植物基因組總DNA的分離———SDS法
實驗方法原理SDS(十二烷基磺酸鈉)是一種強去污劑,可使細胞膜及核膜破裂,因此被用來分離DNA。該分離過程的第一步是用熱的去污劑(SDS)進行抽提,然后將抽提物置于0℃并加入高摩爾濃度的乙酸鉀,離心去除不溶物,以去除蛋白和多糖類雜質。實驗材料植物新鮮葉片試劑、試劑盒液氮提取緩沖液(用前加入)20%SDS(pH7.2)乙酸鉀5×TE緩沖液RNaseA乙酸鈉異丙醇TE緩沖液儀器、耗材天平研缽和研棒50ml 離心管恒溫水浴鍋冰盒冷凍離心機 ( 至少可達25 000×g)- 20℃冰箱Eppendorf 管微量移液器及吸頭微量離心機冰箱實驗步驟1.將2g新鮮植物葉片置于液氮中速凍,用研缽磨成細粉。2.將冷凍粉末轉移至一50ml離心管中并加入15ml提取緩沖液。輕輕旋轉混勻。3.加入1ml20%SDS,混勻,65℃保溫10min,并不時輕輕旋轉混勻。4.加入5ml 5mol/L乙酸鉀,混勻后冰上放置20～30min。5.25000×g,4......閱讀全文
植物組織制備基因組DNA實驗
實驗方法原理?加入一定量的異丙醇或乙醇，基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中， 可用玻棒將其取出，而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部， 從而達到提取的目的。實驗材料?植物組織試劑、試劑盒?抽提緩沖液十二烷基肌氨酸鈉TE異丙醇溴化乙錠氯化銫儀器、耗材?離心機實驗步驟 ? 收取1
植物組織制備基因組DNA實驗
氯化銫法 CTAB法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 加入一定量的異丙醇或乙醇，基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中， 可用玻棒將其取出，而小分子DNA則
海洋不同生境總基因組DNA的提取
實驗概要本實驗采用NaI/玻璃粉方法、溶菌酶與蛋白酶K/離心吸附柱方法以及試劑盒PowerSoil ?DNA Isolation Kit (MO BIO ?Laboratories，Inc.)三種方法對海洋岸邊土壤、海水以及沉積物三種樣品進行DNA抽提。為比較不同方法的抽提效果，采用分光光度計對DN
從總－RNA－中除去基因組－DNA－實驗
為了進行 FDD 基因表達的分析，以及使用任何其他基于 RNA 的基因表達技術，在反轉錄合成單鏈 cDNA 和后續的 PCR 操作之前，必須除掉污染的基因組 DNA。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒變性（甲醛)瓊脂糖凝膠瓊脂糖蒸餾水甲醛蒸餾水乙醇甲醛MOPS
從總－RNA－中除去基因組－DNA－實驗
從總 RNA 中除去基因組 DNA 實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 變性（甲醛)瓊脂糖凝膠 瓊脂糖 蒸餾
從總－RNA－中除去基因組－DNA－實驗
試劑、試劑盒?變性（甲醛)瓊脂糖凝膠瓊脂糖蒸餾水甲醛蒸餾水乙醇 甲醛MOPS 緩沖液乙二胺四乙酸MOPS乙酸鈉酚 氯仿（3:1) 溶液氯仿液體酚Tris-HCl電泳緩沖液儀器、耗材?離心機和轉頭離心管配膠板微波爐實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑變性（甲醛)瓊脂糖凝膠（配制過程見第 18步）
植物DNA提取實驗——機械法
植物DNA提取實驗用于：（1）獲得較純的真核細胞基因組DNA；（2）后續PCR分析，RFLP分析，基因文庫的構建，基因探測等的研究。實驗方法原理這是一種快速簡便提取植物總DNA的方法。先將新鮮的葉片在液氮中研磨，以機械力破碎細胞壁，然后加入十六烷三甲基溴化銨分離緩沖液，使細胞膜破裂。同時將核酸與植物
植物總DNA抽提方法和優缺點
1、植物DNA的CTAB提取法：經典方法。效果較好，污染少。多用于核基因組提取。2、SDS提取法：較為簡易，提取的為全基因組，但有蛋白污染可能。3、簡易“一管法”提取方法：4、PCR研究的快速提取法：以上兩者方法簡單，快速，但污染多，不適合做酶切等操作。5、酚類、多糖類物質較多的植物DNA提取法：多
