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  • GSTpulldown操作流程

    實驗概要體外檢測蛋白質與蛋白質之間相互作用。用于驗證兩個已知蛋白的相互作用,或者篩選與已知蛋白相互作用的未知蛋白。實驗原理利用重組技術將探針蛋白與GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通過GST與固相化在載體上的GTH(Glutathione)親和結合。因此,當與融合蛋白有相互作用的蛋白通過層析柱時或與此固相復合物混合時就可被吸附而分離。主要試劑NaCl, KCl,Na2HPO4,KH2PO4,Triton-100,IPTG(Merck分裝),PMSF(Amersco),Cocktaier(Merck 539134),Immobilized Glutathione(PIERCE 15160)實驗步驟1. 原核融合蛋白A的獲得1) 將編碼蛋白A與GST的重組質粒化轉BL21(DE3)菌株2) 挑取單個克隆到含有5mlLB( 100ug/mlAmp)的10ml試管里,......閱讀全文

    GSTpulldown操作流程

    實驗目的:體外檢測蛋白質與蛋白質之間相互作用。用于驗證兩個已知蛋白的相互作用,或者篩選與已知蛋白相互作用的未知蛋白。實驗原理:利用重組技術將探針蛋白與GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通過GST與固相化在載體上的GTH(Glutathione)親和結合。因此,

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    實驗材料 探針蛋白原核蛋白細胞蛋白組織蛋白提取物試劑、試劑盒 NaClKClNa2HPO4KH2PO4Triton-100IPTGPMSF(苯甲基磺酰氟)CocktaierImmobilized Glutathione無水乙醇儀器、耗材 定容瓶錐形瓶高速離心機低溫冰箱超聲儀EP管層析柜

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      實驗目的:體外檢測蛋白質與蛋白質之間相互作用。用于驗證兩個已知蛋白的相互作用,或者篩選與已知蛋白相互作用的未知蛋白。   實驗原理:利用重組技術將探針蛋白與GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通過GST與固相化在載體上的GTH(Glutathione)

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    利用重組技術將探針蛋白與GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通過GST與固相化在載體上的GTH(Glutathione)親和結合,已廣泛應用于分子生物學(1)證實兩種蛋白可能有相互作用(2)尋找能與已知蛋白發生相互作用的未知蛋白。實驗方法原理利用重組技術將探針蛋

    為什么要做gstpulldown實驗

    因為此方法簡單易行,操作方便。GST pull-down實驗是一個行之有效的驗證酵母雙雜交系統的體外試驗技術,近年來越來越受到廣大學者的青睞。其基本原理是將靶蛋白-GST(Glutathione-S-transferase谷胱苷肽巰基轉移酶)融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上,作為與目的蛋白親和的

    銀染的應用

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    研究揭示RNA甲基化調控斑馬魚母源mRNA穩定性機制

      斑馬魚母源-合子轉換 (maternal-to-zygotic transition, MZT)過程伴隨著母源RNA和蛋白質的降解以及合子基因組的激活(maternal-to-zygotic transition, ZGA)。已有研究表明多種關鍵因素通過母源和合子途徑促進母源mRNA降解,其中包

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