酵母遺傳學技術
Genome-wide Gene Expression Analysis (Richard Young Research Group,Whitehead Institute for Biomedical Research)A genoe-wide gene expression analysis using high-density oligonucleotide arrays Restriction Digests of High Molecular Weight Yeast DNA (Donis Keller Lab)Restriction digests of YACs for mapping using rare cutting enzymes or more conventional restriction endonuclease digestion. ......閱讀全文
酵母遺傳學技術
Genome-wide Gene Expression Analysis?(Richard Young Research Group,Whitehead Institute for Biomedical Research)A genoe-wide gene expression analysis u
酵母遺傳學方法實驗指南——技術和方案
技術和方案6 酵母 RNA 的分離試劑、試劑盒環乙酰亞胺苯酚LETS緩沖液LiCl乙醇SDS乙酸鈉AE 緩沖液儀器、耗材大離心瓶玻璃珠離心管oligo (dT) 柱實驗步驟大量 RNA 分離程序酵母總 RNA 的分離1.在每毫升培養物中加入 50ug 環乙酰亞胺，在 30°C 下搖晃 15 min。
酵母遺傳學方法8：酵母活體染色
酵母活體染色1）核DNA和線粒體DNA1．當細胞培養到約107細胞/ml時，離心（5秒）收集細胞，再懸浮在70％乙醇中。2．固定5分鐘或5分鐘以上，用水洗2次。3．將細胞懸浮在含有50ng/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚的封固劑中。1mg/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚母液可在－20℃下貯存。4
酵母遺傳學方法實驗指南——技術和方案1
技術和方案1 酵母的高效轉化實驗步驟展開
酵母遺傳學方法實驗指南——技術和方案7
技術和方案7 質粒 DNA 的羥胺突變試劑、試劑盒羥胺溶液氯化銫純化的質粒DNANaCl牛血清白蛋白無水乙醇TE 緩沖液實驗步驟1.臨用之前制備羥胺溶液，置冰上待用。2.將用 CsCl 純化的 10 埤質粒 DNA 加到含 500ul 羥胺溶液的微量離心管中。3.在 37°C 下溫育 20 h。4.
酵母遺傳學方法實驗指南——技術和方案5
技術和方案5 TAP純化方法試劑、試劑盒NP-40緩沖液TEV C 緩沖溶液鈣調蛋白結合緩沖液（CBB)鈣調蛋白洗脫緩沖液（CEB)實驗步驟1.培養 3~6L 細胞至濃度為 2X107~3X107 個/ml(OD50=1.0~1.3)。2.離心收集細胞，并用冰預冷的水洗一次。3.用冰預冷的 NP-4
酵母遺傳學方法實驗指南——技術和方案4
技術和方案4 酵母蛋白質的抽提試劑、試劑盒NaOHPAGE 樣品緩沖液Tris-HCl甘油β-巰基乙醇溴酚藍實驗步驟1.從液體培養物中或用細菌接種環在平板表面刮菌，收集大約 2.5 OD的細胞量（大約 2.3 mg 濕重）。將細胞重懸于 100ul 蒸餾水中，加入 100ul O.2mol/L Na
酵母遺傳學方法實驗指南——技術和方案2
技術和方案2 快速粗放的酵母菌落質粒轉化法實驗步驟展
酵母遺傳學方法實驗指南——技術和方案3
技術和方案3 酵母 DNA 分離實驗材料質粒DNA玻璃珠試劑、試劑盒YPD消解酶 100TTris-HClSDS乙酸鉀TE 緩沖液RNaseA 溶液山梨醇無水異丙醇裂解緩沖液儀器、耗材三角瓶離心管實驗步驟一、酵母 DNA 微量制備（40 ml)1.在 125 ml 三角瓶中用 40 mlYPD 培養
