免疫復合物方法檢測酪氨酸蛋白激酶
實驗步驟基 本 方案 酪 氨酸 蛋白 激酶 的免 疫 沉淀 和自 身 磷 酸化 檢 測以下步驟可以釆用淋巴或非淋巴細胞、原代細胞或培養的細胞系、活化或非活化的細胞。材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)待檢測的細胞 冰預冷的 PBS含蛋白酶抑制劑的 I X 細 胞 裂 解 液（新鮮配置并于冰上保存）含蛋白酶抑制劑的 5 X 裂 解 液（細胞活化用，新鮮配制并于冰上保存）考馬斯蛋白檢測試劑（Pierce) 或類似試劑多克隆或單克隆的兔抗 src-相 關 T P K 抗 血 清（U B I 、 Oncogene Science 或 SantaCruz Biotechnology)對 照 血 清（Sigma) : 正 常 的 兔 血 清（如使用多克隆抗血清），或 同 型 IgG (如使用單克隆抗血清）Pansorbin ( 1 0 % 福 爾 馬 林 固 定 的 金 色 葡 萄 球 菌 ； Calbiochem) ， 或 蛋 白 A......閱讀全文
免－疫－復－合－物－方－法－檢－測－酪－氨－酸－蛋－白－激－酶
實驗步驟基 本 方案 酪 氨酸 蛋白 激酶 的免 疫 沉淀 和自 身 磷 酸化 檢 測以下步驟可以釆用淋巴或非淋巴細胞、原代細胞或培養的細胞系、活化或非活化的細胞。材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)待檢測的細胞 冰預冷的 PBS含蛋白酶抑制劑的 I X 細 胞 裂 解 液（新鮮配置并于冰上保存
蛋白質分離和分析——免－疫－印－跡－和－免－疫－檢－測
實驗步驟基 本 方 案 1 液體容器中的蛋白質印跡材 料待分析樣品標準分子質量蛋白質，預 染 型（Sigma 或 Bio-Rad) 或 生 物 素 化 型（Vector labs 或Sigma)轉移緩沖液無粉手套Scotch-Brite 墊 片（3M ) 或類似海綿Whatman 3M M 濾紙或類
抗－磷－酸－化－酪－氨－酸－的－印－跡－檢－測
實驗步驟基 本 方 案 抗 磷 酸 化 酪 氨 酸 印 跡 檢 測 的 準 備 及 分 析材 料一抗： lmg/m l 4 G 1 0 抗磷酸化酪氨酸單抗（UpstateBiotechnology) 或類似抗體P B S溶于 PBS/0. 0 2 % (m / V ) 疊 氮 鈉 的 5 0 % (
免－疫－球－蛋－白－融－合－蛋－白－的－構－建
實驗步驟?基 本 方 案 1 免疫球蛋白融合蛋白的構建材 料編碼靶基因的 D N A展開
B－細－胞－功－能－的－增－殖－檢－測－方－法
實驗步驟基 本 方 案 抗 I g M 與 L P S 刺激的 B 細胞增殖材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)純化的靜息 B 細 胞（單 元 2. 5)，采 用 Percoll 梯度離心制備V D M E M -10 完全培養基山羊抗 IgM (JacksonImmunoresearch) 或
ELISPOT方－法－檢－測－分－泌－細－胞－因－子－的－細－胞
實驗步驟基本方案材 料包被緩沖液洗液：含 0.25% (v/v) Tween 20 的 PBS 溶液阻斷緩沖液：含 5 % (m/V) BSA 或 FCS 的 PBS 溶液VRPMMO 完全培養基（或其他適宜培養基）分泌細胞因子的細胞（小鼠或人的）絲裂原，抗原或其他促細胞因子分泌的刺激物帶有標記物的
免－疫－球－蛋－白－M(IgM)和－免－疫－球－蛋－白－D(IgD)－的純化
實驗步驟基 本 方 案 1 用透析和凝膠過濾層析法純化 IgM此 法 純 化 的 IgM 可達到較好純度，可用于酶解、異 硫 氰 酸 鹽 熒 光 素（FITC) 標記 、生物素標記或放射性標記。材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)腹 水 或 單 克 隆 抗 體（MAb) 上 清（單 元 1.4)
免－疫－球－蛋－白－M(IgM)和－免－疫－球－蛋－白－D(IgD)－的純化實驗
實驗步驟備 選 方 案 1 硫 酸 銨 沉 淀 法 純 化 IgM此法適用于多數 IgM 抗體，尤其是一些在水中不能形成沉淀的 IgM 抗體。附 加 材 料（其 他 材 料 見 基 本 方 案 1 )飽和硫酸銨（SAS)硫酸銨結晶（CAS)硼酸緩沖液，可選備 選 方 案 2 甘 露 聚 糖 結 合
