胞培養實驗——消化培養法
初代培養或原代培養，可以用于：（1）從供體獲取組織后的首次培養；（2）組織和細胞剛剛離體，生物性狀尚未發生很大的變化，具有二倍體遺傳性狀，在供體來源充分、生物條件穩定的情況下（年齡、性別），在一定程度上能反映體內狀態。實驗方法原理合成培養基胰蛋白酶消化培養法，能把組織塊分散成細胞團或單個細胞，便于細
神經膠質細胞培養實驗_酶消化法
神經膠質細胞培養可以：（1）獲得神經膠質細胞；（2）用于神經膠質細胞電生理特性，如膜電位、去極化等；（3）用于免疫應答研究。實驗方法原理膠質細胞具有復雜多樣的結構和表達豐富的分泌產物，它含有大部分神經遞質、神經肽、激素及神經營養因子受體、離子通道、神經活性氨基酸親和載體、細胞識別分子，并能分泌多種神
腫瘤細胞原代培養實驗——酶消化法
實驗方法原理本法是利用成纖維細胞對膠原酶較為敏感的特點，通過消化進行選擇。可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理，邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視，當發現成纖維細胞被除掉后，即終止消化；用Hanks洗滌處理一次后，更換新培養液，繼續培養，可獲純凈腫瘤細胞。如成纖維細胞未被除凈，可再次重復。實驗材料組織試劑、
神經膠質細胞培養實驗_酶消化法
神經膠質細胞培養可以：（1）獲得神經膠質細胞；（2）用于神經膠質細胞電生理特性，如膜電位、去極化等；（3）用于免疫應答研究。實驗方法原理膠質細胞具有復雜多樣的結構和表達豐富的分泌產物，它含有大部分神經遞質、神經肽、激素及神經營養因子受體、離子通道、神經活性氨基酸親和載體、細胞識別分子，并能分泌多種神
細胞原代培養實驗——胰酶消化法
細胞原代培養可以：（1）為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；（2）為傳代培養創造條件；（3）服務于臨床實踐，用于藥物篩選等。實驗方法原理將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、
限制性內切酶消化DNA實驗——消化多個DNA
實驗方法原理當消化多個樣品時，以下方案可減少取吸次數，節省時間和減少污染的機會。實驗材料DNA實驗步驟1. ?分別加入相同體積的各個樣品DNA至不同微量離心管中。 為避免交叉污染，各樣品用不同的吸頭。?2. ?制備好"預混合液"，它含有足夠量的消化所有樣品的10x反應緩沖液和水，置于冰浴。?3. ?
磷酸化位點分析實驗確定磷酸化氨基酸類型
了解肽或蛋白質中磷酸化氨基酸的類型，可以限定可能的磷酸化位點，并因此簡化(對多肽鏈中磷酸化殘基的確認。磷酸化殘基類型通常由磷酸氨基酸分析或磷酸氨基酸特異性免疫檢測確定。磷酸氨基酸分析是對肽鍵進行氣相或液相水解，此水解條件下要至少保留一段磷酸酯鍵完整。?32p標記的磷酸蛋白質或磷酸肽的水解產物與磷酸氨
微波消化原子吸收分光光度法檢測食品中的鉛
(1)原理? 樣品經微波消解后,注入原子吸收分光光度計石墨爐中,電熱原子化后吸收283.3nm共振線,在一定濃度范圍,其吸收值與鉛含量成正比,與標準系列比較定量。? ? (2)試劑? 分析過程中全部用水均使用去離子水,所使用的化學試劑均為優級純以上。優級純硝酸和0.5mol/L硝酸,30%過氧化氫,
磷酸交聯AFFIGEL－10－親和介質實驗——肽鏈交聯
本實驗描述了將磷酸肽鏈/非磷酸肽鏈和磷酸酪氨酸交聯到 Affi-Gel 10 親和介質上以利用親和柱層析法純化抗體的方法。實驗方法原理本方案描述了將磷酸肽鏈或非磷酸肽鏈交聯到 Affi-Gel 10 親和介質上以利用親和柱層析法純化抗體的方法。這里所詳述的無水交聯法是最有效的肽鏈交聯方法。按此法的步
組織的分離實驗_EDTA－消化分離法
實驗方法原理EDTA是一種非酶性消化物，常用不含Ca2+和Mg2+的BSS 配成0.02%的工作液。關于EDTA的作用機制一般認為是：一些組織，尤其是上皮組織，在生存中需要Ca2+和Mg2+才能維持組織的完整性。EDTA能從這些組織生存環境中吸收這些離子，形成螯合物，能促進細胞相互分離。EDTA 作
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗（二）
二、用 于 鑒 定 P T M 的富 集 技 術2.1 磷酸化絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸殘基的可逆磷酸化也許是研究最為深人的 PT M 。蛋白質磷酸化信號網絡介導細胞對與不同的應激因子、生長因子、細胞因子以及細胞間相互作用作出響應。憐酸化還影響多種細胞進程，如增殖、凋亡 、遷移 、轉錄和蛋白
磷酸化位點分析實驗磷酸肽的分離——IMAC－分離/富集磷酸肽
實驗材料蛋白樣品儀器、耗材質譜儀實驗步驟磷酸肽分析的常見困難是由磷酸化的低化學計量值導致的，樣品中相同序列肽段的磷酸肽的含量要比非磷酸化肽段含量少得多，這種情況下即使?32p標記的 2D-PP 上的點，經全蛋白質水解及 HPLC 組分收集，已經確定磷酸肽存在，用質譜技術也難以鑒定磷酸肽。數據依賴的
腫瘤蛋白疫苗預防性實驗——Elisa檢測法
腫瘤蛋白疫苗預防性實驗旨在考查疫苗的靶點是否針對多種抗原，可以覆蓋90%甚至是100%的不同腫瘤亞型患者以及是否能在腫瘤形成之前提高機體的免疫系統。實驗材料小鼠試劑、試劑盒腫瘤蛋白疫苗Elisa試劑盒消毒酒精碘酒儀器、耗材注射器針頭一次性手套剪刀鑷子動物固定架塑料放血管試管血管夾離心機 冰箱 手術器