RNA在甲酰胺中的溶解保存

試劑、試劑盒 無水乙醇 異丙醇 的乙醇 甲酰胺 3mol L 的乙酸鈉

儀器、耗材 高速離心機 紫外分光光度計

實驗步驟

一材料與設備

所有的試劑配制均需采用經過蒸餾并消毒的去離子水。

1) 無水乙醇

2) 異丙醇

3)75% 的乙醇

4)100% 甲酰胺

5)3mol/L 的乙酸鈉

6) 高速離心機

7) 紫外分光光度計

二操作方法

1) 使用 CsCl 法，酸-苯酚法，TRIol 法或 RNaolB 法進行 RNA 的一步提取。

2) 用無水乙醇 (CsCl 法）或異丙醇 (其他方法）沉淀 RNA, 離心獲得 RNA 沉淀。

3) 用 75% 的乙醇清洗 RNA 沉淀以除去多余的鹽分。

4) 晾干，盡量吸去乙醇，并確保 RNA 中沒有多余的乙醇存在。

5) 用保存的 100% 甲酰胺重懸 RNA。甲酰胺的用量應視 RNA 沉淀的多少而定，通常用量在 10ul 到 1000ul 之間。

6) 大部分的 RNA 可立即溶解，可以在室溫放置 15 min，并用吸頭不時的上下吹打液體，以促進 RNA 的溶解。如果 RNA 的濃度很高，可以在 4℃ 放置過夜，以促進其完全溶解。

7) 定量時，將 1ul RNA 溶液稀釋到 500ul 水中，測量其 OD260 值

8) 如果樣品被過分稀釋了，可以像水溶的 RNA 樣品一樣進行乙醇沉淀濃縮，加水溶解后使用。

注意事項

1)當使用 CsCl 法進行 RNA 的提取時，更應注意 RNA 多余鹽分的去除。

2)“操作方法”第4)步中，RNA 不要過分干燥。

3)測量 RNA 的 OD 值時，應在空內對照中加入 1ul 甲酰胺，以消除 RNA 產物中由于甲酰胺的加入而帶來的可能的背景，