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗（三）
2.2 糖基化糖 基 化 是 一 種 常 見 的 P T M , 并 且 已 經 證 明 能 夠 影 響 酶 的 活 性 、蛋 白 質 定 位 、穩 定 性 、信 號 轉 導 、細 胞 黏 附 和 蛋 白 質 相 互 作 用 (Spiro, 2002k 目 前 已 經 發 現 在 腫 瘤 惡
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗2
二、用 于 鑒 定 P T M 的富 集 技 術2.1 磷酸化絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸殘基的可逆磷酸化也許是研究最為深人的 PT M 。蛋白質磷酸化信號網絡介導細胞對與不同的應激因子、生長因子、細胞因子以及細胞間相互作用作出響應。憐酸化還影響多種細胞進程，如增殖、凋亡 、遷移 、轉錄和蛋白質翻譯（W
酶－聯－免－疫－吸－附－實－驗2
十 字 交 叉 連 續 稀 釋 分 析 法 （criss-cross serial-dilution analysis) 測定試劑最適濃度實驗步驟展開
幾種多聚螯合物酶法
實驗概要本文介紹了三種多聚螯合物酶法：PowerVision法，ELPS法和EPOS法。實驗原理1. ?PowerVision系統的原理是連接抗體上緊密地連接上許許多多的酶分子，呈串珠狀排列，由于利用了一種小的呈線性或很小枝狀多功能試劑作為骨架分子，與酶和免疫球蛋白交聯，排列緊密，形成串珠狀多聚物，
幾種多聚螯合物酶法
實驗概要本文介紹了三種多聚螯合物酶法：PowerVision法，ELPS法和EPOS法。實驗原理1. ?PowerVision系統的原理是連接抗體上緊密地連接上許許多多的酶分子，呈串珠狀排列，由于利用了一種小的呈線性或很小枝狀多功能試劑作為骨架分子，與酶和免疫球蛋白交聯，排列緊密，形成串珠狀多聚物，
酶－聯－免－疫－吸－附－實－驗——抗體夾心ELISA法檢測可溶性抗原
實驗步驟抗 體 夾 心 ELISA 法檢測可溶性抗原該檢測方法比抗原直接結合到固相上的 ELISA 方法敏感性高 2?5 倍（圖 I.1. 3)。附 加 材 料（其他材料見基本方案）特 異 性 抗 體（單 克 隆 或 多 克 隆 ）或 者 來 自 抗 血 清 、腹 水 或 雜 交 瘤 上 清 液（單
酶－聯－免－疫－吸－附－實－驗——間－接－ELISA－法檢測特異性抗體
實驗步驟?該檢測方法使用毫克級的純化或半純化抗原，能篩選抗血清和雜交瘤上清液中的特異 性 抗 體（圖 1.1.1) 。 Img 純化抗原可用于 80?800 個微量滴定板的篩選。一、材 料顯色劑：堿 性 磷 酸 酶 標 記 的 蛋 白 A (Sigma 公 司），堿 性 磷 酸 酶 標 記 的 蛋
Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測（三）
四、化學發光信號4.1 信號捕捉雖然化學發光蛋白質印跡法十分常用，但是對于難于捕獲的信號的捕捉卻很棘手。蛋白質印跡法要用到一系列需要技巧的技術，因此許多因素都會導致無法捕捉到信號。由于變量較多 (表 33. 2)，問題印跡的問題診斷和排除就如同大海撈針一樣困難。傳統的方案在檢測某一個蛋白質時通常
Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測（一）
一、蛋白質印跡法蛋白質印跡 (Western Blotting) 法是在混合的復合物中鑒定和定量特定蛋白質的一種有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。這一技術對固定在硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白質樣本進行非直接的檢測。在常規的蛋白質印跡中，
第?三?方?檢?測?機?構?排?名?2?0?1?3
