MD酶標儀在黃曲霉毒素定量檢測中的應用

一、黃曲霉毒素簡介

1.1 什么是黃曲霉毒素

黃曲霉毒素（AFT）是一類化學結構類似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生物。黃曲霉毒素是主要是由黃曲霉(Aspergillus flaw)、寄生曲霉(Aspergillus parasitwus)和集峰曲霉(Aspergillusnomius)產生的次生代謝產物，在中國，目前產生黃曲霉毒素的產毒菌種主要為黃曲霉。

黃曲霉毒素廣泛存在于自然界中，在濕熱地區食品和飼料中出現黃曲霉毒素的機率最高。它們存在于土壤、動植物、各種堅果中，特別是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麥等糧油產品，是霉菌毒素中毒性最大、對人類健康危害極為突出的一類霉菌毒素。按照目前毒性分級，動物半數致死量＜10mg/kg體重的物質為劇毒，而黃曲霉毒素B1的半數致死量僅為0.36mg/kg體重，屬特劇毒的毒物范圍。

2017年10月27日，世界衛生組織國際癌癥研究機構公布的致癌物清單初步整理參考，黃曲霉毒素在一類致癌物清單中。

1.2 發現黃曲霉毒素

1960年，英國發現有10萬只火雞死于一種以前沒見過的病，被稱為“火雞X病”，再后來鴨子也被波及。追根溯源，最大的嫌疑是飼料。這些火雞和鴨子吃的是花生餅。花生餅是花生榨油之后剩下的殘渣，富含蛋白質，是很好的禽畜飼料。這些花生餅被一種來自真菌的有毒物質污染，經過進一步研究和確認后，人們發現了是黃曲霉(Aspergillus.flavus)產生的有毒代謝物質，黃曲霉毒素(Aflatoxins)，是一種黃曲霉和寄生曲霉的代謝產物。

1.3 黃曲霉毒素的分類、化學結構以及物理化學特性

霉菌毒素有300種之多，其中包括黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮/F2毒素、赭曲霉毒素、T2毒素、嘔吐霉毒素/脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、伏馬霉素/煙曲霉毒素等。其中黃曲霉毒素(Aflatoxins)是到目前為止所發現的毒性最大的真菌毒素，目前已分離鑒定出B1、B2、M1、M2、G1、G2、P1、Q和H1等近20種于該類的毒素。它們的化學結構類似，都是二氫呋喃和香豆素的衍生物，其中黃曲霉毒素分子中的雙呋喃環結構是產生毒性的重要結構，不同類型黃曲霉毒素結構有所不同，其毒性(從大到小)也有所差異(B1、M1、G1、B2)。黃曲霉毒素主要有4種：即B1、B2、G1、G2，其中B1被認為是主要的有毒物質，有2種這些毒素的代謝產

物M1和M2。其中黃曲霉毒素B1主要存在于農產品，動物飼料，中藥等產品中；黃曲霉毒素M1是動物攝入黃曲霉毒素B1后在體內經羥基化代謝的產物，一部分從尿和乳汁排出，一部分存在于動物的可食部分，如乳、肝、蛋類、腎、血和肌肉中，其中以乳最為常見。黃曲霉毒素M1的毒性和致癌性與黃曲霉毒素B1的基本相似。其中黃曲霉毒素B1(CAS號1162-65-8)的分子式：

C17H12O6，分子量為：312.27

1.4 黃曲霉毒素的毒性以及臨床表現特征

1993年黃曲霉毒素被世界衛生組織(WHO)的癌癥研究機構劃定為1類致癌物，是一種毒性極強的劇毒物質，具有嚴重的致癌性、致畸性和致突變性。黃曲霉毒素-tRNA加成物能抑制tRNA與某些氨基酸結合的活性對蛋白質生物合成中的必需氨基酸，如賴氨酸亮氨酸，精氨酸和甘氨酸與tRNA的結合均有不同的抑制作用，從而在翻譯水平上干擾了蛋白質生物合成影響細胞代謝。其毒性相當于氰化鉀的10倍，砒霜的68倍。動物攝入黃曲霉毒素后，在肝臟中分布最多，含量可為其他器官組織的5-15倍。腎、脾和腎上腺中亦可檢出，血液中有極微量，肌肉中一般檢不出，如果黃曲霉毒素如不連續攝入，一般不在體內蓄積。由于其對人及動物肝臟組織有破壞作用，嚴重時可導致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中以黃曲霉毒素B1最為多見，其毒性和致癌性也最強。黃曲霉毒素含量在30~50μg/kg時為低毒，50~100μg/kg時為中毒，100~1000μg/kg時為高毒，1000μg/kg以上為極毒。黃曲霉毒素中毒的癥狀一般為一過性發燒、嘔吐、厭食、黃疸、腹水、下肢浮腫等肝中毒癥狀，嚴重者出現暴發性肝功能衰竭、死亡。有三種臨床表現特征，即急性中毒、慢性中毒和致癌性；黃曲霉毒素其純品為無色結晶，在紫外線下黃曲霉毒素B1、B2發藍色熒光，而黃曲霉毒素G1、G2 發綠色熒光。黃曲霉毒素的相對分子量為312-346。難溶于水，易溶于油，甲醇丙酮和氯仿等有機溶劑，但不溶于石油醚己烷和乙醚中。一般在中性溶液中較穩定，但在強酸性溶液中稍有分解，在pH9-10的強堿溶液中迅速分解。耐高溫黃曲霉毒素B1的分解溫度為268℃紫外線對低濃度黃曲霉毒素有一定的破壞性。

? 急性中毒：它的毒害作用，無論對任何動物，肝臟變化，呈急性肝炎、出血性壞死、肝細胞脂肪變性和膽管增生。脾臟和胰臟也有輕度的病變。

? 慢性中毒：其主要變化特征為肝臟出現慢性損傷，如肝實質細胞變性、肝硬化等。出現動物生長發育遲緩，體重減輕，母畜不孕或產仔少等系列癥狀。

? 致癌性：可誘發多種癌，AFT主要誘發肝癌，還可誘發胃癌、腎癌、淚腺癌、直腸癌、乳腺癌，卵巢及小腸等部位的腫瘤，還可出現畸胎。