離子交換層析實驗離子交換層析介質和層析柱的選擇
實驗步驟1. 離子交換凝膠的選擇依據：（1）根據蛋白質的pH只穩定范圍。蛋白質在等電點pI以上pH穩定時選擇陰離子交換凝膠介質，在pI以下pH的穩定時，則選用陽離子交換凝膠介質。（2）根據特分離蛋白質的分子大小。分子量在10 000~100 000 0 Da 的蛋白，選用如DEAE-Sephacel和DEAE-Sepharose樣凝膠；更大的分子，用Sephadex A-25或C-25。2. 柱子大小取決于聽用凝膠的結合容量，使用最頻繁的是1 cm、2 cm、2.5 cm 直徑，柱長通常少于之20 cm 對成分復雜的樣品，用更大的柱子，3. 有商品供應的預裝的FPLC離子交換柱可用。它們是Pharmacia的mono-Q（陰離子）和Mono-Q（陽離子）柱，有三種大小尺寸：0.5 mmx5 cm（25 m樣品）、1 cmx10 cm（200 mg 樣品）和 1.6 cmx10 cm（500 m......閱讀全文
離子交換層析實驗離子交換層析介質和層析柱的選擇
實驗步驟1. ?離子交換凝膠的選擇依據：（1）根據蛋白質的pH只穩定范圍。蛋白質在等電點pI以上pH穩定時選擇陰離子交換凝膠介質，在pI以下pH的穩定時，則選用陽離子交換凝膠介質。（2）根據特分離蛋白質的分子大小。分子量在10 000~100 000 0 Da 的蛋白，選用如DEAE-Sephace
離子交換層析介質的技術數據
關于離子交換層析實驗的介紹，對于常用到的層析介質的一些基本技術數據羅列如下： 離子交換介質名稱
離子交換層析實驗離子交換層析技術
離子交換層析實驗可應用于：（1）分離純化蛋白質；（2）分離氨基酸；（3）分離核酸、核苷酸及其它帶電荷的生物分子。實驗方法原理離子交換層析（Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC）是以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的
離子交換層析實驗
離子交換層析技術 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 離子交換層析（Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC）是以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離
離子交換層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 離子交換緩沖液儀器、耗材 離子交換層析柱梯度混合器電導表實驗步驟 1. ?配制離子交換層析緩沖液，安裝好層析柱，但以離子交換層析緩沖液取代其中的凝膠過濾緩沖液。?2. ?用起始梯度的緩沖液溶解含蛋白質混合物的樣品。3. ?棄去柱床上部的大部分緩沖液，并將樣品加在凝膠的頂
離子交換層析實驗
基本方案 離子交換層析介質和層析柱的選擇 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑
凝膠層析柱,離子交換柱,色譜吸附柱
?凝膠柱層層析又稱凝膠過濾，是一種按分子量大小分離物質的層析方法。該方法是把樣品加到充滿著凝膠顆粒的層析柱中，然后用緩沖液洗脫。大分子不能進入凝膠顆粒中的靜止相中，只留在凝膠顆粒之間的流動相中，因此以較快的速度首先流出層析柱，而小分子則能自由出入凝膠顆粒中，并很快在流動相和靜止相之間形成動態平衡，因
離子交換柱層析條件的選擇
對于分離一個特定的蛋白質，選擇什么樣的柱子、離子交換劑和流動相等需根據具體情況統籌考慮，主要是根據待分離蛋白質本身的理化性質和生物學性質確定。因此，在采用離子交換層析法進行蛋白質的分離之前，應當對待分離的蛋白質的性質有所了解，如等電點、相對分子質量、疏水性、生物活性及測定方法、溶解性、濃度、發生
離子交換層析實驗（四）
六、實例: 復雜蛋白質混合物的分離采用離子交換層析分離復合蛋白質混合物的一個典型例子就是從乳清中分離蛋白質。它可以進行一定程度的工業化放大，但也可作為一個廉價的檢測體系用于離子交換劑的評價。實際上, 我們也已經通過這種蛋白質混合物來比較不同供應商所提供的離子交換劑的吸附能力（Hahnetal.，