近年來，檢測行業成為全球發展較快的行業之一，年增長在15%左右。而我國檢測行業已經接近900億元人民幣的規模，年平均增長率在20%左右。目前獲得CNAS、CMA認可的實驗室已經超過2萬余家，現經權威機構綜合評估，評選出2013年中國市場第三方檢測機構排行榜。 1、瑞士通用公證行(
納氏試劑法測氨氮空白高
納氏試劑常溫是下略顯淡黃綠色的透明溶液，隨著暴光時間增加，逐漸生成黃棕色沉淀，溶液會漸漸變黃，納氏試劑配制時加藥順序不一樣，經常會出現顏色不同的現象，快速檢測試劑盒的方法一般也是納氏試劑法，或者水楊酸法，會與實驗室的結果有些偏差但不會相差過大，如果實驗結果和理論相差過大，可以檢查是否為實驗步驟出錯了
免－疫－球－蛋－白－G－(IgG)－片－段－的－水－解
一個新的抗體需要片段化的時候往往要進行摸索性的試驗。選擇反應時間的時候寧可保留部分抗體不被完全降解，這樣可以避免蛋白酶過分裂解后導致抗體結合位點的破壞 。實驗步驟木 瓜 蛋 白 酶 水 解 IgG 成 Fab 片段摸索性試驗此 法 適 用 于 小 鼠（任何亞類）、大鼠、人 、山羊、綿羊、馬 、雞 、
蛋白質分離和分析——免－疫－親－和－層－析
詳細闡述利用親和層析分離蛋白質的過程，進行蛋白質分析時，需將此規模縮小至微量離心管中進行免疫沉淀過程，對于單一的蛋白質或由相同亞基組成的蛋白質，經單向凝膠電泳后檢測到單一的 蛋 白 質 條 帶對熒光染色法進行了闡述，它主要用于磷蛋白和糖蛋白的檢測。為了確定蛋白質是否是特異性抗原，可采用相對應的抗體進
Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測2
四、化學發光信號4.1 信號捕捉雖然化學發光蛋白質印跡法十分常用，但是對于難于捕獲的信號的捕捉卻很棘手。蛋白質印跡法要用到一系列需要技巧的技術，因此許多因素都會導致無法捕捉到信號。由于變量較多 (表 33. 2)，問題印跡的問題診斷和排除就如同大海撈針一樣困難。傳統的方案在檢測某一個蛋白質時通常都是
納氏試劑法測氨氮的詳細步驟
一、原理碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應生成淡黃棕色膠態化合物，其色度與氨氮含量成正比，通常可在波長410—425nm范圍內測其吸光度，計算其含量。本法最低檢出濃度為0.025mg/L（光度法），測定上限為2mg/L。二、儀器1．500mL全玻璃蒸餾器 。2．50mL具塞比色管。3．分光光度計。4．
納氏試劑法測氨氮的詳細步驟
一、原理碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應生成淡黃棕色膠態化合物，其色度與氨氮含量成正比，通常可在波長410—425nm范圍內測其吸光度，計算其含量。本法最低檢出濃度為0.025mg/L（光度法），測定上限為2mg/L。二、儀器1．500mL全玻璃蒸餾器 。2．50mL具塞比色管。3．分光光度計。4．
雙磁法測糧食磁性金屬物
??? 盡管糧食質量監督管理部門十分反對面粉增白劑的使用，但從1990年代開始，各種添加劑還是相繼出現在小麥粉里。 ??? 這些年來，我們對市場上流通的小麥粉檢驗時發現，除特殊注明外，都不同程度地摻有添加劑。我們按《GB 5509—1985糧食、油料檢驗粉類磁性金屬物測定法》中第一法“磁性金屬物
什么叫螯合物，螯合物有什么特點
螯合物是具有環狀結構的配合物，是通過兩個或多個配位體與同一金屬離子形成螯合環的螯合作用而得到。螯合物最顯著的一種特性是其熱力學穩定性和熱穩定性。螯合環的穩定性與芳香環相似。螯合物可為不帶電荷的中性分子，也可為帶電的絡離子，前者易溶于有機溶液中，后者可溶于水中，此性質可用于分離和分析金屬離子。金屬離子
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 一、引言 蛋 白 質 翻 譯 后 修 飾 (P T
Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測
實驗步驟 一、蛋白質印跡法 蛋白質印跡 (Western Blotting) 法是在混合的復合物中鑒定和定量特定蛋白質的一種有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。這一技術對固定在硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