生物院原代T細胞基因編輯和艾滋病基因治療研究獲進展
6月9日，基因治療領域權威雜志Human Gene Therapy在線發表了中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院陳小平課題組的最新研究成果。該研究首次利用最新的CRISPR/Cas9基因編輯技術，對人原代CD4+T細胞的兩個重要受體CXCR4和CCR5基因進行雙敲除，并對基因修飾過的T細胞進行體外的攻毒試驗，證明雙敲除的CD4+T細胞可以同時抵御X4-嗜性和R5-嗜性的HIV-1病毒株感染，為未來開展基于T細胞的艾滋病基因治療提供了更為高效和安全的技術平臺。該成果是博士研究生余松林等在導師陳小平指導下完成的。 CD4+T細胞是HIV-1感染人體的主要靶細胞，也是艾滋病基因治療的重要功能性細胞。CCR5是HIV-1感染CD4+T細胞的主要共受體。隨著病毒感染的推進，病毒嗜性從R5-嗜性向X4-嗜性轉變，并最終導致患者進展到AIDS期。因此，對于慢性期HIV-1感染者，同時敲除CXCR4和CCR5將可能阻斷任何單一嗜性和雙嗜性病......閱讀全文
新鮮組織分離原代細胞
新鮮手術取得或凍存的組織于37 ℃ 快速復溫，原代細胞培養工作液清洗3次，盡量修剪去除纖維組織，將組織塊剪成約1 mm3大小的小塊，彎頭吸管吸取組織塊均勻種植于75 cm2 培養瓶瓶底，瓶內加入少量原代細胞培養工作液，小心翻轉培養瓶使組織塊黏附于瓶底，置于37 ℃、5% CO2培養箱中培養6-8
原代細胞的培養介紹
生物為研究界提供各種高質量的正常人和動物細胞，細胞培養基和試劑，基因分析工具，細胞衍生的分子生物學產品，基于細胞的檢測試劑盒和干細胞產品。原代細胞的培養介紹原代細胞的培養是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養，此時的細胞保持原有細胞的基本性質，如果
細胞原代培養實驗
胰酶消化法 組織塊直接培養法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成
細胞原代培養實驗
胰酶消化法 組織塊直接培養法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成
原代細胞培養簡介
原代細胞（primary culture cell）是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的
原代細胞可轉染哪些
原代細胞可用來轉染 siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以內的小分子 RNA 和 DNA，可轉染絕大多數原代細胞。目前，無論國外還是國內，原代細胞的核酸轉染都是個熱點難題，市場還缺乏真正有效的商品化的原代細胞核酸轉染試劑。效轉染絕大多數原代細胞，獲得比較理想
細胞的原代培養
一、原代細胞培養原理原代細胞培養是將機體內的某組織取出，分散成單細胞，在人工條件下培養使其生存并不斷生長、繁殖的方法。借助這種方法可以觀察細胞的分裂繁殖、細胞的接觸抑制以及細胞的衰老、死亡等生命現象。 ? 幼稚狀態的組織和細胞，如：動物的胚胎、幼仔的臟器等更容易進行原代培養 ? 掌握無菌操作
什么是原代細胞分離？
原代細胞分離是指使用酶、螯合劑（常用EDTA）以及機械方法處理動物組織，使其分散為單細胞懸液樣品，后續在適當的培養體系下使分離的原代細胞進行生存、生長和繁殖的過程。針對不同物種的不同組織類型，其具體的操作流程也要進行調整，常規原代細胞分離流程為取樣→預處理→分離處理→過濾清洗→后處理。
原代細胞的培養方法
原代細胞的培養是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養，此時的細胞保持原有細胞的基本性質，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數。但實際上，通常把第一代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。??最常用的原代細胞的培養有組織塊培養和分散細胞培養。組織塊培
