預處理法提取土壤DNA
實驗概要 從土壤中提取DNA。主要試劑1. TENP緩沖液：50 mM Tris，20 mM EDTA，100mM NaCl，1% PVPP，pH102. PBS緩沖液：137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4，pH7.43. DNA提取緩沖液： TrisBase 0.1M, EDTA 0.1M, NaCl 1.5M, CTAB 1%4. 溶菌酶（10 mg/ml）5. 蛋白酶K(20 mg/ml)6. &nb......閱讀全文
預處理法提取土壤DNA
實驗概要??? 從土壤中提取DNA。主要試劑1.????? TENP緩沖液：50 mM Tris，20 mM EDTA，100mM NaCl，1% PVPP，pH102.????? PBS緩沖液：137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4，pH7
預處理法提取土壤DNA
預處理法提取土壤DNA實驗試劑1.????? TENP緩沖液：50 mM Tris，20 mM EDTA，100mM NaCl，1% PVPP，pH102.????? PBS緩沖液：137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4，pH7.43.???
土壤總DNA的幾種提取方法
SDS?高鹽法（方案1）? ?具體步驟:?稱取1?g?土壤,放入研缽中,倒入適量的液氮,立即研磨;再倒入適量的液氮,研磨,重復3?次,使土壤顆粒研成粉末;?將13.5?ml?提取緩沖液（0.1?mol/L磷酸鹽[pH?=?8.0?]?,0.1?mol/L?EDTA?[pH?8.0?]?,0.1?mo
土壤DNA提取Part－II:－化學篇
接著前一篇文章關于如何提高土壤DNA提取得率的話題。我們已經十分徹底的談了樣品研磨裂解、選擇研磨珠類型的重要性、研磨設備以及裂解緩沖液。從中你也可以發現，裂解步驟是提高得率的最值得鉆研的地方。研磨裂解后最終DNA抽提前，需要清洗去雜。這一步主要由抑制因子去除技術（IRT）完成。跟著操作說明書流程走，
關于土壤基因組DNA提取
土壤樣品含有大量的微生物，其中絕大部分的微生物都是無法直接培養進行繁殖和研究。從土壤樣品中提取?DNA?是研究土壤微生物zui為有效的方法。目前從土壤樣品中提取微生物?DNA?的方法主要有直接法和間接法。直接法是指把土壤樣品放在裂解液中，經過有效的破壁方法使微生物的DNA?全部釋放到裂解液中，然后再
土壤微生物總DNA提取及純化
實驗概要從土壤微生物中提取總DNA并純化，高質量的DNA可用于后續文庫構建。主要試劑TENP緩沖液(50 mmol/L Tris, 20 mmol/L EDTA, 100 mmol/L NaCl, 1% PVP, pH 10.0)PBS緩沖液(137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L
不同品牌試劑盒提取土壤DNA的結果對比
1.引言 提取高濃度、大片段、多樣性程度高、具有代表性的土壤微生物總DNA對土壤微生物多樣性研究至關重要。然而，土壤是一個非常復雜的異質體系，其中含有的腐植酸及腐植酸類似物、酚類化合物、重金屬離子等，在DNA提取過程中如不能有效去除，將直接影響后續的PCR擴增、核酸雜交、內切酶消化等分子操作。用傳統
土壤殘留DNA有助揭開遠古人類之謎
Matthias Meyer正在一個清潔間工作，幫助尋找一種從古代土壤中獲取人類DNA的方式。 圖片來源：馬普學會 5000年以前，一名尼安德特人在今天比利時的一個洞穴中解手，埋葬品中除了其他的東西之外，還有他的DNA樣本。土壤礦石上的尿液和糞便樣本最終分解。但DNA記錄卻保存了下來，嵌
土壤微生物總DNA的提取方法比較
實驗概要通過對比不同DNA提取及純化方法，選擇和優化適合于土壤樣品不同分子量DNA提取及純化的技術路線。實驗原理土壤是微生物最大的棲息地，20世紀80年代，微生物學家采用免培養(culture-in-dependent)方法，即直接從土壤中提取微生物總DNA的技術，使得在基因水平研究這些未培養微生物
土壤微生物DNA提純方法及純度檢測
實驗概要本實驗比較了聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)和交聯聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)在DNA提取過程中的純化作用，并利用低電壓長時間電泳法及PVP電泳法對純化的DNA樣品進行了檢測。主要試劑DNA提取緩沖液(100 mmol/L Tris, 100 mmol/L EDTA, 100 mmol/L Na3
