RTPCR實驗方法總結
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。 3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2+濃度、退火溫度能解決的。1）RT和PCR時的引物設計是不是一定要先知道目的基因的序列？必須在RT時，引物設計有3種方法即a：Random 9mers；b：Oligo dT-Adaptor Primer；和c：特異的下游引物。如果用a和b方法，是擴增的所有的cDNA（理論上），還要用此產物做PCR 的模板繼續擴增。如果用c方法，那么要去那里查它的序列呢？http://www.ncbi.nlm.nih.gov問題： 在做RT-PCR遇到一怪現象，即對同一動物不同組織擴增同一段基因，結果從一種組織中可以擴出我的目的基因，條帶非常的......閱讀全文
什么是RTPCR，RTPCR的定義與檢測方法？
1.定義：是以RNA為模板，聯合逆轉錄反應（reverse transcription，RT）與PCR，可用于檢測單個細胞或少數細胞中少于10個拷貝的RNA模板。?RNA擴增包括兩個步驟： 在單引物的介導下和逆轉錄酶的催化下，合成RNA的互補cDNA；加熱后cDNA與RNA鏈解離，然后與另一引物退火
全面總結！實驗室底釜的清洗方法
選擇針對實驗室反應釜釜內壁清理方法時，要考慮一下幾點： 一、必須了解污染物的類別，有針對的選用合適的清洗方法。應該注意的是溶劑蒸汽去油脂、超聲波清洗及水基清洗劑在內的溶劑洗滌，是用于去除油脂及蠟等污染物常用的方法。堿液、酸腐蝕等化學清洗是用于去除諸如油漆、積碳或用溶劑去除和化學清洗不能清除的其
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)5
室溫下充分混勻，離心10000g×2min。取上層液置另一0.5 ml離心管中，加入100μl氯仿，混勻，離心10000g×2min。將上層液轉移至另一0.5ml 離心管中，再加入3M NaAc 10μl、預冷無水乙醇250μl，混勻后，-20OC靜置30min。4OC離心13500g×10
淺談RTPCR實驗方法中常見污染問題及對策
李軻反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)是一種體外核酸擴增技術，它具有特異、敏感、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點，能在幾個小時內完成從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的目的產物供分析研究和檢測鑒定，所以近年來RT-PCR技術被廣泛應用于人和動物的多種傳染病早期診斷。 筆者一直
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)2
關于平臺期和線性期的問題，實際上線性期是指數期，只不過碰巧2的冥和2的倍數是相同的。看上去任何一個時期都可以，實際上是不對的，因為牽涉到酶促動力學的問題，這個我也不懂，有一些專門的文章，好像，涉及到很多化學的東西。我們學醫的，也沒必要知道那些，但是其中主要是因為模板引物酶原料和buffer之間的關系
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)1
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2+濃度、退火溫
淺談RTPCR實驗方法中常見污染問題及對策
李軻反轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）是一種體外核酸擴增技術，它具有特異、敏感、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點，能在幾個小時內完成從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的目的產物供分析研究和檢測鑒定，所以近年來RT-PCR技術被廣泛應用于人和動物的多種傳染病早期診斷。筆者一直從事實
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)4
