造成PCR假陰性的原因

PCR的假陰性在檢驗工作中仍很嚴重，并且用些因素經常 被人忽略，嚴重的影響了PCR的使用。可以想象一種假陽性和假陰性都很高的項目，有什么樣的診斷價值。造成PCR假陰性的原因是復雜 的，也是多樣的。主要有：1.PCR儀本身的質量問題。PCR儀設計原理上的差異和經常出現的質量問題（如：溫控不準等）給臨床帶來 了諸如非特異性擴增（假陽性）、擴增效率下降(假陰性）等問題.2.離心機問題。離心機的質量或使用不正確，造成離心標本模板沒有分 離出來造成假陰性，竊以為這是最易被忽視的問題。其時離心機使用問題不僅在PCR，在整個檢驗工作中都是最易被忽視的問題，只是因為在其他工作中不象 PCR那樣明顯影響檢測結果罷了。離心機是常用的固液分離設備，其利用離心過程中的離心力而將密度不同的物質分離出來。因此離心機的 關鍵在于離心加速度而不是轉速，根據牛頓定律可知離心力加速度與轉速和有效半徑的有關的，因此對于不同有效半徑的離心機相同的轉速其離心加速度是不同的， 轉速的調節要因離心機而異，但很遺憾，日常工作中忽視了這個問題。有效半徑短的離心加速度就小，同樣的時間離心效果就差可能造成分離不出導致假陰性。同時 由于高速離心機高速旋轉與空氣摩擦會產生大量的熱，因此對于稱能上幾萬轉/分而沒有抽真空的離心機實際轉速本人持懷疑態度。3.試劑 開殼劑和操作問題造成標本DNA沒有暴露出來，致使擴增無法進行，這是造成假陰性的又一主要因素。