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  • 發布時間:2020-06-03 11:16 原文鏈接: AgilentmiRNA芯片在各類樣本中的應用(二)

    3. 細胞樣本

    細胞作為常用的實驗材料,在生物及臨床研究中被廣泛應用,尤其是對于癌癥的研究具有重要意義。細胞培養技術可以把來自機體的組織經分散成為單個細胞,放在類似于體內的體外環境中生長、繁殖或傳代,從而用于觀察細胞的各種生命現象。細胞可以用于細胞工程與細胞癌變等重要問題的研究。癌細胞體外培養是研究癌變機理和癌細胞行為的主要方法,為腫瘤病因學、遺傳學、分子生物學和藥理學等研究提供便利的條件。細胞的癌化可能與原癌基因的活化或者抑癌基因的功能受阻有關。MiRNA作為重要的基因表達調控因子,可以起到類似抑癌基因或者原癌基因的作用,也因此通過腫瘤細胞樣本,可以對腫瘤發生、發展或轉移過程中的miRNA表達進行研究,使用Agilent miRNA芯片可以研究腫瘤細胞或其他細胞系中miRNA的表達譜,對腫瘤或其他細胞中miRNA相關功能研究提供了理想工具。

     

    伯豪客戶利用Agilent miRNA芯片技術,檢測了多種腫瘤細胞的miRNA表達譜,通過與正常細胞的比較,發現miRNA可以參與多種腫瘤細胞的調控,為研究腫瘤產生的分子機制和藥物治療提供了重要信息。

     

    伯豪案例選摘:

    乳腺癌細胞系:

    Cai J, Guan H, Fang L, Yang Y, Zhu X, Yuan J, Wu J, Li M. MicroRNA-374a activates Wnt/β-catenin signaling to promote breast cancer metastasis. J Clin Invest. 2013 Feb; 123(2):566-79.

     

    神經膠質瘤細胞系:

    Jiang L, Lin C, Song L, Wu J, Chen B, Ying Z, Fang L, Yan X, He M, Li J, Li M. MicroRNA-30e* promotes human glioma cell invasiveness in an orthotopic xenotransplantation model by disrupting the NF-κB/IκBα negative feedback loop. J Clin Invest. 2012, 122(1):33-47.

     

    肝癌細胞系:

    Zhu K, Pan Q, Zhang X, Kong LQ, Fan J, Dai Z, Wang L, Yang XR, Hu J, Wan JL, Zhao YM, Tao ZH, Chai ZT, Zeng HY, Tang ZY, Sun HC, Zhou J. MiR-146a enhances angiogenic activity of endothelial cells in hepatocellular carcinoma by promoting PDGFRA expression. Carcinogenesis. 2013, 34(9):2071-9.

     

    4.細胞微粒Microparticles

    細胞微粒(microparticles, MPs),也稱微囊泡,是各類細胞遭受一系列應激(激活或凋亡)時,從細胞漿膜上脫落而釋放的一些膜性小囊泡.研究證實,紅細胞、白細胞、內皮細胞、平滑肌細胞、腫瘤細胞等均可釋放細胞微粒,并以其細胞表面標記來分類這些微粒.它是一種球形結構的、直徑在0.1~1μm的異源群體,攜帶有其親代細胞的特異性抗原的磷脂囊泡,通過出芽方式釋放.健康人外周血中也存在一定微粒,其中血小板來源的微粒占總體的70%~90%。研究正常健康人群和腫瘤患者的細胞微粒的miRNA表達譜,也可以找到細胞微粒中特有的miRNA特征物,從而研究腫瘤的類型及相關發生機制。

     

    伯豪案例選摘:

    Li D, Jia H, Zhang H, Lv M, Liu J, Zhang Y, Huang T, Huang B.

    TLR4 signaling induces the release of microparticles by tumor cells that regulate inflammatory cytokine IL-6 of macrophages via microRNA let-7b.Oncoimmunology. 2012, 1(5):687-693.

     

    5.血漿/血清樣本

    人體除了一般的細胞組織會表達miRNA之外,研究還表明在血清血漿內,miRNA一般不會被內源性RNase 降解,且在惡劣的條件下(如高溫,較低或較高的pH環境,以及多次凍融)仍能以一種非常穩定的形式存在。而且,正常人和不同疾病患者血清/血漿中miRNA的表達譜,也會隨著生理狀況、疾病種類及病程的不同而發生特異性變化。血清血漿中miRNA含量普遍較低,且個體間差異較大,Agilent miRNA芯片可以使用較低的起始總RNA(miRNA)進行試驗,并得較為穩定的檢出率。現在,Agilent miRNA芯片已經被較多地應用于疾病miRNA生物標志物的篩選。伯豪客戶也發表了一系列較高質量的相關文章,發現了很多有重要意義的無創血清血漿miRNA標志物。

     

    伯豪案例選摘:

    血漿樣本:

    復旦大學附屬中山醫院、復旦大學肝癌研究所樊嘉教授領銜的課題組在肝癌早期診斷方面的研究取得突破。他們從不同人群血漿中篩選到了由7個miRNA組成的早期肝癌診斷分子標記物,將其整合后建立起診斷模型,可用來成功“區分”健康人、慢性乙肝患者、乙肝肝硬化患者和肝癌患者;對小于2厘米的肝癌,檢出率更接近九成。

     

    許多研究表明,在肝癌和癌旁正常組織之間存在miRNA表達譜的差異。另外,研究發現在人類血清血漿中存在大量穩定的miRNA。這些現象表明,大家可以尋找肝癌患者血清血漿中高含量的miRNA,以此作為生物標志物進行肝癌的早期診斷。在本研究課題中,研究人員利用miRNA芯片篩選、RT-PCR驗證等方法尋找到7個miRNA的組合,這一組合能對乙型肝癌(hepatitis B virus related HCC)患者進行早期診斷。相關成果發表在2011年12月的《Journal of Clinical Oncology》上。miRNA生物芯片技術服務由上海伯豪生物技術有限公司/生物芯片上海國家工程研究中心完成

     

    伯豪案例:

    Zhou J, Yu L, Gao X, Hu J, Wang JP, Dai Z, Wang JF, Zhang ZY, Lu SH, Huang XW, Wang Z, Qiu SJ, Wang XY, Yang GH, Sun HC, Tang ZY, Wu Y, Zhu HG, Fan J. Plasma MicroRNA Panel to Diagnose Hepatitis B Virus–Related Hepatocellular Carcinoma. J Clin Oncol. 2011.38.2697. 


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