痘苗病毒儲液制備
實驗方法原理 實驗材料 懸浮培養的 HeLa S3 細胞痘苗病毒試劑、試劑盒 完全 MEM-10 和 MEM-2.50.25 mg ml 胰酶儀器、耗材 Sorvall H-6000A 轉子150 cm2 組織培養瓶CO2 培養箱實驗步驟 1. 用血細胞計數器對懸浮培養的 HeLa S3 細胞進行細胞計數。2. 將 5×105 個細胞室溫 1800 g，離心 5 min，棄上清。3. 將細胞懸浮于 25 ml 37℃ 完全 MEM-10 培養基中，放入 150 cm2 組織培養瓶中，將其放入 5% CO2 加濕培養箱中 37℃ 培養過夜。同樣，也可使用 150 cm2 組織培養瓶中貼壁培養的單層細胞（見「細胞培養實驗」基本方案 1），直接進行步驟 4。4. 在使用前，將一定體積的痘苗病毒儲液與 0.25 mg/ml 胰酶混合，渦旋混勻。在 37℃ 水浴鍋中保溫 30 min， 并在保溫過程中每隔 5～10 min 渦旋混......閱讀全文
痘苗載體轉染細胞實驗——DOTAP－法
實驗方法原理將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，外源基因的兩端為痘苗病毒基因組非必需基因片段。隨后，將重組質粒轉染病毒感染的細胞，痘苗病毒基因組與質粒上同源的部分發生同源重組。應用適當的篩選方案，經幾輪噬斑純化，從細胞裂解物中獲得重組病毒。實驗材料pSCll／pRB21／pSC65／pLW9
表達蛋白檢測實驗_點印跡法
實驗方法原理本方案用DNA點跡雜交檢測噬斑以鑒定重組病毒。像點跡雜交一樣，將感染細胞裂解物印跡在硝酸纖維素膜上（可參考「痘苗DNA檢測實驗」中「斑點雜交法」）。用可以識別外源基因表達蛋白的抗體與膜一起孵育，用125I 標記的蛋白 A 檢測結合的抗體，還可應用化學發光檢測系統，如 Amersham E
桿狀病毒毒種貯液的制備
實驗材料?桿狀病毒試劑、試劑盒?胎牛血清重組病毒儀器、耗材?培養箱培養瓶轉子實驗步驟 從單層培養中制備：?1a.? 以毎瓶1.8×107 Sf9細胞的密度，將細胞接種于兩個150 cm2 培養瓶，在含10%胎牛血清的完全培養液中培養。于27℃讓細胞貼壁3 h，然后移去完全培養液。以感染復數為
痘苗DNA檢測實驗——Southern－雜交法
實驗方法原理以前，用 HindIII 限制性內切核酸酶消化鑒定痕苗病毒 DNA。大部分的外源基因插入重組病毒的 TK 基因中，TK 基因位于 HindIII 5.1 kb 的 J 片段上。這樣在重組病毒中，如果插入片段上沒有 HindIII 內切酶位點，則J片段就會增大。如果缺乏 HindIII 5
痘苗DNA檢測實驗
實驗方法原理 實驗材料 貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒 PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇DNA 提取緩沖液乙酸鈉乙醇PCR 擴增緩沖液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培養基完全 MEM-10／BrdU 培養基篩選試劑4
痘苗DNA檢測實驗
PCR 法 斑點雜交法 Southern 雜交法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料
怎么固定儲液器？
儲液器各部件間一般采用釬焊的連接方式固定。因為釬焊是采用液相溫度（熔點）比母材固相溫度低的金屬材料作為釬料，將零件和釬料加熱到釬料熔化，利用液態釬料潤濕母材，填充接頭間隙并與母材相互溶解和擴散而實現連接零件的方法。 釬焊的優點 a)、釬焊接頭平整光滑，外形美觀。 b)、釬焊加熱溫度較低，對
桿狀病毒毒種貯液的制備實驗
桿狀病毒是一類具有囊膜包裹的雙鏈環狀DNA病毒，其基因組大小為80~180 kb，在自然界中以節肢動物作為專一性宿主進行感染和傳播。實驗材料桿狀病毒試劑、試劑盒胎牛血清重組病毒儀器、耗材培養箱培養瓶轉子實驗步驟從單層培養中制備：?1a. ?以毎瓶1.8×107?Sf9細胞的密度，將細胞接種于兩個15