酵母遺傳學方法9：酵母免疫熒光
酵母免疫熒光1）細胞制備1．培養5ml酵母至對數生長早期（106～107細胞/ml）。2．直接加1/10體積的甲醛到培養基里固定細胞（加入的甲醛終濃度為3.7％，標準母液是37％）。3．細胞在甲醛中培養至少1小時。4．離心收集細胞，用0.1mol/L磷酸鉀（pH7.5）洗一次。5．把細胞懸浮在1ml
酵母遺傳學方法12：酵母菌落PCR方法
酵母菌落PCR方法1．在冰上配制反應混合液：2μl??????????????????10×菌落PCR緩沖液1.2μl?????????????????25mmol/L MgCl20.4μl?????????????????10mmol/L dNTPs10pmol????????????????引物
光遺傳學技術將酵母變成高效“生化工廠”
對酵母等微生物進行基因改造，用來生產人類所需的化合物，這樣的生物合成技術已經常見。美國一項新研究說，將光遺傳學技術與生物合成技術相結合，可以大幅提高生產效率。 光遺傳學技術是一種操控細胞的方法，即把特定基因改造得對光敏感，然后用光來打開或關閉基因功能，影響細胞活動。該技術已對神經科學等領域產生
酵母遺傳學方法1：DNA分離
酵母DNA分離1）酵母DNA微量制備（40ml）1．在125ml三角瓶中用40ml YPD培養液在30℃條件下培養細胞達最大生長量（過夜）。2．將上述培養物移入螺蓋離心管，用醫用離心機或Sorvall SS－34轉頭以5000r/min離心5分鐘，棄去上清液。3．將細胞懸浮在3ml的0.9mol/L
酵母遺傳學方法5：酵母β－半乳糖苷酶的測定
酵母β－半乳糖苷酶的測定1）??粗提取物測定1．在適當溫度下（通常30℃），用適當培養液將5ml細胞培養物培養到濃度為1×107～2×107細胞/ml。如果自主復制質粒的雜合基因表達，可使用一種適當培養基對存在質粒的菌株進行篩選。2．在冰上冷卻細胞，離心收集。注意：以下步驟保持細胞在冰上。3．棄上清
酵母遺傳學方法7：隨機孢子分析
隨機孢子分析1）孢子形成1．挑已形成孢子的二倍體單菌落接種在YPD平板上，盡可能把細胞涂薄一些，在30℃下培養12～16小時，超過16小時將明顯降低孢子的形成率。2．上午，用一個無菌殼板釘取相當一火柴頭量的細胞，轉到含有2.5ml產孢培養基試管中，在25℃下旋轉振蕩培養。3．用光學顯微鏡檢測孢子形成
酵母遺傳學方法3：RNA的分離
酵母RNA的分離1）總酵母RNA的分離1．在每毫升培養物中加入50μg環乙酰亞胺，在30℃下振蕩15分鐘。此步亦可省略，但是有人認為環乙酰亞胺可防止mRNA凝集在多核糖體上。2．迅速冷凍收集細胞，在大離心管中加入約一半體積的碎冰，將培養物倒入，振蕩，在4℃下以5000r/min離心5分鐘。3．加入1
酵母遺傳學方法4：質粒DNA的羥基突變
質粒DNA的羥基突變1．臨用之前制備羥胺溶液，置冰上待用。2．將用氯化銫純化的10μg質粒DNA加到含500μl羥胺溶液的微型離心管。3．在37℃下培養20小時。4．加入10μl的5mol/L NaCl、50μg 1mg/ml的牛血清蛋白（BSA）和1ml無水乙醇終止反應，置－70℃沉淀DNA10分
酵母遺傳學方法11：PCR介導基因破壞法
PCR介導基因破壞法1．反應混合物：5μl?????????????10×Taq緩沖液5μl?????????????25mmol/L MgCl22μl?????????????10mmol/L dNTPs10~100ng?????????模板DNA25pmols??????????引物（每種引物）
酵母遺傳學方法6：羧肽酶Y的平板鑒定
羧肽酶Y的平板鑒定1．在YPD平板上培養菌落和菌苔（通常菌落長3天，菌苔長1天即可）。2．小心把涂蓋液加在平板的表面使之完全覆蓋細胞。3．待瓊脂凝固5～10分鐘后，小心用新鮮Fast Garnet GBC溶液沖刷表面。4．顯色5分鐘，野生型菌株將變紅，而羧肽酶Y－菌株將呈現黃色或粉紅色。5．倒出Fa
酵母遺傳學方法2：蛋白質的抽提