3． 由于與反義RNA探針雜交的樣品RNA僅為該RNA分子的部分片段，因此，部分降解的RNA樣品仍可進行分析。4． 步驟較少，耗時短。與Northern雜交相比，省去了轉膜和洗膜的過程。5． RNA-RNA雜交體穩定性高，無探針自身復性問題，無須封閉。6． 一個雜交體系中可同時進行多個探針雜交，無競
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)6
可能問題出在標本的保存：一般四小時之內就應處理，分離出細胞說的是套式PCR,可以在你的第一次PCR兩個引物內,再設計一對引物進行第二次PCR就行了如果你的第一次PCR剛好包括目的片段,那只好設計個更長的了第二次的引物設計要求可以低一點以50μl體系為例引物各1μl第一次PCR產物5μl二次PCR和巢
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)3
4. 配制的溶液應盡可能的用0.1% DEPC，在37℃處理12hr以上。然后用高壓滅菌除去殘留的DEPC。不能高壓滅菌的試劑，應當用DEPC處理過的無菌雙蒸水配制，然后經 0.22μm濾膜過濾除菌。5. 操作人員戴一次性口罩、帽子、手套，實驗過程中手套要勤換。6. 設置RNA操作專用實驗室，所有器
Transwell侵襲實驗總結－（2）－實驗用品
我的課題涉及Transwell侵襲實驗和Transwell遷移實驗，其他方面的Transwell應用我不太清楚，因此這里主要談談Transwell侵襲實驗。1．實驗用品：① Transwell小室：多種廠家可提供，論壇里常用的是Costar、Corning、BD生產的小室，我們實驗室用的是Chemi
Transwell侵襲實驗總結－（4）
－Transwell的其他應用的實驗步驟1．Transwell腫瘤細胞遷移實驗過程與Transwell侵襲實驗基本一致，不同的只是不需要鋪Matrigel。個人認為，由于沒有基質膠的阻擋，細胞穿過膜的速度較侵襲實驗明顯加快，所以細胞量要更大。我做侵襲實驗的細胞密度是1×105，而遷移實驗的密度是1×
總結萃取的方法
概述萃取是利用系統中組分在溶劑中有不同的溶解度來分離混合物的單元操作，利用相似相溶原理，萃取有兩種方式：液-液萃取，用選定的溶劑分離液體混合物中某種組分，溶劑必須與被萃取的混合物液體不相溶，具有選擇性的溶解能力，而且必須有好的熱穩定性和化學穩定性，并有小的毒性和腐蝕性。如用苯分離煤焦油中的酚；用有機
ROS檢測方法總結
活性氧（reactive oxygen species，ROS）指來源于氧的自由基和非自由基，包含了超氧陰離子（O2?-）、過氧化氫（H2O2）、羥基自由基（?OH）、臭氧（O3）和單線態氧（1O2）等，由于它們含有不成對的電子，因而具有很高的化學反應活性。ROS在細胞生命，應激和死亡中具介導作用，
實驗室經驗實戰總結——實驗安全
1.進入實驗室要穿好工作服，不要存僥幸心里，如果，一不小心碰到酸，心愛的衣服燒個洞是小事，燒傷皮膚就麻煩了。不要嫌麻煩，一定要戴手套才做對身體有危害的實驗，要對自己的身體負責。2.實驗前后清潔洗手，如果，實驗中途去休息喝水的時候，也要洗手，不要以為剛才的實驗藥品沒什么毒性，生命很重要，小心為妙，另外
實驗室經驗實戰總結——實驗細節
1.實驗前的準備工作很重要，試驗前要準備充分，拿到任務應當進行簡單的思考，將試驗需要的各種試劑、試液、儀器以及試驗的流程、注意事項、以前試驗當中遇到的問題等想清楚，準備好，免得到時少東少西，自亂陣腳。第一次新實驗的話最好請教一下做過類似實驗的人,對于不常做的實驗最好做一份詳盡的試驗流程圖做時貼在試驗
RTPCR原理與實驗操作步驟3
八、PCR產物電泳先將1-10μl左右PCR產物，加已點在紙上的溴酸蘭，反復吸打混勻后進行電泳，一般電流為10mA，電源100V，電泳30分鐘，紫外燈下觀察，滿意的結果掃描打印。九、幾個注意點：1、逆轉錄的關鍵步驟是立即冰水浴？2、Rt時，先打開PCR預熱30分鐘。3、RNA抽提前，打開離心機預冷。
RTPCR－實驗原理及注意事項
一、實驗方法原理逆轉錄-聚合酶鏈反應 （Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR） 的原理是：提取組織或細胞中的總 RNA，以其中的 mRNA 作為模板，采用 Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成 cDNA。再以 cDN
RTPCR原理與實驗操作步驟1
