自動細胞計數
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導入圖像
打開想要處理的圖像,這里我們以一張DAPI免疫熒光染色的照片為例進行說明。如下圖。
點擊File>Open>打開準備好的圖像,也可將圖片直接拖動到菜單欄,即可打開。如下圖。
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將圖像轉為8-bit
首先需要將圖片轉為黑白灰的圖像,方便后續識別細胞。
點擊Image>Type>8-bit,此時圖片即已被去色。
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調整閾值,去除背景,選中細胞
①點擊Image>Adjust>Threshold對閾值進行調整,主要是為了選擇細胞區域;
②因為利刃君這里選擇的是B&W(Black and White),所以圖像中黑色的區域就是已經選中的區域,這里可以進行更改,如若改為red,則紅色區域為選中的區域;
③另外我們發現Threshold窗口中有兩個調節框,我們可以通過左右拖動調節框中的滑塊對選擇的區域進行調整。原則是盡可能的包含所有的細胞同時去除背景中的雜質。
④拖動完成后點擊Apply,這樣閾值就設置好了。
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填補細胞核的空隙
在調節閾值減少背景的同時,可能細胞的一些不均勻部分也被減弱了,這時就需要進行空隙填補,使得細胞變成實心球形來使自動細胞計數的結果更加可靠。
點擊Process>Binary>Fill Holes即可,如果沒有出現細胞有空隙的情況,則這一步就不需要進行。
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打斷細胞核的重疊部分
細胞密度比較大時,通常會有細胞重疊或者貼近的情況。就會導致軟件識別時將兩個粘連在一起的細胞識別為一個,這時我們就需要利用Watershed自動識別重疊部分,隨后再將兩個細胞分離開來。
點擊Process>Binary>Watershed,此時可以看到粘連在一起的細胞已經被分開。
-陸-
自動分析、計數顆粒
點擊Analyze>Analyze Particles,出現Analyze Particles界面,根據處理圖像的不同,設置不同的參數。
Size:0.05-Infinity——指分析顆粒尺寸大于0.05(一定注意這里的單位是inch),一直到無窮大的顆粒。(根據細胞大小,以及結果好壞來更改)一般可以通過選框工具選擇最小的細胞,點擊Analyze>Measure來看一下其大小,如我們這里顯示Area為104,我們就可以設置Size大小為90-Infinity。
Circularity:0.00-1.00——指圓度,可以根據細胞形狀,調整需要的圓度,1.00為標準圓,一般情況下只根據Size進行限制就可以了。
Show:Overlay——指原本圖片上會展示出分析結果的外框。
Exclude on edges——處于邊緣的顆粒不計入。
設置完成后,點擊OK,即出現以下結果,Results窗口中顯示了統計出的細胞的數目,并且顯示了每個細胞的面積,一共為162個細胞。