表達蛋白檢測實驗
實驗方法原理 當重組病毒通過噬斑純化和擴增后，免疫印跡可用于鑒定重組蛋白，并檢測其是否有預期的大小以及是否從感染細胞中分泌。下面的步驟是介紹檢測非分泌性（細胞內）蛋白的，如果重組蛋白是分泌到培養基中的，可按注解中的步驟操作。實驗材料 生長至匯片的單層 BS-C-1 細胞重組痘苗病毒儲液試劑、試劑盒
表達蛋白檢測實驗_免疫印跡法
實驗方法原理當重組病毒通過噬斑純化和擴增后，免疫印跡可用于鑒定重組蛋白，并檢測其是否有預期的大小以及是否從感染細胞中分泌。下面的步驟是介紹檢測非分泌性（細胞內）蛋白的，如果重組蛋白是分泌到培養基中的，可按注解中的步驟操作。實驗材料生長至匯片的單層 BS-C-1 細胞重組痘苗病毒儲液試劑、試劑盒完全
表達蛋白檢測實驗
免疫印跡法 免疫沉淀法 點印跡法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 當重組病毒通過噬斑純化和擴增后，免疫印跡可用于鑒定重組蛋白，并檢測其是否有預期的大小以及是
表達蛋白檢測實驗_免疫印跡法
實驗方法原理當重組病毒通過噬斑純化和擴增后，免疫印跡可用于鑒定重組蛋白，并檢測其是否有預期的大小以及是否從感染細胞中分泌。下面的步驟是介紹檢測非分泌性（細胞內）蛋白的，如果重組蛋白是分泌到培養基中的，可按注解中的步驟操作。實驗材料生長至匯片的單層 BS-C-1 細胞重組痘苗病毒儲液試劑、試劑盒完全
痘苗DNA檢測實驗——PCR－法
除了 PCR 和 Southern 雜交可以檢測病毒 DNA 外，也可以利用 DNA 點跡雜交方法檢測在分離的噬斑中的重組病毒。本實驗主要介紹用這3種方法來檢測痘苗DNA。實驗材料貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇
T7RNA聚合酶系統基因表達實驗（二）
單病毒感染OST7-1細胞實驗方法原理OST7-1 細胞來源于鼠 L929 細胞，能在細胞質中持續表達噬菌體 T7 RNA 聚合酶，因此，應用此細胞系無需用 vTF7-3 感染細胞。實驗材料貼壁培養的單層 OST7-1 細胞含有 pT7 控制的外源基因的重組病毒儲液試劑、試劑盒完全 MEM-2.5
病毒包裝技術——腺病毒載體的制備
1 菌液的準備1.1. 取含目的質粒的甘油菌液（-80℃或-20℃冰箱中），待菌液融化后，在超凈臺用接種環劃線于氨芐抗性的平板上，37℃倒置培養12-16h。待平板長出菌落，挑選生長狀態良好的單克隆菌落。若無目的質粒的菌液，則需取庫存質粒進行轉化，然后挑單克隆搖菌。1.2. 將單克隆接種于5ml氨芐
病毒透射電鏡病毒標本制備
實驗方法原理 病毒等微小顆粒標本可取其培養物經稀釋或分離提純后直接滴于附有支持膜的載網上用電鏡觀察。實驗材料 病毒試劑、試劑盒 稀釋液儀器、耗材 透射電鏡實驗步驟 懸液應盡量除去雜質如培養基殘渣，細胞碎片、糖類及各種鹽類的結晶等，這些雜質的存在會干擾染色及電鏡觀察。用該法的缺點是由于電子穿透能力很弱
關于儲液器的要求的介紹
1、氣密性：4.15MPa下保壓5分鐘無泄漏； 2、內部雜質含量：與制冷劑接觸表面的雜質含量不大于80mg/m； 3、耐壓強度：在6.23MPa下無變形和滲漏； 4、破壞壓力：在9.35MPa下無滲漏或破裂； 5、晶粒度：焊接部位銅管平均晶粒度不大于0.15mm； 6、儲液器內部：不含
以毒攻毒殺死腫瘤，這項作價千萬元成果獲批臨床
“我們的成果一旦邁入產業化，腫瘤患者只需打一針就有望治愈，費用將是現在的幾十分之一。”浙江理工大學生命科學與醫藥學院教授李恭楚的這個愿望即將實現。日前，他團隊研發的腫瘤藥物“GC001溶瘤痘苗病毒注射液”正式獲得國家藥品監督管理局臨床試驗批件。“溶瘤痘苗病毒改造技術是浙江理工大學首個技術作價成果，也
制備細胞裂解液
實驗流程：1. 收集胰蛋白酶消化的細胞并離心，用PBS清洗。2. 用100μl 裂解緩沖液冰浴溶解沉淀10min（每500000個細胞20μl裂解緩沖液）。3. 10000rpm，4°C離心10min，取上清轉移至新管。4. 用考馬斯亮藍法檢測蛋白質濃度。5. 用裂解緩沖液將溶液濃度調到5mg/ml