一、知識背景：1、基因表達：DNA RNA Protein單拷貝基因表達存在逐步放大機制，如一個蠶絲心蛋白基因 104個絲心蛋白mRNA（每個mRNA存活4d，可以合成105個絲心蛋白） 共合成109個絲心蛋白 。因此單拷貝基因的mRNA表達水平對于其功能水平的調控是非常重要的。2、PCR技術(ol
RTPCR實驗操作的注意事項
在做Northern等雜交實驗、構建cDNA文庫、獲取能夠編碼真核生物蛋白的基因、獲得RNA病毒基因時，會用到RNA提取和RT-PCR技術。真核生物的基因組是DNA，為什么不直接從DNA PCR得到我們需要的基因呢？因為真核生物的基因含有大量的非編碼區，稱為內元（intron），真正編碼蛋白的區段是
RTPCR原理與實驗操作步驟2
二、實驗器具的處理與準備1、塑料制品：（包括槍頭、EP管、勻漿管等）先將DEPC水從容量瓶中倒入瓷缸中，將塑料制品逐個浸泡其中，其中小槍頭需要吸管打入DEPC水，過夜，然后高壓，再烤干備用，實驗前將槍頭等放入吸頭臺，再高壓一次（EP管）2、玻璃制品：泡酸過夜，沖洗干凈，蒙錫紙烤干備用（DEPC水泡）
實驗報告總結怎么寫
實驗報告總結示例如下：1、此次設計也讓我明白了思路即出路，有什么不懂不明白的地方要及時請教或上網查詢，只要認真鉆研，動腦思考，動手實踐，就沒有弄不懂的知識，俗話說的好，讀書破萬卷下筆如有神，沒有學不會只有不肯學！我堅信，只要下一番功夫就能有理想的收獲！2、通過這次實驗，讓我更加了解到地理信息系統原理
實驗室用水知識總結
? 今天和大家分享的產品知識是關于實驗室用水的，希望如下內容對大家有所幫助。 1.水的基本性質 1個水分子(H2O)是由1個氧原子和2個氫原子彎曲鍵結而成。由于正、負電荷的中心不一致，因此屬于極性分子。當2個水分子同時存在時，二者會由靜電交互作用與氫鍵結合，互相吸引并保持一定的距離。
【色譜實驗室】技巧總結
?常說的過柱子應該叫柱層析分離， 也叫柱色譜。 我們常用的是以硅膠或氧化鋁作固定相的吸附柱。由于柱分的經驗成分太多，就關于色譜柱的使用，小編搜集了一下資料，希望對您能有所幫助。?柱子可以分為：加壓，常壓，減壓。壓力可以增加淋洗劑的流動速度，減少產品收集的時間，但是會減低柱子的塔板數。所以其他條件相同
Transwell侵襲實驗總結－（1）－概念
這里想明確兩個概念，一個是Transwell，另一個是腫瘤細胞侵襲模型。1．Transwell關于Transwell這個詞該如何解釋，查了很多資料也未見準確的注解，我覺得可以這么理解吧，trans-這個詞根有轉移、轉運、穿過等意思，well有小室的意思，可以從字面上理解，這是一類有通透性的杯狀的裝置
實驗報告總結怎么寫
實驗報告總結示例如下：1、此次設計也讓我明白了思路即出路，有什么不懂不明白的地方要及時請教或上網查詢，只要認真鉆研，動腦思考，動手實踐，就沒有弄不懂的知識，俗話說的好，讀書破萬卷下筆如有神，沒有學不會只有不肯學！我堅信，只要下一番功夫就能有理想的收獲！2、通過這次實驗，讓我更加了解到地理信息系統原理
DNA膠回收實驗技術總結
膠回收一. 提高膠回收量的辦法：1) 增加電泳時的上樣量。2) 電泳緩沖液用新鮮配制的。3) 切膠時盡量只切有條帶的膠，減小切膠體積：含目的片斷很少的膠就不要要了，不然影響回收率。4) 把切的兩塊或多塊膠融化后，無論多大的體積都用一個管子，轉移到同一個柱子上。5) 溶膠時所加的溶液可多一點，這樣更有
Transwell侵襲實驗總結－（1）－概念
這里想明確兩個概念，一個是Transwell，另一個是腫瘤細胞侵襲模型。1．Transwell關于Transwell這個詞該如何解釋，查了很多資料也未見準確的注解，我覺得可以這么理解吧，trans-這個詞根有轉移、轉運、穿過等意思，well有小室的意思，可以從字面上理解，這是一類有通透性的杯狀的裝置
活細胞成像實驗總結，必看！
近年來，活細胞成像活躍于生物學的各個領域。在它的加持下，研究者們可以實時或者在一段時間內觀察細胞內部結構和細胞生理過程，從而加深對細胞運作過程的認識。但在各種實驗操作和成像條件下，想要成功做好活細胞成像實驗并不容易。1、實驗前我們先了解一下，什么是活細胞成像，它有哪些作用？通常，我們把使用延時成像技
RTPCR的定義與檢測方法
1.定義：是以RNA為模板，聯合逆轉錄反應（reverse transcription，RT）與PCR，可用于檢測單個細胞或少數細胞中少于10個拷貝的RNA模板。?RNA擴增包括兩個步驟： 在單引物的介導下和逆轉錄酶的催化下，合成RNA的互補cDNA；加熱后cDNA與RNA鏈解離，然后與另一引物退火