原代細胞如何傳代接種？
原代細胞（primary culture cell）是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的
原代細胞的培養方法
原代細胞接近和最能反映體內生長特性，適宜用于藥物敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。 原代細胞的培養，也叫初代培養，是從供體取得組織細胞在體外進行的*培養，是建立細胞系的首步，是一項基本技術。? 原代細胞的培養方法一般有以下4種： ① 組織塊培養法 組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培
原代細胞常用純化方法
人工純化是利用人為手段造成對某一細胞生長有利的環境條件，抑制其他細胞的生長從而達到純化細胞的目的。 1、細胞時間差酶消化法： 酶消化法是比較常用的純化方法，不僅對貼壁細胞可行，能利用上皮細胞和成纖維細胞對胰蛋白酶的耐受性不同，是兩者分開，達到純化的目的；另外對貼壁細胞與半貼壁細胞及黏附細胞
原代細胞傳代基本技術
1. 選用原代細胞生長狀態好（90－95％），生長數量大于5×10?進行傳代。2. 吸除原代細胞培養液。用含雙抗的1×PBS（pH7.4）清洗細胞培養瓶2次。3. 3ml細胞消化液加入細胞培養瓶，輕輕搖動，使細胞消化液覆細胞培養瓶底。（建議使用賽奧斯的原代細胞消化液。）4. 細胞培養瓶置于5%CO2
原代細胞凍存技術
1、選用生長情況好，數量較多的原代細胞，凍存前一天換液一次。2、貼壁細胞需用0.25％胰酶常規消化將細胞消化下來，將細胞懸液收集至離心管中。3、1000rpm離心5分鐘，棄上清液。4、沉淀加含DMSO的培養液，計數，調整至（1-10）×106?/ml。5、將懸液分至凍存管中，每管1 ml。6、密封凍
原代細胞分離與培養
對于大部分科研人員來說，研究中一般用到均是現成的細胞系/株，我們只需要：進行細胞傳代和保種。然而，這些細胞系常常由于體外長期培養，而丟失原有生物學特性，對藥物處理的反應差距越來越大。因此，原代細胞的地位日漸凸顯，Paper中若有了原代細胞的數據都會添色不少。然而，就小編親生經歷，原代細胞分離著實是個
新的機器學習模型預測CRISPRCas9編輯人原代T細胞的結果
近日，一項發表于Nature Biotechnology的題為"Large dataset enables prediction of repair after CRISPR-Cas9 editing in primary T cells"研究中，來自Chan-Zuckerberg Biohub
原代上皮細胞與原代成纖維細胞培養的分離純化
PriCells-原代上皮細胞與原代成纖維細胞培養的分離純化原代細胞、傳代細胞絕大多數都呈混合生長，既有上皮樣細胞又有纖維樣細胞，纖維樣細胞又包括成纖維細胞、肌細胞、骨細胞、滑膜細胞等。混雜的細胞會直接影響實驗結果。在體外培養原代細胞時，為了保證實驗結果的可靠性、一致性、穩定性、和可重復性，要求采用
原代上皮細胞與原代成纖維細胞培養的分離純化
原代上皮細胞與原代成纖維細胞培養的分離純化 PriCells-原代上皮細胞與原代成纖維細胞培養的分離純化 原代細胞、傳代細胞絕大多數都呈混合生長，既有上皮樣細胞又有纖維樣細胞，纖維樣細胞又包括成纖維細胞、肌細胞、骨細胞、滑膜細胞等。混雜的細胞會直接影響實驗結果。 在體外培養原代細胞時，為了保
原代細胞與細胞系的區別
細胞系是不斷生長,分化的細胞群,因其經過遺傳改造,致使其具有無限增長的潛能.體外生長的細胞系用于醫療或科研.實際上,連續細胞系可以用大量次培養基 培養,隨著代數的增加細胞的基因型和表型都有可能發生改變. 第一次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞
原代細胞與細胞株的區別