植物基因組提取(CATB法)
一、實驗目的?掌握植物總DNA的抽提方法和基本原理。學習根據不同的植物和實驗要求設計和改良植物總DNA抽提方法。?二、實驗原理?通常采用機械研磨的方法破碎植物的組織和細胞，由于植物細胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對DNA的抽提產生不利的影響，在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強還原劑(如巰基乙醇)
采用改進的CTAB法提取細菌總DNA
實驗概要通過改進的CTAB法可快速簡便的提取細菌總DNA，通過本實驗可掌握CTAB法從細菌提取DNA的原理和方法。?實驗原理CTAB ?(hexadecyltrimethylammonium ?bromide，十六烷基三甲基溴化銨)，是一種陽離子去污劑，具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特
分離基因組DNA和質粒DNA有哪些不同之處
分離質粒時，可以將質粒去得很干凈。方法為：先用TE之類的試劑將菌液懸浮起來，再用NaOH和SDS將菌液裂解（起裂解作用的主要是NaOH，但此時，SDS可以與蛋白很好的結合）。第三步，加入酸中合第二步中的堿，并且將SDS沉淀下來，同時，SDS和蛋白也一起沉淀下來，而基因組上面有很多的蛋白，這樣基因組就
水稻總DNA的快速少量抽提CTAB法
DNA分子是分子生物學研究的基本材料，依不同的實驗目的可采取不同的抽提方法獲取數量和質量不等的 DNA 。 實驗目的：了解植物 ?DNA 抽提的主要方法，掌握 CTAB 法快速抽提水稻 DNA 。 實驗材料及試劑： 水稻 ?葉片，1.5 × CTAB ，氯仿 / 異戊醇 (24:1) ，
植物基因組DNA的RFLP多態性分析
一、原理DNA多態性是指DNA堿基順序的差異性。這種差異性不僅存在于不同的植物之間，也存在于同一種植物的不同個體之間。RFLP多態性是指DNA限制性內切酶酶切片段長度的多態性(restniction fragment length olymophorphism)。由于堿基順序的差異，在不同的
使用離心機提取植物基因組DNA
植物基因組DNA提取使用什么樣的離心機做?具體步驟怎么樣？植物組織提取基因組DNA 一、材料 幼嫩葉子。 二、設備 移液器，冷凍高速離心機，臺式高速離心機，水浴鍋，陶瓷研缽，50ml離心管（有蓋）及5ml和1.5ml離心管，彎成鉤狀的小玻棒。（這時選擇設備的時候注意選擇那種通用性強的，可以一機配多種
磁珠法提取基因組DNA的原理
(a) 磁珠法中的細胞裂解液是一種蛋白變性劑，可使動植物的細胞裂解，并使與DNA結合的蛋白質變性，DNA游離釋放，磁球可以特異地吸附DNA，通過洗滌，去除DNA以外的RNA、蛋白質等雜質，再因洗脫液解離吸附在磁珠上的DNA，得到純度和濃度均很高的DNA，可用于PCR擴增、酶切、分子雜交等。(b) 生
酵母基因組DNA的玻珠制備法
實驗概要本實驗利用玻珠制備法制備了酵母基因組DNA。主要試劑無菌水，裂解緩沖液，5mol/L NaCl，苯酚，氯仿：已戊醇(24：1)，乙醇，TE緩沖液，EDTA-Sark，蛋白酶K，5mol/L醋酸銨主要設備搖床，玻璃離心管，臺式離心機，玻珠，振蕩器，P-1000移液器，1.5ml離心管實驗步驟1
磁珠法提取基因組DNA的原理
(a) 磁珠法中的細胞裂解液是一種蛋白變性劑，可使動植物的細胞裂解，并使與DNA結合的蛋白質變性，DNA游離釋放，磁球可以特異地吸附DNA，通過洗滌，去除DNA以外的RNA、蛋白質等雜質，再因洗脫液解離吸附在磁珠上的DNA，得到純度和濃度均很高的DNA，可用于PCR擴增、酶切、分子雜交等。(b) 生
磁珠法提取基因組DNA的原理
a) 磁珠法中的細胞裂解液是一種蛋白變性劑，可使動植物的細胞裂解，并使與DNA結合的蛋白質變性，DNA游離釋放，磁球可以特異地吸附DNA，通過洗滌，去除DNA以外的RNA、蛋白質等雜質，再因洗脫液解離吸附在磁珠上的DNA，得到純度和濃度均很高的DNA，可用于PCR擴增、酶切、分子雜交等。(b) 生物
磁珠法提取基因組DNA的原理