酵母蛋白質的抽提此法抽提的酵母蛋白適用于SDS凝膠電泳和Western印跡分析。1．從OD600＝2的細胞培養物中抽提酵母蛋白質。培養物的一種簡單制備方法是將細胞接種到5ml YPD中，過夜培養后獲得指數培養物（OD600＝0.5～2.0）。2．在水浴上把OD600＝2的細胞培養物轉到含有2ml的5
酵母遺傳學方法10：固定化細胞的肌動蛋白染色
固定化細胞的肌動蛋白染色1．培養細胞到對數生長期（約107細胞/ml）。2．直接取0.1ml甲醛加到含有1ml培養物的離心管中固定細胞（甲醛濃度為3.7％；標準母液是37％）。3．在甲醛中培養細胞30分鐘或稍長時間。4．用PBS洗兩次，離心5分鐘收集細胞。5．用50μl的PBS懸浮細胞，加5個單位的
產前遺傳學檢測技術進展
《中國出生缺陷防治報告（2012）》顯示，我國出生缺陷發生率在5.6%左右，每年新增出生缺陷數約90萬例，出生缺陷是導致早期流產、死胎、圍產兒死亡、嬰幼兒死亡和先天殘疾的主要原因，不但嚴重危害兒童生存和生活質量，也會造成巨大的壽命損失和社會經濟負擔。 近年來我國高齡孕產婦數量增長，染色體異常等
光遺傳學技術是什么？
光遺傳學融合了光學及遺傳學技術，通過遺傳學方法將合適的外源光敏感蛋白靶向導入特定活細胞，利用特定波長的光照刺激光敏蛋白，調控神經元的活性，進而控制細胞乃至動物行為的開關。1、光遺傳學技術研究方法①尋找合適的光敏蛋白。光敏蛋白（也稱為視蛋白）是細胞膜上能夠感受某一波長光照刺激而產生特定效應的一類膜蛋白
知識分享：光遺傳學技術
光遺傳學（optogenetics）又稱光刺激基因工程（optical stimulation plus genetic engineering），是一種通過光學和遺傳學技術在活體動物腦內精準控制細胞行為的技術。由于其高度的時空特異性，光遺傳技術廣泛應用于神經科學領域的研究。 2010
光遺傳學技術的原理
光遺傳學（optogenetics）又稱光刺激基因工程（optical stimulation plus genetic engineering），是一種通過光學和遺傳學技術在活體動物腦內精準控制細胞行為的技術。由于其高度的時空特異性，光遺傳技術廣泛應用于神經科學研究領域。2010年，光遺傳學技術榮
關于酵母單雜交的技術介紹
酵母單雜交技術最早是1993年由Li等從酵母雙雜交技術發展而來，通過對報告基因的表型檢測，分析DNA與蛋白之間的相互作用，以研究真核細胞內的基因表達調控。由于酵母單雜交方法檢測特定轉錄因子與順式作用元件專一性相互作用的敏感性和可靠性，現已被廣泛用于克隆細胞中含量微弱的、用生化手段難以純化的特定轉
酵母雙雜交系統的技術步驟
1.將待測基因與Gal4或LexA或其他合適蛋白的DNA結合域融合構建誘餌質粒；2.將誘餌質粒轉化缺乏報告基因啟動子的酵母細胞株中，選擇被轉化的酵母；3.再將文庫質粒轉化到酵母中；4.通過報告基因的功能篩選相互作用的蛋白。
Nature：利用光遺傳學對酵母進行編程致更多的異丁醇產生
在一項新的研究中，來自美國普林斯頓大學的研究人員開發出一種導致酵母產生更多的異丁醇的方法。異丁醇是一種可能用作生物燃料的候選物質。在他們發表在2018年3月29日的Nature期刊上的一篇標題為“Optogenetic regulation of engineered cellular meta
光遺傳學技術知識（二）
3. 光遺傳學所需的輔助技術及基本步驟 光遺傳學技術包括的范圍是廣泛的。主要包括以下幾種。圖5. 光遺傳學技術及其輔助技術 在光遺傳操作中，細胞會表達特定的編碼光敏蛋白的基因，然后使用光來改變細胞的行為。光遺傳學控制細胞功能的基本步驟如下：圖6. 光遺傳學控制細胞功能的基本步驟? 其中，通過病毒感染
光遺傳學技術知識（一）
光遺傳學（optogenetics）又稱光刺激基因工程（optical stimulation plus genetic engineering），是一種通過光學和遺傳學技術在活體動物腦內精準控制細胞行為的技術。由于其高度的時空特異性，光遺傳技術廣泛應用于神經科學領域的研究。2010年，光遺