慢病毒包裝的技術原理及現狀
慢病毒載體（Lentiviral vector）較逆轉錄病毒載體有更廣的宿主范圍，慢病毒能夠有效感染非周期性和有絲分裂后的細胞。慢病毒載體能夠產生表達siRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性細胞、干細胞、受精卵以及分化的后代細胞中表達siRNA/miRNA,實現在多種類型的細胞和轉基因小鼠中特異而穩定的基因表達的功能性沉默，為在原代的人和動物細胞組織中快速而高效地研究基因功能，以及產生特定基因表達降低的動物提供了可能性。慢病毒作為siRNA/miRNA的攜帶者，不但具備特異性地使基因表達沉默的能力，而且充分發揮了慢病毒載體自身所具備的優勢，為基因功能的研究提供了更強有力的工具。 慢病毒包裝的原理 慢病毒（Lentivirus）是逆轉錄病毒的一種。構建的siRNA / miRNA慢病毒載體，與化學合成的siRNA 和基于瞬時表達載體構建的普通 siRNA 載體相比，一方面可以擴增替代瞬時表達載體使用，另一方面，......閱讀全文
慢病毒怎么純化和濃縮
慢病毒濃縮后沉淀用多少體積1%bsa重懸慢病毒濃縮后沉淀用多少體積1%bsa重懸慢病毒濃縮后沉淀用多少體積1%bsa重懸
關于慢病毒腦炎的簡介
慢病毒腦炎是一類具傳染性的侵襲中樞神經系統(CNS)的變性疾病。自1995年英國發現瘋牛病（mad cow disease，MCD）以來，迄今已在許多國家流行，由于該類疾病具有傳染性，具有相似的神經病理學改變，也稱為可傳播性海綿狀腦病(transmisslble spongiform encep
慢病毒轉染肝細胞方法
Lentivirus Transduction of Hematopoietic CellsMing-Jie Li and John J. RossiDivision of Molecular Biology, Beckman Research Institute of the City of Ho
慢病毒的濃縮與純化
實驗概要本文介紹了慢病毒濃縮與純化的兩種方法：超速離心沉淀法，PEG-8000濃縮法。實驗材料慢病毒上清液實驗步驟超速離心沉淀法： 1. 取6個Ultra-clear SW28離心管，用70%乙醇消毒后，放在超凈工作臺中打開紫外燈繼續消毒30分鐘； 2. 每個Ultra-clear SW28離心管中
慢病毒的濃縮與純化
方法一 超速離心沉淀法1. 取6個Ultra-clear SW28離心管，用70%乙醇消毒后，放在超凈工作臺中打開紫外燈繼續消毒30分鐘。2. 每個Ultra-clear SW28離心管中加入約32ml的預先處理的病毒上清液。3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。將移液管一
關于慢病毒的基本概述
慢病毒屬是反轉錄病毒科下的一個屬，包括8種能夠感染人和脊椎動物的病毒，原發感染的細胞以淋巴細胞和巨噬細胞為主，感染個體最終發病。慢病毒感染的顯著特點是感染個體在出現典型的臨床癥狀之前，大多經歷長達數年的潛伏期，之后緩慢發病，因此這些病原體被稱為慢病毒。例如人類免疫缺陷病毒(HIV)、猴免疫缺陷病
慢病毒和其他病毒的特征比較介紹
常用的病毒載體有腺病毒、逆轉錄病毒和慢病毒。逆轉錄病毒載體只能感染分裂期細胞，而且容量有限，腺病毒一般不能整合到染色體上，只能進行瞬時感染。與其它逆轉錄病毒相比，慢病毒（LV）具有可以感染非分裂期細胞、容納外源性基因片段大，可以長期表達等顯著優點。慢病毒不產生任何有效的細胞免疫應答，可作為一種體
慢病毒和假病毒有什么區別
裝甲病毒（假病毒）是將特定的核酸片段包裹于病毒外殼蛋白內，國外已廣泛應用于核酸檢測試劑、基因診斷試劑和科研試劑的對照。國內大多數聲稱裝甲病毒（假病毒）的多為慢病毒，慢病毒仍有感染性；裝甲病毒（假病毒）與慢病毒不同，由MS2噬菌體外殼蛋白包裹外源核酸片段，無感染性，無自主復制能力，生物安全性高，核酸穩
腺病毒載體綜述2