原代細胞培養最大優點是：細胞直接來源于機體組織，生物性狀尚未發生大的變化，在一定程度上能夠反映體內的狀態。細胞株和原代細胞不是完全一樣。并非每一種組織源性細胞都有相應的細胞株，有些細胞必須養原代，細胞株是來源于原代細胞，原代細胞導入了病毒增殖基因并轉變為細胞株，細胞株帶有癌變細胞的特點。細胞株的遺傳
原代細胞核膜的分離
1.?DNA酶Ⅰ；2.?KCl（1mol/L溶于20mmol/L Tris-HCl，pH7.4）；3.?MgCl2（1mol/L儲存液）；4.?苯甲基磺酰氟（PMSF）（無水乙醇配制的1mol/L儲存液）；5.?純化的細胞核；6.?緩沖液：2mmol/L Tris-HCl，pH7.4；7.?膜懸浮緩
原代細胞增殖優勢純化方法
自然純化是利用某一種類細胞的增殖優勢，在長期傳代過程中靠自然淘汰法，不斷排擠其他生長慢的細胞，靠自然增殖的潛力，最后留下生長優勢旺盛的細胞，達到細胞純化的目的。但這種方法常無法按照需要和實驗要求及研究目的來選擇細胞。此法花費時間長，留下的往往是成纖維細胞。僅有那些惡變的腫瘤細胞或突變的細胞可以通
細胞原代培養的分類
最常用的原代培養有組織塊培養和分散細胞培養。組織塊培養是將剪碎的組織塊直接移植在培養瓶壁上，加入培養基后進行培養。分散細胞培養則是將組織塊用機械法或化學法使細胞分散。如欲從胎兒或新生兒的組織分離到活性最好的游離細胞，經典的方法是用蛋白水解酶（如胰蛋白酶和膠原酶）消化細胞間的結合物，或用金屬離子螯合劑
原代細胞培養技術分類
一、組織塊直接培養法1、取材，用Hank's液洗滌三次，并剔除脂肪，結締組織，血液等雜物。2、用手術剪將組織剪切成1mm3左右的小塊，再用Hank's液洗三次。3、將組織塊轉移至培養瓶，并貼附于瓶底面。4、輕輕將培養瓶翻轉，瓶底朝上，向瓶內注入適量的培養液，將培養瓶放置在37℃恒溫箱
原代細胞的基本信息
原代細胞（primary culture cell）是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的生物
細胞的原代培養實驗
實驗方法原理 細胞培養(Cell culture)是模擬機體內生理條件，將細胞從機體中取出，在人工條件下使其生存、生長、繁殖和傳代，進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題的研究。近年來，廣泛地應用于分子生物學、遺傳學、免疫學、腫瘤學、細胞工程等領域，發展成一種重要生物技術，并取得顯著成就
正常小梁細胞原代培養
實驗材料：1.??? 材料來源：人眼、兔眼或者豬眼等；2.??? 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素，pH7.2；3.??? 器械：小梁剪與無齒鑷等；4.??? 消毒液：200IU/ml的慶大霉素生理鹽水；5.??? 培養液：基礎液由DME
原代細胞培養的應用
1、為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段； 2、為傳代培養創造條件； 3、服務于臨床實踐，用于藥物篩選等。
淺談原代細胞的培育辦法
一：安排塊培育法（1）依照前述辦法取材，將安排剪成或切成1mm3巨細的小塊，并參加少許培育基使安排濕潤。（2）將小塊均勻涂布于瓶壁，每小塊距離0.2 cm~0.5cm，一般在25mL培育瓶（底面積為17.5cm2）可接種20～30小塊為宜,小塊放置后,輕輕翻轉培育瓶,使瓶底朝上,然后于瓶內參加適量培
細胞原代培養的定義
原代培養是指由體內取出組織或細胞進行的首次培養，也叫初代培養。原代培養離體時間短，遺傳性狀和體內細胞相似，適于做細胞形態、功能和分化等研究。較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養，此時的細胞保持原有細胞的基本性質，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數。但實際上，通常把第一代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細