離子交換層析實驗（二）
三、結合條件根據離子交換平衡的一般性原理，很顯然，應在很低的鹽濃度條件下對蛋白質進行上樣 (圖 22.1)。鹽濃度也必須適當地調節，這具體取決于離子交換劑配體的密度。通常推薦的鹽濃度為 1 〇?100_〇 l/L 的緩沖液，其電導率相應為 1?4mS/cm。來源于細菌培養物的一般性原料或細胞
離子交換層析實驗（一）
一、實驗原理離子交換層析用于蛋白質分離的原理的最簡單解釋是，基于帶相反電荷分子間的相互吸引力。蛋白質表面所帶的電荷取決于其 Pl 和環境 PH。構成離子交換劑的基礎介質通常為多孔珠形式，可以為蛋白質的吸附提供足夠大的表面積。固定于基礎介質上的帶電配基可以帶正電荷也可以帶負電荷。為提高介質的結
離子交換層析實驗（三）
五、離子交換層析柱的操作以下是離子交換層析柱操作的一般性步驟。此外還需要一些專用步驟以確保離子交換劑在使用時保持穩定。這些步驟如下：’(1) 加載鹽溶液；(2) 平衡層析柱；(3) 蛋白質上樣；(4) 洗去未結合物質；(5) 洗脫；(6) 再生；(7) 消毒處理。一般操作條件如表 22.2 所 TK
離子交換柱層析分離核苷酸實驗_離子交換層析法
本實驗以酵母RNA 為材料, 將RNA 用堿水解成單核苷酸,再用離子交換柱層析進行分離, 最后采用紫外吸收法進行鑒定。旨在了解并掌握RNA 堿水解的原理和方法，掌握離子交換柱層析的分離原理和方法，熟練掌握紫外吸收分析方法。實驗方法原理本實驗以酵母RNA 為材料, 將RNA 用堿水解成單核苷酸,再用離
離子交換層析
離子交換層析利用含有能與周圍介質進行離子交換的不穩定離子的不溶 性基質來分離分離物質。 1、離子交換基質Adams 和Holnes 有1935 年通過酚、甲醛和磺酸縮 聚成不溶性樹脂，制成了第一個人工合成的離子交換材料。從此以后，人工 合成的離子交換樹脂日見增多（多數是從芳香族化合物合成
UniGel高載量離子交換介質的特點和應用
UniGel：高載量離子交換層析的新選擇 UniGel 高載量離子交換介質采用區別于傳統離子交換層析基質的表面修飾技術，運用特殊的延長臂和鍵合技術，使其載量獲得極大提升。離子交換（IEX）是根據生物分子表面電荷（種類、數目和分布）差異實現對不同生物分子的分離的方法。常規的離子交換層析介質
UniGel高載量離子交換介質的特點和應用
UniGel：高載量離子交換層析的新選擇 UniGel 高載量離子交換介質采用區別于傳統離子交換層析基質的表面修飾技術，運用特殊的延長臂和鍵合技術，使其載量獲得極大提升。離子交換（IEX）是根據生物分子表面電荷（種類、數目和分布）差異實現對不同生物分子的分離的方法。常規的離子交換層析介質
離子交換高效液相層析實驗_陽離子交換HPLC
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒磷酸鈉NaCl儀器、耗材層析柱HPLC進樣器實驗步驟1. ?用10倍柱床的已脫氣的水冼去柱子的貯存溶劑，并以10倍體積的高鹽緩沖液在低pH洗硅膠類或聚合體IEX柱。2. ?如按前述陰離子方案分離，那么應用磷酸鈉和磷酸鈉/NaCl緩沖液分離蛋白標準，采用以下液體進行梯度洗脫：
離子交換高效液相層析實驗_陰離子交換HPLC
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒Tris·ClNaCl磷酸鈉緩沖液儀器、耗材交換柱實驗步驟1. ?在使用IEX柱前，依次以序列溶液洗柱去除柱上吸附的蛋白質：10倍柱床的已脫氣水和10倍柱床的高鹽緩沖液，對聚合體IEX柱，洗柱液在8 ~10，對硅膠類柱，洗柱液pH在7~8。2. ?在室溫平衡IEX柱，對4
離子交換層析的原理和過程
離子交換層析中，基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有負電荷的稱之陽離子交換樹脂；而帶有正電荷的稱之陰離子樹脂。離子交換層析同樣可以用于蛋白質的分離純化。由于蛋白質也有等電點，當蛋白質處于不同的pH條件下，其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質，所以這類蛋白質被留在柱子上，然后通過
離子交換層析的原理和應用