DNA提取－I：土壤的分子生物學特性
在前面的文章（Soil molecular biology），圍繞提取土壤樣品DNA、RNA相關問題做了簡單的引導介紹，比如PCR抑制因子、裂解注意事項等。今天將詳細介紹土壤微生物DNA提取的細節，以及如何使用MO BIO PowerSoil? DNA Isolation Kit獲得更好的提取效果。
PNAS：新型DNA分析策略助力土壤宏基因組研究
對于土壤微生物來說，這是最好的時代。雖然沒有人進行過準確的調查，但一勺土壤中就容納了數千億個微生物細胞，包含成千上萬的物種。密歇根州立大學(MSU)微生物生態學中心的特聘教授Jim Tiedje指出：“土壤是地球上最多樣的微生物棲息地，但我們很少了解土壤微生物的身份和功能。”Tiedje和M
土壤基因組DNA提取試劑盒使用說明
本試劑盒提供了從各種來源的土壤中快速簡便的提取基因組DNA的方法。土壤樣品中存在大量的抑制因子如腐殖酸、金屬離子等，這些物質即使微量存在于純化后的DNA中也會對下游反應，如對PCR、限制性酶切等產生影響。因而純化土壤DNA的關鍵在于如何有效的去除土壤中的抑制因子。采用本公司特有的DNA-only硅膠
實驗室檢驗檢測工具土壤dna提取試劑盒
土壤的成分包括礦物質、粘土等無機物、植物及植物的遺體、腐殖物質等土壤有機物以及在土壤中存在的微生物。從土壤中提取的DNA,是微生物、動植物遺體等的總DNA,同時,腐殖物質的性質與DNA很相似,DNA提取過程中會將腐殖等物質一起純化,采用傳統的DNA提取方法來除去腐殖物質等抑制因子是十分困難的。而這些
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA序列測定3
2．利用末端轉移酶和α-32P-ddNTP標記DNA的3ˊ-末端 在二價陽離子存在下，末端轉移酶催化dNTP加入DNA分子的3ˊ-羥基末端，如果作為底物的核苷酸經過修飾（如ddNTP），則可以在DNA的3ˊ-OH上僅加入一個核苷酸。對于雙鏈DNA片段，亦存在DNA的兩側均被標記問題，可通過上述同
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA序列測定1
㈣ DNA聚合酶 如前所述，選用合適的DNA聚合酶進行測序反應也是保證測序質量的重要因素之一。常用于雙脫氧末端終止法測序的有幾種不同的酶： 1．大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow片段） 此酶是最早用于建立Sanger測序的酶。但通常會有兩個問題：①Klenow片段的持續合成能力較
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA序列測定2
目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法（雙脫氧鏈終止法）和Maxam（1977）提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都同樣生成相互獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸，每組核苷酸都有共同的起點，卻隨機終止于一種（或多種）特定的殘基，形成一系列以某一特定核苷酸
OMNI－BeadRuptor－24－Elite研磨珠均質器應用于土壤樣品中DNA提取
OMNI BeadRuptor 24 Elite研磨珠均質器應用于土壤樣品中DNA提取應用筆記Omni國際土壤DNA試劑盒優于公司M土壤DNA分離試劑盒，用于從土壤樣品中提取DNAOmni國際有限公司Shari Garrett介紹土壤DNA的分子分析是檢測土壤微生物和微生物多樣性的直接解決方案。從土
漩渦振蕩器在土壤微生物中提取總DNA并純化應用
實驗概要從土壤微生物中提取總DNA并純化，高質量的DNA可用于后續文庫構建。主要試劑TENP緩沖液（50 mmol/L Tris, 20 mmol/L EDTA, 100 mmol/L NaCl, 1% PVP, pH 10.0）PBS緩沖液（137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L
DNA重組技術(DNA－Recombination)
一、DNA 的酶切與連接（1）酶切反應：同質粒DNA 的鑒定，只不過是質粒DNA 換為載體DNA 。若大量酶切，則成比例增加。（2）加2倍體積的預冷無水乙醇和1/10體積的3mol/l NaAc混勻，-20℃2h以上。（3）15000rpm離心15min，棄上清。（4）加入75%乙醇洗滌2次，離心棄