其他療法??? 隨著高齡人口的增加，對于人神經退化疾病如帕金森氏病的治療提出了一個重要的挑戰。腺病毒，因其可以感染有絲分裂后的細胞，同時具有潛在的高轉導效率和在中樞神經系統免疫特惠區（immunologically privileged site）中的低病原性，因此是進行神經疾病基因治療的有效載體。
腺病毒載體的分類
第一代腺病毒載體：一般將E1或E3基因缺失的腺病毒載體稱為第一代腺病毒載體，此類型載體在未經過純化時可引發機體產生較強的炎癥反應和免疫反應，純化后可以安全使用，體內表達周期可達4周。第二代腺病毒載體：E2A或E4基因缺失的腺病毒載體被稱為第二代腺病毒載體，產生的免疫反應較弱其載體容量和安全性方面有所
第二代慢病毒和第三代慢病毒的區別
第二代慢病毒載體系統是在第一代基礎的改進，在包裝質粒中刪去了HIV的所有附屬基因。這些附屬基因的去除并不影響病毒的滴度和轉染能力，同時增加了載體的安全性。第三代慢病毒載體系統又增加了兩個安全特性：一是構建了自身失活的慢病毒載體，即刪除了U3區的3’ LTR，使載體失去HIV-1增強子及啟動子序列，即
病毒包裝技術——腺病毒載體的制備
1 菌液的準備1.1. 取含目的質粒的甘油菌液（-80℃或-20℃冰箱中），待菌液融化后，在超凈臺用接種環劃線于氨芐抗性的平板上，37℃倒置培養12-16h。待平板長出菌落，挑選生長狀態良好的單克隆菌落。若無目的質粒的菌液，則需取庫存質粒進行轉化，然后挑單克隆搖菌。1.2. 將單克隆接種于5ml氨芐
病毒包裝技術1——病毒與非病毒載體介紹
基于轉化醫學的研究理念，銳賽知道，每一項臨床疾病的致病源頭或表象最初都是由個體體內某個基因的突變導致了。所以每一項臨床疾病的研究，整體課題項目開展的最初源頭也必須從一個基因開始。 銳賽在多年的轉化醫學研究中，在于各個臨床醫師的整體項目合作中，探討得出的不僅是轉化醫學臨床研究課題的整體思路，
簡述慢病毒腦炎的診斷標準
診斷可采用以下標準： ①在2年內發生的進行性癡呆； ②肌陣攣、視力障礙、小腦癥狀、無動性緘默等四項中具有其中兩項； ③腦電圖周期性同步放電的特征性改變： 具備以上三項可診斷為很可能（probable）CJD； 僅具備①②兩項，不具備第三項診斷可能（possible）CJD；如患者腦活檢
關于慢病毒腦炎的病理介紹
大體可見腦呈海綿狀變，皮質、基底節和脊髓萎縮變性；顯微鏡下可見神經元丟失、星形膠質細胞增生、海綿狀變性，即細胞胞漿中空泡形成和感染腦組織內可發現異常PrP淀粉樣斑塊，無炎癥反應。變異型CJD的病理學改變為海綿狀變性以丘腦最為明顯，且海綿狀區域出現的PrP陽性的淀粉樣斑塊與傳統的類型不同。
教你秒懂如何使用慢病毒
病毒包裝是生物醫學研究中的一大利器。通過病毒我們可以高效地讓我們要研究的基因在目標細胞中過表達或者特異性地敲低細胞中的目標基因。科研中用到的病毒主要有慢病毒、腺病毒、腺相關病毒。根據各種病毒不同的特性，不同的課題需要包裝不同的病毒。比如，腺相關病毒更適合進行動物在體研究。腺病毒具有包裝容量大、適
關于慢病毒腦炎的分類介紹
CJD分為散發型、醫源型(獲得型)、遺傳型和變異型等四種類型。 Creutzfeldt-Jakob病(CJD)是最常見的人類朊蛋白病，主要累及皮質、基底節和脊髓，故又稱皮質-紋狀體-脊髓變性(corticostriatospinal degeneration)，也稱為亞急性海綿狀腦。臨床以
關于慢病毒的相關實驗介紹
一、實驗目的 對于一些按常規方法難以轉染甚至無法轉染的細胞，通過病毒介導的實驗能夠大大提高基因的轉導效率，以達到目的基因的高效瞬時表達。 二、實驗流程 1. 根據目的基因相關信息（序列，序列號等），構建含有外源基因或siRNA的重組載體； 2. 對于測序正確的重組質粒，提取和純化高質量的
教你秒懂如何使用慢病毒
病毒包裝是生物醫學研究中的一大利器。通過病毒我們可以高效地讓我們要研究的基因在目標細胞中過表達或者特異性地敲低細胞中的目標基因。科研中用到的病毒主要有慢病毒、腺病毒、腺相關病毒。根據各種病毒不同的特性，不同的課題需要包裝不同的病毒。比如，腺相關病毒更適合進行動物在體研究。腺病毒具有包裝容量大、適合在
