染色體DNA的片段化
實驗概要瓊脂糖(agarose)或聚丙烯酰胺(PAGE)電泳是分離、鑒定和純化DNA的標準方法。瓊脂糖凝膠的分辨率比聚丙烯酰胺電泳低,但分離范圍廣,可以分離200 bp一50 kb的DNA。細胞凋亡時染色體從核小體間斷裂形成大小為180-200bp整數倍的片段,在瓊脂糖凝膠中電泳后可呈現出規則間隔180-200bp的特征性“梯形帶”。主要試劑1. 細胞裂解液:10 mmol/L Tris-HCL(pH 8.0),150mmol/LNaCl,10mmol/LEDTA,0.4%SDS,蛋白酶K 100ug/m1。2. RNase(10 mg/m1):RNase溶解于100 mmol/LTris-HCl(pH7.5)及15 mmol/L NaCl中。煮沸15 min后緩慢冷卻至室溫,-20℃儲存。3. TE緩沖液:Tris-HCl l0mmol/L(pH8.0),1 mmol/LEDTA(pH8.0)。4. 其他試劑:醋酸鈉(......閱讀全文
DNA重組
目的:簡單介紹了DNA重組技術的一些方法。包括重組質粒、PCR等。包括細胞結構、DNA,DNA如何改點等。
DNA測序
? ? ? ? ? ? ? ? 自動測序法 雙脫氧鏈末端終止法 非同位素銀染 鳥槍法 Maxam-Gilbert化學修飾法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法
DNA轉化
DNA轉化Chemical Transformation·?????????Transformation of Competent Cells (RbCl2 Method)?(Goldberg Lab)Very nice protocol for E. Coli transformation inc
DNA電泳
DNA電泳(主要內容如下)??Preparation of Agarose Gel and Electrophoresis??Extraction of DNA From Agarose Gel??Extraction of DNA from Acrylamide Gels??DNA Marker?
DNA凝膠電泳(DNA-agarose-gel-electrophoresis)
實驗原理瓊脂糖凝膠電泳是常用的用于分離、鑒定DNA、RNA分子混合物的方法,這種電泳方法以瓊脂凝膠作為支持物,利用DNA分子在泳動時的電荷效應和分子篩效應,達到分離混合物的目的。DNA分子在高于其等電點的溶液中帶負電,在電場中向陽極移動。在一定的電場強度下,DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應,即分
DNA指紋圖譜分析[DNA-Fingerprinting-]
一. 實驗目的1. 掌握DNA指紋圖譜技術的概念、原理和基本操作過程2. 學習DNA的限制性酶切的基本技術3. 掌握瓊脂糖凝膠電泳的基本操作技術,學習利用瓊脂糖凝膠電泳測定DNA片段的長度,并能對實驗結果進行分析。二. 實驗原理1984年英國萊斯特大學的遺傳學家Jefferys及其合作者首次將分離的
Quick-Yeast-DNA-Prep:-Isolation-of-Total-DNA-(genomic-and-plasmid)
Grow a 5 ml YPD O/N culture inoculated with a single yeast colony at 30 deg.Transfer culture to a small 13 x 100 glass tube. Spin down cells 2 min. in
循環腫瘤DNA比循環正常DNA矮半截
如今,人們開始利用液體活檢技術來診斷癌癥,以及監測治療效果,不過靈敏度是個問題。美國猶他州大學和華盛頓大學的研究人員近日在《PLOS Genetics》上發表文章,稱來源于腫瘤的DNA片段比來源于正常細胞的片段要短,這個特征可用于改善液體活檢。 猶他州大學的Hunter Underhill及其
可以DNA結合的酶DNA連接酶
DNA連接酶:是能夠使用來自ATP或NAD的化學能將先前切割或斷裂的DNA鏈聚集在一起的酶。連接酶在DNA滯后鏈復制中特別重要,因為它們將岡崎碎片組合成DNA鏈。連接酶在DNA修復和基因重組中也發揮重要作用。
高變區DNA與DNA指紋的關系
人的衛星DNA?或稱隨體DNA?是由一些短的DNA 片段(10bp 左右)多次重復所構成的。重復片段的組成和拷貝數在不同的個體及基因組的不同位置上不一樣。提取不同個體的基因組DNA 后,用其切點能識別序列為4 個堿基而又不切割該重復片段的限制性內切酶在重復片段的兩側切割基因組DNA ,然后將樣品進行
A型DNA與B型DNA的結構差異
A型DNA與B型DNA是在兩種環境下同種物質不同的形式。B型DNA:92%RH,鈉鹽,溶液和細胞中天然狀態中的DNA多以此狀態存在A型DNA:75%RH,鈉鹽A型DNA也是由反向的兩條多核苷酸鏈組成的雙螺旋,為右手螺旋,但螺旋體較寬而短,堿基與中心軸之傾角也不同,呈19度。
DNA的酶切與連接——DNA片段連接
實驗方法原理核酸片段可以通過連接酶的作用連接起來而獲得重組分子。實驗材料λDNA EcoT14I:由11條DNA片段組成試劑、試劑盒T4 DNA連接酶及其配套的10×連接緩沖液 0.5×TBE電泳緩沖液 6×Loading Buffer Goldview 瓊脂糖儀器、耗材電泳儀 水浴鍋 移液器 微波
DNA測序儀
DNA序列測定分手工測序和自動測序,手工測序包括sanger雙脫氧鏈終止法和maxam-gilbert化學降解法。自動化測序實際上已成為當今dna序列分析的主流。美國peabi公司已生產出373型、377型、310型、3700和3100型等dna測序儀,其中310型是臨床檢測實驗室中使用最多的一種型
DNA測序儀
DNA序列測定分手工測序和自動測序,手工測序包括sanger雙脫氧鏈終止法和maxam-gilbert化學降解法。自動化測序實際上已成為當今 dna序列分析的主流。美國pe abi公司已生產出373型、377型、310型、3700和3100型等dna測序儀,其中310型是臨床檢測實驗室中使用最多的一
DNA測序技術