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組與鑒定2
（1）CaCl2處理以后的轉化: 當細菌處于0℃、二價陽離子（如Ca2+、Mg2+等）低滲溶液中時，細菌細胞膨脹成球形，處于感受態；此時轉化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復合物粘附于細胞表面，重組DNA在42℃短時間熱沖擊后吸附在細胞表面，在豐富培養基中生長數小時后，球狀細胞恢復原
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組與鑒定3
當多克隆位點有外源DNA片段插入時，破壞此酶的N端閱讀框架，產生無α互補功能的N端片段，因此在帶有外源DNA片段的細菌在含有IPTG/X-gal的培養基上呈白色，見圖7-11 。如果外源DNA插入片段相當短，不破壞β-半乳糖苷酶的氨基端氨基酸序列的閱讀框，有時產生的重組體菌落不呈白色而是呈淺藍色。4
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組的載體3
在作為載體時，這些噬菌體有一個很大的優點，即克隆到M13mp載體的外源DNA片段（雙鏈），在子代噬菌體便成為了單鏈形式。故應用M13mp進行克隆，可方便地分離到大量含有外源DNA某一單鏈的DNA分子。這種單鏈DNA可在下列工作中作模板：①主要用作雙脫氧鏈終止法進行DNA序列測定的模板；②制備僅有一條
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組的載體1
載體（vector）是攜帶靶DNA（目的DNA）片段進入宿主細胞進行擴增和表達的運載工具。常用的載體是通過改造天然的細菌質粒、噬菌體和病毒等構建而成。目前已構建成的載體主要有質粒載體、噬菌體載體、病毒載體和人工染色體等多種類型，亦可根據其用途不同分為克隆載體和表達載體二類。載體的構建和選擇應考慮以下
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組與鑒定1
重組DNA是在體外用限制性內切酶，將不同來源的DNA分子進行特異地切割，獲得的目的基因或DNA片段與載體重新連接，從而組成一個新的DNA雜合分子。重組的DNA分子能夠通過一定的方式進入相應的宿主細胞，在宿主細胞中進行無性增殖，獲得大量的目的基因或DNA片段，此過程稱基因克隆。重組的DNA分子也能夠在
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組的載體2
二、噬菌體載體作為細菌寄生物的噬菌體，大多數具有編碼多種蛋白質的基因，能利用宿主細胞的蛋白質合成體系，進行生長和增殖。構建的噬菌體載體，以λ噬菌體、M13和粘粒最為常用。㈠ λ噬菌體載體野生型λDNA是一種基因組為4.8 kb的線性雙鏈DNA，全部序列已知，共編碼50多個基因。其中約一半基因參與
DNA合成（DNA－synthesis－）技術介紹
蛋白質概念提出：DNA多肽合成（DNA synthesis ）：按照預定核苷酸的順序，將脫氧核苷酸逐個進行人工連接合成DNA鏈的方法。目前多是采用固相合成法，即是在多聚體支持物上從3′端延伸核苷酸，可自動化操作。)目前，oligo DNA合成一般都采用固相亞磷酰胺三酯法合成DNA片段，此方法具有高效
DNA－指紋的概念高變區DNA與DNA指紋
人的衛星DNA?或稱隨體DNA?是由一些短的DNA 片段（10bp 左右）多次重復所構成的。重復片段的組成和拷貝數在不同的個體及基因組的不同位置上不一樣。提取不同個體的基因組DNA 后，用其切點能識別序列為4 個堿基而又不切割該重復片段的限制性內切酶在重復片段的兩側切割基因組DNA ，然后將樣品進行
DNA－Fingerprinting,－DNA－Barcoding,－and－Next－Generation－Sequencing－...
DNA fingerprinting of plants has become an invaluable tool in forensic, scientific, and industrial laboratories all over the world. PCR has become
DNA連接酶(DNA－ligase)介紹
DNA連接酶是1967年在三個實驗室同時發現的。它是一種封閉DNA鏈上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA鏈的5'-PO4與另一DNA鏈的3'-OH生成磷酸二酯鍵。但這兩條鏈必須是與同一條互補鏈配對結合的(T4DNA連接酶除外)，而且必須是兩條緊鄰DNA鏈才能被DNA