什么是制備與半制備液相
制備與半制備主要是指待制備樣品的量來區別，1克以上是制備級別，100毫克到1克之間是半制備級別
離子色譜儲液器的選擇與使用
?儲液器是盛裝淋洗液或淋洗液組分的容器，制作的材料應對淋洗液呈完全惰性，溶出物低，一般是由聚乙烯材料制成。儲液器帶有脫氣裝置或惰性氣體保護措施以及攪拌器等，以便有小弟脫除淋洗液中的氣體。儲液器是離子色譜系統中操作比較簡單的部件，但使用不當也可能給測量工作帶來問題。? 儲液器的容積大小要根據使用淋洗液
痘苗DNA檢測實驗——斑點雜交法
實驗材料貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒NaOHTris ? Cl2×SSCPBS胰酶／EDTA干冰／乙醇DNA 提取緩沖液乙酸鈉乙醇PCR 擴增緩沖液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培養基完全 MEM-10／BrdU
新型儲能復合材料制備：向絲瓜海綿學習結構
探索低成本、短流程、環境友好、性能良好的相變復合材料具有重要意義。近日，江南大學紡織科學與工程學院教授蔡以兵課題組從絲瓜海綿結構中獲得啟示，用一種簡單的方法制備出了一種高性能相變符合材料。相關成果3月15日在線發表于美國化學會的《能源與燃料》上。論文第一作者為副教授李林剛。 可再生生物質絲瓜海
病毒透射電鏡病毒標本制備實驗4
直接取材鏡檢法實驗材料病毒試劑、試劑盒磷鎢酸儀器、耗材透射電鏡實驗步驟為了進行天花、水痘、皰疹等病毒的臨床快速診斷，可用毛細吸管直接刺入病人皮膚皰疹內吸取少量泡液，立即滴于有膜的銅網上，稍干后即用 1%-2% 的磷鎢酸溶液進行負染，待干后立即用電鏡觀察。于電鏡下常可于短時間內發現典型的病毒顆粒。注意
病毒透射電鏡病毒標本制備實驗1
懸滴標本法實驗方法原理病毒等微小顆粒標本可取其培養物經稀釋或分離提純后直接滴于附有支持膜的載網上用電鏡觀察。實驗材料病毒試劑、試劑盒稀釋液儀器、耗材透射電鏡實驗步驟懸液應盡量除去雜質如培養基殘渣，細胞碎片、糖類及各種鹽類的結晶等，這些雜質的存在會干擾染色及電鏡觀察。用該法的缺點是由于電子穿透能力很弱
病毒透射電鏡病毒標本制備實驗3
免疫吸附法實驗方法原理有時由于病毒量少，用普通懸滴法在電鏡下難以發現稀少散在的病毒粒子，則可用免疫吸附電鏡法。主要是利用相應的病毒抗血清來吸附病毒，用本法檢測病毒，快速、靈敏、特異性強，是可靠的電鏡病毒診斷技術之一，也可用于病毒快速診斷。實驗材料病毒試劑、試劑盒磷鎢酸儀器、耗材透射電鏡實驗步驟將抗病
病毒包裝技術5——腺病毒載體的制備介紹
1 菌液的準備 1.1. 取含目的質粒的甘油菌液（-80℃或-20℃冰箱中），待菌液融化后，在超凈臺用接種環劃線于氨芐抗性的平板上，37℃倒置培養12-16h。待平板長出菌落，挑選生長狀態良好的單克隆菌落。若無目的質粒的菌液，則需取庫存質粒進行轉化，然后挑單克隆搖菌。 1.2. 將單
病毒透射電鏡病毒標本制備實驗2
實驗方法原理病毒研究中用磷鎢酸染色后發現在黑色背景中病毒粒子如同一個亮晶晶的「空洞」。爾后用磷鎢酸對飛噬菌體染色也見到同樣的現象，即將這種現象稱為「負染色」。負染色是一種反襯染色，即高密度物質如重金屬磷鎢酸、醋酸鈾等在透射電鏡下形成黑色的背景反襯低密度的標本如病毒為白色透亮，從而清楚地顯示出被襯物的
病毒免疫熒光實驗_病毒染色標本的制備
實驗材料待檢測病毒試劑、試劑盒丙酮0. 01mol L PBS95%乙醇二甲苯儀器、耗材玻片實驗步驟1. 培養細胞小玻片標本的制備 根據所檢測病毒種類，選擇敏感細胞進行培養，如乙型肝炎病毒用乳地鼠腎細胞 (BHK21 細胞）培養，森林腦炎病毒用綠猴腎細胞 (Vero 細胞）培養，登革熱病毒用白紋伊蚊
重組MVA活體免疫染色實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 活體免疫染色可用于檢測改造的痘苗病毒Ankara （MVA），因為MVA不能形成分開的、易辨認的噬斑，并且這種技術不需要利用篩選的標記