一、范圍
本標準適用于動物食品中5種α2受體激動劑的制備和高效液相色譜串聯質譜法測定5種α2受體激動劑本標準適用于豬肌肉、肝、腎組織和雞肌肉、肝組織中替扎尼定、血清鋅、溴甲胺、氨丙啶和可樂定殘留量的測定。
二、原理
用碳酸鈉緩沖液乙酸乙酯提取樣品中殘留的α2受體激動劑，固相萃取柱純化，高效液相色譜-串聯質譜法測定，外標法定量。
三、試劑和材料
除另有規定外所有試劑均為分析純水為GB/T 6682規定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1乙腈（CH3CN）的色譜純度為純。
3.1.2甲酸（HCOOH）：色譜純。
3.1.3甲醇（CH3OH)
3.1.4氨（NH 4 OH
3.1.5無水碳酸鈉(Na2CO3)
3.1.6碳酸氫鈉（NaHCO 3）
3.1.7乙酸乙酯（CH3COC2H2H5）
3.2 溶液配制
3.2.1碳酸鈉溶液：取無水碳酸鈉10.6g用水溶解稀釋至100ml。
3.2.2碳酸氫鈉溶液：8.4g碳酸氫鈉溶于水稀釋至100mL。
3.2.3碳酸鈉緩沖液：取90毫升碳酸鈉溶液和10毫升碳酸氫鈉溶液混勻立即使用。
3.2.4甲酸溶液（0.2%）：1mL溶于水的甲酸稀釋至500mL。
3.2.5甲酸乙腈溶液：取0.2%甲酸溶液80毫升加乙腈20毫升混勻。
3.2.6氨甲醇溶液（5%）取氨水5mL用甲醇溶解稀釋至100mL。
3.3標準品：鹽酸替扎尼定,鹽酸西拉嗪,溴硝定,鹽酸氨芐定,鹽酸可樂定含量≥98%。
3.4 標準溶液制備
3.4.1標準儲備液：鹽酸替扎尼丁,鹽酸薩拉齊定,鹽酸溴莫尼丁,鹽酸安普魯丁和鹽酸可樂定.分別用甲醇溶解和稀釋.在10 mL瓶中制備鹽酸替扎尼丁.鹽酸沙拉嗪.鹽酸溴莫尼丁.鹽酸安培定和鹽酸可樂定.在10 mL瓶中制得鹽酸替萘啶.氯化鈉.鹽酸溴西定和鹽酸可樂定.保質期為6個月。
3.4.2混合標準工作液：在100 mL瓶中用甲醇溶解稀釋，制得標準工作液1mL，制得濃度為10μg/mL的混合標準工作液。2-8℃保存1個月。
3.4.3標準曲線的制備：分別用0.5μg/L、10μg/L和100μg·L配制標準工作液，用甲酸-乙腈溶液稀釋，形成一系列混合標準工作液。用0.5、10、50和100μg·L混合標準溶液配制標準工作液。
3.5 材料
3.5.1固相萃取MCX柱：60mg/3ml或等效物。
3.5.2濾膜：有機相，0.22μm。
四、儀器和設備
4.1高效液相色譜串聯質譜儀：分布噴霧電離源。
4.2分析天平：0.00001g和0.01g。
4.3 均質機。
4.4 離心機。
4.5 渦旋振蕩器。
4.6 旋轉蒸發儀。
4.7 固相萃取裝置。
4.8 雞心瓶。
4.9 離心管：50 mL。
五、測定步驟
5.1 提取
取供試品2g（精確至±20mg），置50ml離心管中，加碳酸鈉緩沖液5ml，搖勻，加乙酸乙酯10ml，充分搖勻，8000 r/min離心5min，取上清液于雞心瓶中。在下層溶液中加入醋酸乙酯10ml，重復提取一次，上清液合并兩次在55°C蒸發至干燥，用甲酸-乙腈溶液4.0mL溶解殘渣，備用..
5.2 凈化
分別用3ml甲醇和3ml水活化mcx柱。取立柱備用液，分別用3mL水和3mL甲醇洗滌，擠壓至干燥，用氨水洗脫6mL，收集洗脫液，在60°C旋轉，蒸發至干燥，用1.0mL甲酸-乙腈溶液溶解殘渣，過濾，進行高效液相色譜串聯質譜法。
5.3 測定
5.3.1 色譜條件
a色譜柱：C18（100 m×3.0 mm，粒徑1.8μm）或等效物；
b柱溫：30℃；
c進樣量：10 ? L；
d流速：0.3 mL/min；
e流動相：A：乙腈；B：0.2％甲酸溶液，梯度洗脫過程示于表1中。
5.3.2 質譜條件
a離子源：電噴霧離子源；
b掃描方式：正離子掃描；
c檢測方式：多反應監測；
d離子源溫度：150℃；
e脫溶劑溫度：500℃；
f毛細管電壓：3.0 V；
g定性離子對定量離子對錐孔電壓和碰撞能量見表2。
5.3.1定量測定
取樣品溶液及相應的標準工作溶液，按外標法定量峰面積。標準工作液和樣品溶液中α2受體激動劑的響應值應在儀器檢測的線性范圍內在上述條件下，α2受體激動劑標準溶液的特征離子質量色譜見
六、結果計算和表述
試料中待測藥物的殘留量按式（1）計算：
式中：
X-試驗材料中相應的HE2受體激動劑殘基以微克/千克（單位g/kg）為單位。
Cs——標準溶液中α2受體激動劑的相應濃度，單位為μg/L（μg/L）；
在樣品溶液中，對應的或2受體激動劑的色譜峰面積。
A S——標準溶液中α2受體激動劑的對應峰面積；
v-用于溶解殘留在毫升(ML)中的溶液的體積；
m——供試試料質量，單位為克（g）；
從計算結果中扣除空白值，用平行測量的算術平均值表示測量結果，并保留兩位有效數字。