概述慢病毒的基本應用
慢病毒也被廣泛地應用于表達RNAi的研究中。由于有些類型細胞脂質體轉染效果差，轉移到細胞內的siRNA半衰期短，體外合成siRNA對基因表達的抑制作用通常是短暫的，因而使其應用受到較大的限制。采用事先在體外構建能夠表達siRNA的載體，然后轉移到細胞內轉錄siRNA的策略，不但使脂質體有效轉染的
使用慢病毒的注意事項
使用慢病毒注意事項?1. 病毒操作時最好使用生物安全柜。如果使用普通超凈工作臺操作病毒，請不要打開排風機。?2. 病毒操作時請穿實驗服，帶口罩和手套。?3. 操作病毒時特別小心不要產生氣霧或飛濺。如果操作時超凈工作臺有病毒污染，請立即用70%乙醇加1%的SDS 溶液擦拭干凈。接觸過病毒的槍頭，離心管
慢病毒使用操作手冊
一、慢病毒的儲存與稀釋:1. 病毒的儲存：收到病毒液后在很短時間內即使用慢病毒進行實驗，可以將病毒暫時放置于4 ℃保存；如需長期保存請放置于-80℃（病毒置于凍存管，并使用封口膜封口）① 病毒可以存放于-80℃ 6個月以上；但如果病毒儲存時間超過6個月，建議在使用前需要重新滴定病毒滴度。② 反復凍融
慢病毒轉染細胞的操作步驟
相關專題慢病毒包裝技術專題一、慢病毒 轉染貼壁細胞實驗方法1、慢病毒轉染前18-24小時，將貼壁細胞 以1×10^5/孔鋪到24孔板中。使細胞在慢病毒轉染時的數量為2×10^5/孔左右。2、第二天，用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鮮培養基 替換原培養基，加入適量病毒懸液。37℃孵育
如何摸索慢病毒最佳MOI值
MOI （multiplicity of infection），即感染復數，指的是感染時病毒與細胞數量的比值。一般認為MOI是一個比值，沒有單位，其實其隱含的單位是pfu number/cell。但對于某些病毒如AAV病毒，無法用pfu表示病毒的數量，而是采用TU、IU、病毒顆粒（viral p
慢病毒轉染細胞的操作步驟
相關專題慢病毒包裝技術專題一、慢病毒 轉染貼壁細胞實驗方法1、慢病毒轉染前18-24小時，將貼壁細胞 以1×10^5/孔鋪到24孔板中。使細胞在慢病毒轉染時的數量為2×10^5/孔左右。2、第二天，用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鮮培養基 替換原培養基，加入適量病毒懸液。37℃孵育
如何摸索慢病毒最佳MOI值？
MOI （multiplicity of infection），即感染復數，指的是感染時病毒與細胞數量的比值。一般認為MOI是一個比值，沒有單位，其實其隱含的單位是pfu number/cell。但對于某些病毒如AAV病毒，無法用pfu表示病毒的數量，而是采用TU、IU、病毒顆粒（viral p
腺病毒載體有什么缺陷
它的優點體現在轉基因效率高，通過體外實驗檢測結果顯示，它能達到將近100%的轉導效率，能轉到不同類型的人組織細胞。它的缺點體現在：第一，基因組不能整合到宿主基因組上。第二，感染范圍較廣，缺乏明顯的靶向性，有可能會讓人的正常組織細胞被感染，產生一定不良反應。第三，它跟機體靶向細胞結合的同時會對異己抗原
關于病毒載體的基本介紹
病毒載體可將遺傳物質帶入細胞，原理是利用病毒具有傳送其基因組進入其他細胞，進行感染的分子機制。可發生于完整活體（in vivo）或是細胞培養（in vitro）中。可應用于基礎研究、基因療法或疫苗。
腺相關病毒的載體特點
安全性好對肌肉、肝臟、神經組織等感染效率高載體自身免疫原性低長期表達比較穩定,易于保存和運輸缺點：容量較小
腺相關病毒載體的簡介
腺病毒相關病毒(adeno-associated virus，AAV)是一類單鏈線狀DNA缺陷型病毒。其基因組DNA小于5 kb，無包膜，外形為裸露的20面體顆粒。AAV不能獨立復制，只有在輔助病毒（如腺病毒、單純皰疹病毒、痘苗病毒）存在時，才能進行復制和溶細胞性感染，否則只能建立溶源性潛伏感染