電泳出現拖尾現象,英文成為smear,就是彌散.其原因,主要從以下兩個方面考慮:
1、PCR產物自身原因:
往往由于酶量過多或酶的質量差,dNTP濃度過高,Mg2+濃度過高,退火溫度過低,循環次數過多,而造成PCR的非特異性產物 過多.
對策:①減少Taq酶的量,或調換另一來源的酶.②減少dNTP的濃度.③適當降低Mg2+濃度.④增加模板量,減少引物的用量 ,減少循環次數,提高退火溫度.
2、電泳體系的問題:
(1)電泳緩沖液TAE或者TBE的污染,建議更換緩沖液.(2)上樣時樣品漂了,建議增加上樣緩沖液的用量,以及小心加樣.(3)電壓太高.(4)適當把你的膠的濃度加大.(根據你的片斷大小而定)(5)觀察你的marker是否也存在拖尾現象,作為對照.
K、放大器不佳,電容充放電不好。......
J、進樣口汽化室溫度太低;......
I、汽化室死體積過大;......
G、色譜柱嚴重流失或污染;......
F、色譜柱安裝不正確;......
E、載氣系統漏氣;......
D、載氣流速過高;......
C、襯管未脫活,造成待測物被吸附后逐步釋放;......
B、進樣器污染或者汽化室的襯管堵塞;......
前沿陡峭、后沿較前沿平緩的不對稱峰,稱為拖尾峰。氣相色譜儀中,常見的吸附色譜法(利用吸附表面對不同組分物理吸附性能的差別,而使之分離的色譜法稱為吸附色譜法),如果吸附等溫線為非線性,當進樣試樣量超過一......