目前還有一種基于半導體芯片的新一代革命性測序技術——Ion Torrent。該技術使用了一種布滿小孔的高密度半導體芯片, 一個小孔就是一個測序反應池。當DNA聚合酶把核苷酸聚合到延伸中的DNA鏈上時,會釋放出一個氫離子,反應池中的PH發生改變,位于池下的離子感受器感受到H+離子信號,H+離子信號再直
DNA作圖實驗
實驗材料?DNA試劑、試劑盒?限制酶緩沖液儀器、耗材?電泳儀實驗步驟 ? 用低頻率切割的不同限制性內切酶分別完全消化DNA。2.? 從每個反應取小份樣品作電泳分析,用已知的分子量標準作對照。剩余的樣品置于冰浴。3.? 比較分子量標準估算出DNA片段的長度,推導出每種限制性內切酶的酶切位點數目。4.?
DNA純化實驗
實驗方法原理 硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA,又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油、鹽離子等雜質因為沒有與DNA相似的特性,所以被分離開來。實驗材料?PCR產物試劑、試劑盒?PCR清潔試劑盒儀器、耗材?96孔DNA制備板96孔深孔板96孔V型底板實驗
葉綠體DNA分離
設備:Hitachi CS-150GXL或CS-120GXL微量超速離心機,S100AT6 轉頭,5PA 密封管(如果用4PC管,可接比例減少各層液量)溶液配制:A液:0.35Msorbitol(山梨醇),50mM Tris—Hcl (PH8.0) 25mM EDTA—Na2B液:5%(w/w)So
怎樣鑒定dna
DNA親子鑒定流程:1、DNA提取把樣本細胞核中所含有DNA提取出來,然后進行一定的純化,化除樣本中的雜質。2、PCR擴增PCR的中文名為聚合酶鏈式反應,簡單的說,PCR擴增這一步就是把我們所需要的片段通過酶促反應,在PCR儀上進行大量復制,放大到通過某些專用儀器可以看到的程度。3、后PCR反應這一
DNA-and-RNA-EXTRACTIONS
A protocol / method / schedule /procedure for extraction / isolation of both DNA and RNA from the same material typically plant leaf / leaves(See also
Yeast-DNA-Prep
Protocolgrow up yeast culture to appropriate density (near saturation)spin 1.5 mls of culture for 1 min in microfuge and aspirate off supernatantresus
Cosmid-DNA-Isolation
實驗概要Isolation of high yields of highly pure cosmid DNA using PureLink? HiPure Plasmid Purification Kits.實驗原理The ?PureLink? HiPure Plasmid Purification
Gel-Electrophoresis-of-DNA
What is Electrophoresis?Electrophoresis is a technique used in the laboratory that results in the separation of charged molecules. In this CyberLab we
DNA-methyltransferase-Assay
Methylated CpG island Amplification?Protocol written by Minoru Toyota2. Materials2.1. MCARestriction enzymes SmaI, XmaIT4 DNA ligaseTaq DNA polymerase
Lambda-DNA-Preparation
Lambda DNA PreparationThis is a plate method that gives very good yield for cloning. I have combined the Promega and Maniatis protocols.Solutions?T-TY
Preparing-Lambda-DNA
Preparing Lambda DNA1- Coliphage lambda DNA is a widely used vector for recombinant DNA. The middle third of its 48,000 bp contains no genes required
DNA純化實驗
PCR清潔試劑盒純化法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA,又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油
DNA-Sequencing-Gels
DNA Sequencing GelsBuffers and gel solutionsLong Ranger: we started using this in early 1995. Great stuff; the best thing is that the gels are not sti
DEPHOSPHORYLATION-OF-LINEARIZED-DNA
DEPHOSPHORYLATION OF LINEARIZED DNAALKALINE PHOSPATASE(CIP) DIGESTIONDigestion of protruding 5'-ends1. Precipitate digested DNA and resuspend in a
DNA-mobility-in-gels
1. Migration of marker dyes in native polyacrylamide non-denaturing gels Gel?% Bromophenol?blue?(BP) Xylene?cyanole?(XC) ??3.5 ?100 460 ??5.0