離子交換層析(ion-exchange chromatography,IEC) 是在生物大分子提純中得到最廣泛應用的方法之一。離子交換層析分離蛋白質是根據在一定pH 條件下，蛋白質所帶電荷不同而進行的分離方法。常用于蛋白質分離的離子交換劑有弱酸型的羧甲基纖維素(CM纖維素) 和弱堿型的二乙基氨基乙基
離子交換柱層析法（層析實驗簡介）概略
一、??? 原理：有些高分子物質含有一些可以分離的基因，例如-SO3H，-COOH等，因此可以和溶液中的離子產生交換反應。如：R-SO3H＋M+ ———— R-S3M＋H+或R-NH3OH＋CL－? —————? R-NH3CL＋OH－這類高分子物質通稱離子交換劑，其中使用最普遍的是離子交換樹脂。由
UniGel高載量離子交換介質的特點和應用（一）
UniGel：高載量離子交換層析的新選擇UniGel 高載量離子交換介質采用區別于傳統離子交換層析基質的表面修飾技術，運用特殊的延長臂和鍵合技術，使其載量獲得極大提升。離子交換（IEX）是根據生物分子表面電荷（種類、數目和分布）差異實現對不同生物分子的分離的方法。常規的離子交換層析介質是通過直接在介
離子交換高效液相層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 Tris·ClNaCl磷酸鈉緩沖液儀器、耗材 交換柱實驗步驟 1. ?在使用IEX柱前，依次以序列溶液洗柱去除柱上吸附的蛋白質：10倍柱床的已脫氣水和10倍柱床的高鹽緩沖液，對聚合體IEX柱，洗柱液在8 ~10，對硅膠類柱，洗柱液pH在7~8。2. ?在室溫平衡IE
離子交換層析法濃縮蛋白實驗
實驗方法原理離子交換層析可用于濃縮蛋白質溶液。因為大多數蛋白質的等電點均低于 8， 所以它們可在 pH 值為 8 的弱離子強度溶液中被陰離子交換樹脂吸附。用離子強度大的溶液可簡單的將它們洗脫下來，達到濃縮的目的。實驗材料蛋白質溶液儀器、耗材離子交換樹脂層析柱實驗步驟1. 準備離子交換樹脂，裝配層析柱
離子交換層析實驗——基本方案
離子交換層析（Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC）是以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。實驗材料蛋白質試劑、試劑盒離子交換緩沖液儀器、耗材離子交換層析柱梯度混合器電導表實驗步驟1.
離子交換層析法濃縮蛋白實驗
實驗方法原理 離子交換層析可用于濃縮蛋白質溶液。因為大多數蛋白質的等電點均低于 8， 所以它們可在 pH 值為 8 的弱離子強度溶液中被陰離子交換樹脂吸附。用離子強度大的溶液可簡單的將它們洗脫下來，達到濃縮的目的。實驗材料 蛋白質溶液儀器、耗材 離子交換樹脂層析柱實驗步驟 1. 準備離子交換樹脂，裝
離子交換層析法濃縮蛋白實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 離子交換層析可用于濃縮蛋白質溶液。因為大多數蛋白質的等電點均低于 8， 所以它們可在 pH 值為 8 的弱離子強度溶液中被陰離子交換樹脂吸附。用離子強度大的溶液可簡單的將它們洗脫下來，達到濃縮的目的。
離子交換高效液相層析實驗
陰離子交換HPLC 陽離子交換HPLC ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、
抗原標記蛋白復合體純化實驗——用P11離子交換層析柱
實驗方法原理人 TATA 結合蛋白（TBP）能夠結合不同類型的細胞內蛋白以形成不同的蛋白復合體，如 SL1、TFIID 和 TFIIIB。這些蛋白質分別是通過 RNA 聚合酶 I、II 和 III 的轉錄所必要的。所有這些不同的蛋白復合體在核抽提物中都能找到。用一個層析步驟，如 P11 離子交換柱，
離子交換層析法
離子交換層析法是以具有離子交換性能的物質作固定相，利用它與流動相中的離子能進行可逆的交換性質來分離離子型化合物的一種方法。⒈ 離子交換劑預處理和裝柱 對于離子交換纖維素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的顆粒，以保證有較好的均勻度，對于已溶脹好的產品則不必經這一步驟。溶脹的交換劑使用前要用稀酸或稀堿處