摘 要：采用高速逆流色譜法分離純化大豆異黃酮中的大豆苦和染料木昔。溶劑系統為乙酸乙酯一醋酸一水，體積比為5:1:10，上相為固定相，下相為流動相，逆流色譜儀轉速為800r/mm，流速為1.5ml/min。所得大豆昔、染料木昔經高效液相色譜分析測定，純度分別達到98.2%
高速逆流色譜( H S C C C ) 是20 世紀8 0 年代初，由Yoichiro Ito博士發明的一種不用固態載體的液液分配色譜新技術，能實現連續有效的分配功能[ 1 ] 。由于不使用固態載體，可避免分離樣品與固態載體表面發生化學反應而導致的化學變性、有機物的吸附污染等現象，并且被
分離樣品成分具有高回收率。每次分離樣品結束后，管道中殘留溶劑均可沖出，不會對后續分離產生任何影響。高速逆流色譜法已在天然藥物化學成分、天然產物的分離等方面得到大量的應用，并在稀土元素、大分子物質等方面也有許多應用報道，包括黃酮類化合物。兒茶素、皂苷、蛋白質、氨基酸、生物堿等[ 2 ] 。
大豆異黃酮是大豆中的一種特殊生物活性成分，流行病學調查、動物實驗和癌細胞培蕎實驗均證實大豆異黃酮具有眾多的生物活性功能，包括抑制乳腺癌、前列腺癌、白血病及一些肝癌、胃癌細胞系的生長和增殖，對抗膽固醇。保護心血管、預防動脈栓塞，預防骨質疏松，提高畜禽生產機能，調節女性經期不適[ 3 ] 。大豆異黃酮的含量，因品種、生長地區的不同而有較大的差異[4～6]。品種是異黃酮含量的重要影響因素，但無論什么品種的大豆，大豆苷、染料木苷及其丙二酸化形式的糖苷均是大豆籽粒中的主要成分[7]，常規的加熱即可實現丙二酰化形式異黃酮糖苷向大豆苷和染料木苷的轉化[8]。異黃酮苷元及乙酸化形式的異黃酮糖苷、黃豆黃苷、丙二酰
化黃豆黃苷的含量均很低。全豆和大豆配料中，9 7 %～9 8 % 的異黃酮是以葡萄糖苷形式存在，含量范圍為0 .12%～0.42%[7][9]。因此，本文以大豆中含有的主體成分——大豆苷和染料本苷為目標，研究分離制備方法。
提取純化大豆異黃酮的方法，主要有溶劑提取法、堿提取酸沉淀法、活性炭吸附法、離于交換樹脂法、柱層析法、制備型高效液相色譜法、逆流色譜法等[ 1 0 ～1 6 ]。但是前面5 種方法中，只能分離得到較高純度的異黃酮，其中還含有多種組分；制備型高效液相色譜法雖然能分離
得到異黃酮單體，但是處理樣品量太小，一般為數十毫克量級[13]；近年來有極少數關于逆流色譜法分離大豆異黃酮的報道。大豆異黃酮的制取，一般將大豆片或脫脂大豆片經水、醇等溶劑浸提，加熱、分離溶出液得粗異黃酮制品，再經色譜柱或其他方法精制得高純度異黃酮制品；也可將溶出液經超濾膜等分離，透過液冷卻、結晶化，再經離心分離或過濾得異黃酮結晶物；或者用樹脂吸附，再經水、醇溶劑淋洗，溶出一定濃度的異黃酮，真空干燥得到異黃酮制品。但是，目前這些方法生產的大豆異黃酮均是粗品，包含大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素，以及它們的苷元、乙酰化和丙二酰化形式等成分，總含量約為40% 或80%，此外還含有其它雜質。杜琪珍等[ 1 5 ]報道了逆流色譜法分離大豆異黃酮的方法，但所使用的六元溶劑系統(正己烷－乙酸乙酯－正丁醇－甲醇－乙酸－水，1:2:1:1:5:1，V/V/V/V/V/V)極為復雜。楊福全等[16]采用分步分離法，分別用三種溶劑系統分離大豆異黃酮的方法，也極為復雜。本實驗直接針對大豆中的主要異黃酮組分，采用HSCCC，選擇更為適當和簡單的溶劑體系，從大豆異黃酮粗品中直接分離制備大豆昔和染料木苷( 另兩種主要的丙二酰化形式的糖苷，可通過簡單的加熱轉化為這兩種成分) ，為大規模制備大豆異黃酮類單體化合物提供更為便捷的方法，也為HSCCC 分離相似的化合物提供實施例和可參考的技術。