(a) 磁珠法中的細胞裂解液是一種蛋白變性劑，可使動植物的細胞裂解，并使與DNA結合的蛋白質變性，DNA游離釋放，磁球可以特異地吸附DNA，通過洗滌，去除DNA以外的RNA、蛋白質等雜質，再因洗脫液解離吸附在磁珠上的DNA，得到純度和濃度均很高的DNA，可用于PCR擴增、酶切、分子雜交等。(b) 生
SDS法提取斑馬魚DNA詳細操作步驟及各步原理
原理：SDS：使細胞裂解，使與DNA雙鏈緊密相連的組蛋白分開和變性。EDTA：可以與鎂離子螯合，從而有助于阻止核酸分子間的聚集，及核酸與蛋白質分子的聚集，與SDS一樣，還可抑制核酸酶的活性。蛋白酶K：水解蛋白質，在SDS存在下活性增強，不受EDTA的抑制，在較高溫度下仍有活性。苯酚/氯仿：去除變性的
以硅膜為基礎分離基因組－DNA－實驗
硅化學法已成為從小鼠尾剪取物、動物組織和組織培養細胞等樣品中純化高質量基因組 DNA 的方法之一。Wizard SV 基因組 DNA 純化體系是利用一個充有固相硅的濾膜來純化 基因組 DNA 的。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒PBSNa2 HP04KH2P
以硅膜為基礎分離基因組－DNA－實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PBS Na2 HP04 KH2PO4 NaCl KC1 消化液 MasterMix 蛋白酶 K
以硅膜為基礎分離基因組－DNA－實驗
試劑、試劑盒 PBSNa2 HP04KH2PO4NaClKC1消化液 MasterMix蛋白酶 K儀器、耗材 自動定位器P250 盒裝吸頭 平板密封條Vac-Man96 真空裝置 真空泵實驗步驟 一、材料1.緩沖液、溶液和試劑1XPBS(用于組織培養細胞）將下列試劑溶解于1L消毒的去離子水中，高壓滅
植物總DNA提取過程中應該注意哪些問題
取樣的材料最要是新鮮的，而且取嫩葉，如果取老葉的話，含有較多的多糖和酚類物質等雜質，這樣加大了純化的難度。磨樣時最好是加液氮，磨樣速度要快。一般用酚和氯仿抽提兩次，吸取上清時，一定要小心，不要把白色物質吸入。抽提時不要有太力振動，操作也要仔細，盡量避免DNA斷裂。
酚/SDS法制備植物RNA
試劑、試劑盒 液氮 研磨緩沖液TLE 緩沖液平衡酚)氯仿IiCl 溶液 (DEPC 處理）乙酸鈉 (DEPC 處理） 無水乙醇DEPC 處理水儀器、耗材 Folytron 勻漿器（BrinkmarmPT10 35)實驗步驟 一 材料與設備1) 液氮2) 研磨緩沖液 18mol/LTris，0.09m
酚/SDS法制備植物RNA
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 液氮 研磨緩沖液 TLE 緩沖液平衡酚) 氯仿 IiCl 溶液 (DEPC 處理） 乙酸鈉 (DEPC 處理）
DNA的不同提取方法及比較
DNA的不同提取方法及比較傳統的DNA提取方法傳統的DNA 提取與純化,如 CTAB 法、SDS 法是在裂解細胞的基礎上,多次苯酚氯仿等有機溶劑抽提使蛋白質變性沉淀于有機相,而核酸保留在水相,達到分離核酸的目的;加入RNA 酶除去核酸中的RNA; 然后加入異丙醇、乙醇等沉淀DNA;用70
異硫氰酸胍酚法植物組織總RNA的制備
異硫氰酸胍—酚法提取RNA的原理如下：GIT與β－巰基乙醇共同作用抑制RNase的活性；GIT與 十二烷基肌氨酸鈉 （Sarcosyl）作用使蛋白質變性，從而釋放RNA；酸性條件下DNA極少發生解離，同蛋白質一起變性被離心下來，RNA則溶于上清中。該法所提 RNA純度高完整性好較適合純化mR
植物組織總RNA的制備：異硫氰酸胍—酚法
異硫氰酸胍—酚法提取RNA的原理如下：GIT與β－巰基乙醇共同作用抑制RNase的活性；GIT與 十二烷基肌氨酸鈉 （Sarcosyl）作用使蛋白質變性，從而釋放RNA；酸性條件下DNA極少發生解離，同蛋白質一起變性被離心下來，RNA則溶于上清中。該法所提RNA純度高完整性好較適合純化mRNA，
用于PCR的植物基因組DNA快速制備方法（一）
一種用于PCR的植物基因組DNA快速制備方法 來源：方統科技----------------------------------------------------------------------------------摘要： 本文介紹了一種用于PCR的植物基因組DNA的快速制備方法。該方法