⑴.5’ RACE-PCR:利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以連有SMART寡核營酸序列通 用接頭引物的Oligo(dT)30MN作為鎖定引物反轉錄合成標準第一鏈cDNA。然后用一個基因特異引物GSP2 (gene specific primer,GSP)作為上游引物,用一個含有部分接頭序列的通用引物UPM(universal primer,UPM) 作為下游引物,以cDNA第一鏈為模板,進行PCR循環, 把目的基因5‘末端的DNA片段擴增出來。
⑵.3’ RACE-PCR:利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以連有SMART寡核營酸序列通用接頭引物的Oligo(dT)30MN作為鎖定引物反轉錄合成標準第一鏈cDNA。然后用一個基因特異引物GSP1 (gene specific primer,GSP)作為上游引物,用一個含有部分接頭序列的通用引物UPM(universal primer,UPM) 作為下游引物,以cDNA第一鏈為模板,進行PCR循環, 把目的基因3‘末端的DNA片段擴增出來。