1、原理
利用不同的增菌培養基,提供給 E.coli O157:H7 ,迅速復活和生長所必須的營養物質及其他因素(利用 REVEAL 培養基,可以在8h 得到檢測結果。其他培養基如《FDA 細菌分析手冊》推薦的增菌培養基也可用于檢測卡檢測,允許檢測時間在20h 內)取一部分(120μL)經增菌培養的培養液于檢測卡的圓形樣品孔中,樣品則被涂有膠體金標記的抗 E.coli O157:H7 ),則與膠體金標記的抗體結合,并離開樣品區沿著硝酸纖維素膜流向涂有抗 E.coli O157:H7 ,抗體的檢測區,此時免疫復合體被捕獲并聚集,顯示出一條檢測色帶。無論樣品中是否含有 E.coli O157:H7 ,樣品剩余液繼續流向膜頂端的試劑區該試劑區含有膠體金標記的合適抗原(顏色指示)形成陰性對照質控區,樣品流經此區時被捕獲并聚集顯示出一條質控色帶。質控帶的出現可證明檢測過程正常,如下圖所示。
2、儀器設備及試劑
E.coli O157:H7 ,檢測試劑盒(如REVEAL E.coli O157:H7 ,檢測系統,VIP Test,BINAX NOWTMEH E.coli 檢測卡等)增菌培養基[REVEAL 8h,REVEAL 20h,FSIS 的修改的 EC 肉湯+新生霉素(mEC+N)等],細菌培養箱,滅菌吸管,樣品均質器。
3、操作方法
①樣品制備
同常規方法。
②增菌培養
選用適宜的增菌培養基或由試劑盒配用的培養基根據試驗要求選擇增菌時間(8~20h)。
③檢驗
取適量增菌液(約150μL)滴入檢測卡的樣品孔中,靜置約5min,從視窗觀察結果,在檢測區和質控區同時出現色帶的為陽性;僅質控區出現色帶的為陰性。上圖中詳細操作可參照各種試劑盒的操作說明。